检索结果-南通市图书馆

lncrna gas5通过miR-18a-5p/AXIN2/GSK3β轴抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

LncRNA GAS5通过miR-18a-5p/AXIN2/GSK3β轴抑制膀胱癌细胞的增殖...

作者：张泽皖南医学院

学位级别：硕士

目的:（1）通过qPCR检测lncrna gas5和miR-18a-5p在膀胱癌中的表达情况。（2）通过平板克隆实验和EdU实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌增殖能力的影响。（3）通过transwell实验和划痕实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌... 详细信息

目的:（1）通过qPCR检测lncrna gas5和miR-18a-5p在膀胱癌中的表达情况。（2）通过平板克隆实验和EdU实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌增殖能力的影响。（3）通过transwell实验和划痕实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌迁移能力的影响。（4）探究lncrna gas5与miR-18a-5p之间的调控关系。（5）探究miR-18a-5p调控膀胱癌增殖能力和迁移能力的下游途径。方法:（1）使用EdU实验和平板克隆形成实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌增殖能力的影响。（2）使用Transwell实验和划痕实验检测lncrna gas5和miR-18a-5p对膀胱癌迁移能力的影响。（3）qPCR检测lncrna gas5和miR-18a-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达情况。（4）使用核质分离实验和荧光原位杂交（FISH）试验,以检测lncrna gas5在细胞中的定位。（5）使用Ch Irp,RNA免疫沉淀（RIP）和双荧光素酶试验来确定gas5与miR-18a-5p的结合以及miR-18a-5p与AXIN2和GSK3β的结合。（6）蛋白印迹技术和免疫组化用于检测蛋白质水平的变化。结果:（1）与正常粘膜组织和正常膀胱上皮细胞相比,lncrna gas5在膀胱癌组织和细胞中的表达明显下调,而miR-18a-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达明显上调。（2）核质分离实验和荧光原位杂交（FISH）试验结果显示lncrna gas5主要分布在细胞质中,表明lncrna gas5的主要是通过ce RNA机制调控膀胱癌的发生发展。（3）过表达lncrna gas5后膀胱癌细胞的增殖能力和迁移能力明显受到抑制,而干扰lncrna gas5表达后,膀胱癌细胞增殖能力和迁移能力明显增加。表明lncrna gas5在膀胱癌中是抑癌基因。（4）通过Ch Irp,RNA免疫沉淀（RIP）和荧光素酶试验表明:lncrna gas5可以与miR-18a-5p靶向结合。（5）过表达miR-18a-5p后膀胱癌细胞增殖能力和迁移能力明显增加,而干扰miR-18a-5p表达后膀胱癌细胞的增殖能力和迁移能力明显受到抑制。表明miR-18a-5p在膀胱癌中是促癌基因。（6）荧光素酶实验结果表明,miR-18a-5p可以靶向结合AXIN2和GSK3β。（7）逆转实验结果显示,过表达lncrna gas5可以逆转miR-18a-5p过表达引起的膀胱癌细胞增殖、迁移能力和Wnt/β-cantein通路活性增强,也可以逆转miR-18a-5p过表达造成的AXIN2和GSK3β表达降低。（8）裸鼠成瘤实验证明在体内过表达lncrna gas5可以逆转miR-18a-5p过表达引起的膀胱癌细胞增殖、迁移能力和Wnt/β-cantein通路活性增强,也可以逆转miR-18a-5p过表达造成的AXIN2和GSK3β表达降低。结论:（1）lncrna gas5作为抑癌基因可以抑制膀胱癌增殖迁移。（2）miR-18a-5p作为促癌基因可以促进膀胱癌增殖迁移。（3）lncrna gas5可以靶向miR-18a-5p进而调控膀胱癌的增殖能力和迁移能力。（4）miR-18a-5p可以同时与AXIN2和GSK3β靶向结合从而调控Wnt通路的活性,进而调节膀胱癌增殖迁移能力。（5）lncrna gas5有望成为膀胱癌的的分子标志物,为治疗膀胱癌提供了一种新的潜在治疗策略。

关键词： lncrna gas5 miR-18a-5p 膀胱癌增殖和迁移

lncrna gas5靶向miR-223-3p/NLRP3轴调控冠状动脉微栓塞致心肌损伤的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

LncRNA GAS5靶向miR-223-3p/NLRP3轴调控冠状动脉微栓塞致心肌损...

