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宫颈癌组织及脱落细胞中PAX1与lmx1a基因甲基化的对照研究

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哈尔滨医药 2023年第6期43卷 73-75页

作者：刘静蚌埠医学院第一附属医院肿瘤妇科安徽蚌埠233000

目的检测PAX1和lmx1a甲基化在宫颈组织中的表达情况,分析PAX1和lmx1a甲基化的表达与正常宫颈、宫颈炎症、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌的临床病理因素之间的关系。方法 150例因宫颈脱落血细胞异常,将其分为宫颈低级别上皮内瘤变(Low-grade c... 详细信息

目的检测PAX1和lmx