作者：李涛广西医科大学

学位级别：硕士

冠状动脉微栓塞(Coronary Microembolization,CME)是急性冠脉综合征(Acute Coronary Syndrome,ACS)患者冠状动脉粥样硬化斑块自发破裂,或者经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous Coronary Intervention,PCI)过程中器械挤压斑块后形成的斑块碎片脱落并随血液流至冠脉微循环所致。CME常导致冠脉微循环障碍,是临床常见并发症之一。CME可引起冠脉“无复流”或“慢血流”,最终导致冠脉血流储备减少、心肌收缩功能减退、心肌损伤等严重影响患者预后的不良后果。因此,深入研究冠状动脉微栓塞致心肌损伤的具体机制,可以为临床上治疗CME提供新的思路。细胞焦亡(Pyroptosis)又称细胞炎性坏死,是近年才被提出的研究热点之一,是一种由炎症小体介导的程序性细胞死亡方式。细胞焦亡的发生与各类炎症小体的激活密切相关,其中,由NLRP3炎症小体活化介导的细胞焦亡在多种心血管疾病的发生发展中起非常重要的作用。我们团队以往的动物研究表明,冠状动脉微栓塞后心肌损伤的关键因素之一是心肌局部炎症反应,并进一步研究发现,在CME心肌组织中NLRP3炎症小体显著激活,焦亡相关蛋白表达水平显著升高。使用特异性抑制剂抑制NLRP3炎症小体的激活可以减轻CME所致的心肌局部炎症反应和细胞焦亡,从而减轻心肌组织损伤,并改善心功能。因此,NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡很可能成为临床上CME预防和治疗的新思路。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncrna)是一类在真核生物中发现的长度超过200 nt的非编码RNA分子,广泛存在于组织和细胞中,作用广泛,机制复杂,可在转录前、转录、转录后以及表观遗传等多个层面调控基因表达,参与重要的生物学进程。目前许多研究证实,lncrna与人类疾病的发生发展密切相关,包括参与高血压、心肌肥厚、冠状动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌缺血再灌注损伤在内的众多心血管疾病的发生发展过程。然而,lncrna在CME致心肌损伤中的作用及机制的相关研究鲜有报道。我们团队前期在大鼠冠状动脉微栓塞心肌组织的lncrna芯片检测中发现,长链非编码RNA生长阻滞特异性转录本5(Growth Arrest-Specific transcript5,gas5)表达明显上调,但尚未见报道lncrna gas5是否对CME致心肌损伤有调控作用。本研究通过建立大鼠CME模型以及体外LPS刺激的H9C2心肌细胞炎症损伤模型,从体内和体外两个层面,运用组织学和分子生物学实验技术等研究方法,首次在组织、细胞、分子水平探究了lncrna gas5在CME致心肌损伤过程中所起的作用及调控机制,有望更深入理解CME的发生发展过程以及具体分子机制,为临床冠脉微栓塞的预防和治疗提供新思路、新靶点。第一部分lncrna gas5在冠状动脉微栓塞心肌组织中的表达变化目的:建立SD大鼠CME模型,体外培养H9C2心肌细胞构建LPS体外炎症损伤模型,观察在大鼠CME模型以及LPS体外炎症损伤模型中lncrna gas5的表达特征。方法:(1)体内实验:将16只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)和冠状动脉微栓塞组(CME组),每组8只。CME组大鼠通过夹闭升主动脉的同时经左心室注射45μm微栓塞球来建立CME模型,Sham组则用等体积生理盐水代替。手术建模12小时后取左心室心肌组织。采用HE染色观察心肌组织病理改变,透射电镜观察心肌组织超微结构,q RT-PCR检测心肌组织lncrna gas5的相对表达量。(2)体外实验:通过LPS刺激H9C2细胞体外模拟心肌炎症损伤,将正常培养的H9C2心肌细胞随机分为对照组(Control组)和LPS刺激组(LPS组)。将LPS以10μg/ml剂量加入H9C2心肌细胞培养基中,与培养基充分混匀,通过与心肌细胞共同孵育12小时构建LPS体外炎症损伤模型。q RT-PCR检测H9C2心肌细胞lncrna gas5的相对表达量。(3)采用核质分离实验和荧光原位杂交技术(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)对lncrna gas5进行亚细胞定位。结果:(1)与Sham组相比,CME组大鼠心肌组织HE染色可见微动脉内有微栓塞球,微栓塞球周围可见心肌组织出现微梗死,微梗死灶周围伴大量炎症细胞浸润。透射电镜可观察到CME后心肌细胞内线粒体肿胀及空泡化,线粒体嵴断裂、消失。上述结果表明大鼠CME后出现心肌组织损伤,大鼠CME模型建立成功。(2)通过核质分离和FISH实验结果表明lncrna gas5主要定位在细胞质中。(3)q RT-PCR及FISH结果显示:lncrna gas5在大鼠CME心肌组织中表达显著升高(P<0.05),

关键词：冠状动脉微栓塞 lncrna gas5 miR-223-3p NLRP3 细胞焦亡

lncrna gas5对肺腺癌顺铂耐药性的作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

LncRNA GAS5对肺腺癌顺铂耐药性的作用研究

作者：黄彩霞右江民族医学院

学位级别：硕士

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)生长阻滞特异性转录因子5(gas5)对肺癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响和调控机制。方法:(1)A549、A549/DDP细胞各分为Control、LV-sg-NC、LV-sg-Lnc RNA gas5三组,待质粒转染48h后,再给药(DDP 30μg/m L)处... 详细信息

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)生长阻滞特异性转录因子5(gas5)对肺癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响和调控机制。方法:(1)A549、A549/DDP细胞各分为Control、LV-sg-NC、LV-sg-Lnc RNA gas5三组,待质粒转染48h后,再给药(DDP 30μg/m L)处理24 h,通过q RT-PCR实验技术定量检测转染sg-Lnc RNA gas5病毒后A549、A549/DDP细胞lnc RNA gas5的表达量。(2)采用CCK-8法检测A549、A549/DDP细胞转染sg-lnc RNA gas5并进行顺铂处理之后,对细胞存活率的影响,细胞各分为Control、sg-NC、sg-Lnc RNA gas5三组,待细胞稳定后用顺铂处理24h,顺铂药物浓度:0、10、20、30、40、50、60μg/m L。根据OD值计算细胞活性和IC50,探究出转染转染sh-lnc RNA gas5后A549、A549/DDP细胞对顺铂的敏感性的变化。(3)A549、A549/DDP细胞经脂质体转染构建lnc RNA gas5过表达、低表达模型,分为Control、OE-NC、OE-Lnc RNA gas5、sg-NC、sg-Lnc RNA gas5组,待转染的细胞模型稳定再用顺铂处理,通过平板克隆形成实验观察对肺癌细胞增殖能力的影响,计细胞克隆团数目,显微镜下观察≥50个细胞的集落数。(4)通过生物信息学预测和双荧光素酶实验检测lnc RNA gas5与mi R-152-3p mimics之间的靶向互作关系,双荧光素酶实验用293T细胞,分为Control、gas5-WT+mimics NC、gas5-WT+mi R-152-3p mimics、gas5-Mut+mimics NC、gas5-Mut+mi R-152-3p mimics组,经过48 h的转染后,通过双荧光素酶实验分别检测各组细胞荧光素酶活性,根据检测数据统计出两种荧光素酶比值(即报告基因/内参基因),同时比较不同组别之间的比值差异。结果:(1)根据q RT-PCR检测结果显示,在A549和A549/DDP细胞中感染sg-Lnc RNA gas5病毒后,细胞中Lnc RNA gas5的表达下调(P549和A549/DDP细胞中转染sg-Lnc RNA gas5后,与sg-NC组相比,sg-Lnc RNA gas5组细胞存活率显著上调(P549细胞中,OE-Lnc RNA gas5与OE-NC组相比克隆形成数显著减少(Pgas5与sg-NC组相比,克隆形成数显著增多(P549/DDP细胞中,OE-Lnc RNA gas5与OE-NC组相比,克隆形成数显著减少(Pgas5与sg-NC组相比,克隆形成数显著增多(Pgas5-WT+mimics NC组的相对荧光强度(19.42±0.38)相比,gas5-WT+mi R-152-3p mimics组的相对荧光强度(15.80±0.26)显著降低(P52-3p可与gas5的基因序列相结合而减弱gas5基因的表达量。结论:低表达lnc RNA gas5可促进肺癌细胞增殖和顺铂耐药;高表达lnc RNA gas5可抑制肺癌细胞增殖,降低肺癌顺铂耐药性;lnc RNA gas5与mi R-152-3p之间存在靶向关系,lnc RNA gas5可能是受mi R-152-3p直接调控的靶基因。lnc RNA gas5基因可能成为逆转人非小细胞肺癌顺铂化疗耐药性的一个有效潜在靶点。

关键词： lncrna gas5 肺癌顺铂耐药性调控机制

肉苁蓉总苷通过调控lncrna gas5保护神经细胞缺血再灌注损伤

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中成药 2022年第7期44卷 2320-2324页

作者：樊燕燕张石在鄂尔多斯应用技术学院医学系内蒙古鄂尔多斯017000

目的探讨肉苁蓉总苷对神经细胞缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用。方法体外培养PC12细胞,以氧糖剥离再复氧复糖培养模拟脑缺血再灌注损伤过程。设置对照组,I/R组,肉苁蓉总苷低、中、高剂量组,si-NC组,si-生长停滞特异性转录本5(gas5)组... 详细信息

目的探讨肉苁蓉总苷对神经细胞缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用。方法体外培养PC12细胞,以氧糖剥离再复氧复糖培养模拟脑缺血再灌注损伤过程。设置对照组,I/R组,肉苁蓉总苷低、中、高剂量组,si-NC组,si-生长停滞特异性转录本5(gas5)组,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA组,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA-gas5组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术、蛋白质印记(Western blot)检测细胞活力、凋亡以及pro-caspase3、cleaved-caspase3蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncrna gas5表达,试剂盒检测细胞上清液中TNF-α、IL-6水平。结果与对照组比较,I/R组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达降低,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白、lncrna gas5表达及上清液中TNF-α、IL-6水平升高(P5);与I/R组比较,肉苁蓉总苷中、高剂量组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达升高,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白、lncrna gas5表达及上清液中TNF-α、IL-6水平降低(P5);与si-NC组比较,si-gas5组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达升高,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白表达及上清液中TNF-α、IL-6水平降低(P5);与肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA组比较,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA-gas5组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达降低,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白表达及上清液中TNF-α、IL-6水平升高(P5)。结论肉苁蓉总苷通过下调lncrna gas5表达对神经细胞缺血再灌注损伤具有保护作用。

关键词：肉苁蓉总苷神经细胞缺血再灌损伤 lncrna gas5

基于lncrna gas5调控PI3K/AKT/Bax通路研究芪黄健脾滋肾颗粒改善系统性红斑狼疮血小板减少的机制

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于lncRNA GAS5调控PI3K/AKT/Bax通路研究芪黄健脾滋肾颗粒改善...

作者：汤忠富安徽中医药大学

学位级别：硕士

1目的通过临床研究观察芪黄健脾滋肾颗粒(QJZG)对系统性红斑狼疮(SLE)血小板减少患者的临床疗效及血小板相关指标的影响,并探讨其可能机制。通过动物实验研究,基于lncrna gas5调控PI3K/AKT/B ax细胞凋亡通路探讨QJZG改善SLE血小板减少... 详细信息

1目的通过临床研究观察芪黄健脾滋肾颗粒(QJZG)对系统性红斑狼疮(SLE)血小板减少患者的临床疗效及血小板相关指标的影响,并探讨其可能机制。通过动物实验研究,基于lncrna gas5调控PI3K/AKT/B ax细胞凋亡通路探讨QJZG改善SLE血小板减少的可能作用机制。2方法2.1临床研究一选取来自2020年10月～2022年10月在安徽中医药大学第一附属医院风湿病科门诊及住院部的64例SLE女性患者(门诊35例,住院部29例)作为研究对象。另选取30例来自体检中心健康女性作为健康组。检测血小板相关指标、免疫炎症指标、抗体水平、lncrna gas5/PI3K/AKT/B ax信号轴相关因子表达水平。利用Spearman或Pearson相关分析将血小板计数与其他指标进行相关性分析。2.2临床研究二将选取的64例SLE女性患者按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组32例。对照组予以醋酸泼尼松片和硫酸羟氯喹片口服,观察组在对照组的基础上加芪黄健脾滋肾颗粒口服。两组疗程均为12周。观察治疗前后血小板计数(PLT)、血小板压积(PCT)、血小板平均体积(MPV)、促血小板生成素(TPO)、抗dsDNA抗体、肾功能指标[血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24 h尿蛋白定量(24hPro)]、SLE疾病活动度(SLEDAI)、炎症指标[血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)]、中医症状评分、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、补体3(C3)、补体4(C4)、血清炎症因子[白介素10(IL-10)、白介素17(IL-17)、白介素23(IL-23)、干扰素γ(IFN-γ)]、血小板表面抗体(PAIgG、PAIgA、PAIgM)的变化。2.3实验研究将24只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组(MC)、芪黄健脾滋肾颗粒组(QJZG)、醋酸泼尼松组(PRED)、PI3K抑制剂组(LY294002),每组各6只;将6只C57BL/6小鼠作为空白对照组(NC)。NC组及MC组予以10ml·kg-1·d-1生理盐水灌胃,1次/d;QJZG组:予以12.6g·kg-1·d-1 QJZG溶液灌胃,1次/d;PRED组:予以5mg·kg-1·d-1醋酸泼尼松溶液灌胃,1次/d;LY294002组:予以10ml·kg-1·d-1生理盐水灌胃,另腹腔注射1mg/kg LY294002溶液,2次/w。各组连续用药8w。检测小鼠外周血中PLT、抗ds-DNA抗体、ANA抗体、C3水平;RT-qPCR法检测血小板悬液 gas5、(PI3K、AKT、Bax、Bcl-2)mRNA 表达量;Western Blot 法检测血小板悬液PI3K/AKT/B ax信号轴相关蛋白的表达水平;流式细胞术检测血小板细胞凋亡率。3结果3.1临床研究一结果3.1.1 SLE组与健康组PLT、ESR、CRP、IgG、C3的比较与健康组比较,SLE组PLT、C3显著降低(P5),ESR、CRP、IgG水平显著升高(Pgas5表达和PI3K/AKT/B ax通路蛋白的比较与健康组比较,SLE组血小板悬液中gas5表达量显著降低(P5或P5)。3.1.5 SLE组患者gas5、PI3K、Bax、Bcl-2、Caspase-3与PLT相关性分析SLE组患者gas5与PLT呈正相关(P5),PI3K、AKT与PLT无相关性(P>0.05),Bax、Caspase-3 与 PLT 呈负相关(P5),Bcl-2 与 PLT呈正相关(P5)。3.2临床研究二结果3.2.1两组临床疗效比较两组治疗后,观察组总有效率(87.50%)显著高于对照组(68.79%)(Z=-2.288,P=0.022),观察组临床疗效优于对照组。3.2.2两组治疗前后PLT、PCT、MPV的比较两组治疗后,PLT、PCT、MPV均显著高于治疗前(P0.05)。3.2.3两组治疗前后TPO、抗dsDNA抗体的比较两

关键词：系统性红斑狼疮芪黄健脾滋肾颗粒血小板减少 lncrna gas5 PI3K/AKT/Bax通路

lncrna gas5与JAK1/STAT3信号通路对大鼠心肌细胞缺氧损伤影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

锦州医科大学学报 2022年第4期43卷 26-32页

作者：李艳伟崔巍李玉强王晶李男锦州医科大学附属第一医院辽宁锦州121000

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(growth arrest specific transcript 5 long non-coding RNA growth arrest specific transcript 5,lncrna gas5)与JAK1/STAT3信号通路在大鼠心肌H9C2细胞缺氧损伤中的调控作用,为心血管疾病的治疗提供实验基础。方法通过缺氧培养建立体外缺氧模型,以正常培养的H9C2细胞为对照,用RT-qPCR方法检测gas5的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测炎症细胞因子,CCK-8法用于测定细胞活力。通过细胞活力、凋亡和炎症反应的变化来评估下调gas5对缺氧心肌细胞的影响。采用RT-qPCR检测JAK1/STAT3信号通路中mRNA的表达,用酪氨酸激酶抑制剂(AG490)抑制JAK1/STAT3信号通路,探讨JAK1/STAT3信号通路对gas5的表达水平缺氧细胞活力、凋亡和炎症的影响。结果(1)缺氧能够减低H9C2细胞活力,增加细胞凋亡和炎症的发生;(2)gas5在缺氧诱导的细胞中表达较高,在缺氧H9C2细胞中下调gas5可抑制细胞凋亡和炎症细胞因子,促进细胞活力;(3)JAK1/STAT3信号通路在缺氧细胞中被激活,并受到gas5的调控。当JAK1/STAT3信号通路受到抑制时细胞活力会明显增加,细胞凋亡和炎症的发生会明显降低。结论gas5可通过JAK1/STAT3信号通路调控H9C2细胞的缺氧损伤,gas5的抑制剂可能与酪氨酸激酶抑制剂协同作用,保护心肌细胞免受缺氧损伤。

关键词： lncrna gas5 JAK1/STAT3信号通路心肌细胞缺氧损伤

lncrna gas5通过miR-26a靶向调控JAK1/STAT3信号通路对子宫内膜样癌细胞凋亡及侵袭的影响

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国优生与遗传杂志 2022年第3期30卷 357-363页

作者：李坤王静金春亭白睿刘军超河北北方学院附属第一医院病理科河北张家口050051 河北北方学院妇产科河北张家口050051

目的探讨lncrna gas5通过miR-26a靶向调控JAK1/STAT3信号通路对子宫内膜样癌(EC)细胞凋亡及侵袭的影响。方法选取2018年4月—2021年5月经我院首次确诊并进行广泛性子宫切除及腹膜后淋巴结清扫术治疗的新鲜无菌EC患者癌灶及相对癌旁组... 详细信息

目的探讨lncrna gas5通过miR-26a靶向调控JAK1/STAT3信号通路对子宫内膜样癌(EC)细胞凋亡及侵袭的影响。方法选取2018年4月—2021年5月经我院首次确诊并进行广泛性子宫切除及腹膜后淋巴结清扫术治疗的新鲜无菌EC患者癌灶及相对癌旁组织(距离肿瘤5 cm外)共45对。使用定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测EC患者癌灶及相对癌旁组织、人子宫内膜癌细胞系ISK(高分化)、HEC-1-B(中分化)、人EC细胞系KLE(低分化)、子宫内膜腺上皮细胞(正常细胞)中lncrna gas5的表达。依据转染不同分为NC组(阴性对照质粒)、lncrna gas5组(转染lncrna gas5过表达质粒)、anti-miR-26a组(转染miR-26a干扰质粒)、lncrna gas5+miR-26a组(转染lncrna gas5过表达质粒+miR-26a过表达质粒)。使用EdU实验、AnneinV-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞的凋亡、细胞活力和增殖能力;使用荧光素酶报告基因分析荧光素酶活性;通过qRT-PCR和Western blot分析各组细胞中lncrna gas5、miR-26a、蛋白酪氨酸激酶(JAK1)、信号转导和转录活化因子(STAT3)、程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)、基质金属蛋白酶(MMP9)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达情况;利用动物试验进行皮下移植,测定肿瘤重量与体积。结果 lncrnagas5在EC组织中显著低表达(P=0.001);与子宫内膜腺上皮细胞相比,EC细胞系中的表达显著降低(P5);双荧光素酶报告基因分析表明,miR-26a是lncrna gas5潜在的靶向miRNAs。与NC组相比,lncrna gas5组和anti-miR-26a组EdU阳性细胞率显著降低,凋亡细胞数量显著增加,小鼠的肿瘤体积和质量显著减少,JAK1、STAT3、PD-L1、MMP9表达显著上调,E-cadherin、Caspase-3表达显著下调(P5)。与lncrna gas5组相比,lncrna gas5+miR-26a的EdU阳性细胞率显著升高,凋亡细胞显著减少,小鼠肿瘤体积和质量显著增加,JAK1、STAT3、PD-L1、MMP9表达显著下调,E-cadherin、Caspase-3表达显著上调(P5)。结论 lncrnagas5在EC组织中低表达,低表达的lncrnagas5可能通过上调miR-26a,抑制JAK1/STAT3信号通路的激活,影响下游E-cadherin、PD-L1、Caspase-3、MMP9的表达,从而调节细胞增殖和凋亡。

关键词： lncrna gas5 子宫内膜样癌凋亡侵袭

MiR-665通过与lncrna gas5/SDC1相互作用调节血管平滑肌细胞衰老

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

MiR-665通过与LncRNA GAS5/SDC1相互作用调节血管平滑肌细胞衰老

作者：梁庆阳广东药科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:人口老龄化是当今社会突出问题,2019年起中国人口老龄化增长速度位居世界第一;心血管疾病、糖尿病、慢性肾病等慢性病的防治成为国家的重要需求。2018年,心血管疾病占全因死亡的首位,心血管疾病发病率逐年增长,形势越发... 详细信息

研究背景及目的:人口老龄化是当今社会突出问题,2019年起中国人口老龄化增长速度位居世界第一;心血管疾病、糖尿病、慢性肾病等慢性病的防治成为国家的重要需求。2018年,心血管疾病占全因死亡的首位,心血管疾病发病率逐年增长,形势越发严峻。细胞衰老乃至血管衰老是心血管疾病危险因素,血管衰老表现为内皮细胞及血管平滑肌细胞衰老。动脉粥样硬化是心脑血管疾病的基础,且晚期动脉粥样硬化可见衰老细胞,并且与血管平滑肌细胞衰老相关。血管平滑肌细胞(VSMC)是血管壁最重要的组成部分,VSMC的表型转换及分泌型转换与血管衰老相关,参与衰老相关的血管重塑和动脉粥样硬化发生发展过程。延缓细胞衰老尤其是VSMC衰老是降低心血管疾病最有效手段之一。但血管衰老进程复杂,对其有效地研究及干预措施有限。目前研究血管衰老、如何改善血管衰老及降低衰老相关的心血管疾病发生率成为热门的研究话题。miRNA是一种长度为19-25个核苷酸的非编码小RNA,miRNA调控细胞的生长、分化、发育和凋亡。最近的研究表明,miRNA与心血管疾病相关,右心衰竭及心肌纤维化中miR-21表达增加;miR-21-3p可促进动脉粥样硬化进程;在急性心肌梗死患者中,循环中的miRNAs水平包括miR-1、miR-133、miR-29b、miR-192等水平增加;在PD-1抑制剂相关的心肌损伤中,心肌细胞miR-34a-5P表达上调。由此可见,miRNAs与心血管疾病相关,参与调节心血管衰老。许多研究发现,lnc RNA与细胞衰老及心血管疾病相关。lnc RNA通过miRNA的海绵作用,通过竞争性抑制RNA机制调控miRNA的生物效应。例如,上调lnc RNA-ANRIL表达可抑制miR-181a表达,改善血管平滑肌细胞衰老。表明lnc RNA/micro RNA是细胞衰老的关键调节因子。lnc RNA gas5与细胞增殖相关,研究发现,lnc RNA gas5可改善Apoe-/-大鼠的动脉粥样硬化进程,lnc RNA gas5在心力衰竭患者中表达下降;在心肌缺血再灌注模型中,lnc RNA gas5表达增加,而miR-188-5p表达下降,当沉默lnc RNA gas5表达或促进miR-188-5p过表达可改善心肌缺血;另一篇研究则发现miR-665在急性心力衰竭患者心脏中表达增加,并且我们先前的研究结果表明,博来霉素诱导的衰老VSMC中miR-665表达增加;由此可见,lnc RNA gas5及miR-665可调节血管平滑肌细胞衰老,与心血管疾病相关。然而,lnc RNA gas5与miR-665是否相关联,以及在VSMC衰老中的作用和机制尚不完全清楚。因此,本文拟探索lnc RNA gas5与miR-665调节细胞衰老的相关机制及之间的相关性。本文通过增加VSMC传代次数作为衰老模型,通过SA-β-Gal染色、NAD+/NADH比率、γ-H2AX染色/蛋白评估衰老情况,用miRNA生物芯片测定差异表达的miRNA(DEM),进一步探讨lnc RNA/miRNA/下游基因之间的调控关系,为血管衰老提供新的治疗靶点。方法1.体外培养VSMC细胞,VSMCs传代至15代为衰老模型,相应的3-5代HA-VSMCs为年轻组;2.衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色判断各组细胞衰老情况;***+/NADH比率评估各组线粒体功能损坏情况;4.γ-H2AX染色/蛋白评估各组DNA损伤情况;5.提取各组VSMCs的总RNA,用miRNAs生物芯片测定差异表达的miRNAs,并行q RT-PCR定量验证,选取差异表达的miRNA进一步行机制研究;6.应用生物信息学分析,确定与目标miRNA靶向结合的lnc RNA和下游候选靶基因,进一步行双荧光素酶报告实验验证;7.q RT-PCR:20个差异表达miRNA表达水平:miR-4742-3P、miR-433-5p、miR-376b-5p、miR-668-3P、miR-6868-3P、miR-665、miR-431-3p、miR-1262、miR-4876-5p、miR-3173-5p、miR-211-3p、miR-276-3p、miR-16-1-3p、miR-548K、miR-222-5p、miR-1908-5p、miR-296-1-5P、miR-3158-3p、miR-1256-3P;评估miRNA mimic/inhibitor转染效力;评估pc DNA转染效力;测定各组lnc RNA及下游基因表达水平;***:γ-H2AX、GAPDH、下游基因;并用来评估miRNA对下游基因的调节作用;9.挽救实验验证lnc RNA/miRNA/下游靶基因信号通路对VSMCs衰老的影响,分别通过过表达或敲低lnc RNA/miRNA/下游靶基因实现。

关键词：血管平滑肌细胞 lncrna gas5 miR-665 SDC1 衰老动脉粥样硬化

lncrna gas5通过促进STAT3泛素化抑制Th17分化参与免疫性血小板减少症发病

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

LncRNA GAS5通过促进STAT3泛素化抑制Th17分化参与免疫性血小板减...

作者：夏亚林苏州大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:免疫性血小板减少症(ITP)是一种获得性自身免疫、出血性疾病,大量研究表明Th17/Treg失衡可能参与了 ITP的发展过程。越来越多的证据表明长链非编码RNA(lncrnas)与多种自身免疫性疾病相关,lncrna gas5已被发现在类风湿性... 详细信息

研究背景及目的:免疫性血小板减少症(ITP)是一种获得性自身免疫、出血性疾病,大量研究表明Th17/Treg失衡可能参与了 ITP的发展过程。越来越多的证据表明长链非编码RNA(lncrnas)与多种自身免疫性疾病相关,lncrna gas5已被发现在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化等自身免疫性疾病患者的全血或白细胞中的表达水平发生了改变。但是,gas5在ITP中的作用尚不清楚,本课题旨在细胞水平研究gas5过表达对Th17分化的影响。研究方法:利用CD41敲除建立ITP小鼠模型;采用qRT-PCR检测gas5在ITP患者外周血单个核细胞(PBMC)和ITP小鼠脾脏组织中的表达;流式检测Th17细胞、Treg细胞在CD4+T细胞中的百分比;ELISA测定IL-17和IL-10的水平;Western blotting 检测 RORγt、Foxp3、STAT3;RNA pull-down、RIP 分析和泛素化测定,证实gas5通过促进TRAF6介导的泛素化降解STAT3;结果:成功建立了 ITP小鼠模型,ITP小鼠脾脏组织中gas5低表达、STAT3高表达;ITP患者的PBMC中gas5低表达、STAT3高表达;CD4+T细胞中gas5的过表达会抑制Th17细胞的分化,而对Treg细胞分化没有影响;RNA pull-down和RIP分析证实了 gas5和STAT3之间的相互作用,进一步的研究表明,gas5通过促进TRAF6介导的泛素化加速STAT3的降解抑制Th17细胞分化。结论:lncrna gas5通过促进STAT3泛素化抑制Th17细胞分化参与ITP的发病。

关键词：免疫性血小板减少症 Th17细胞分化 lncrna gas5 STAT3 泛素化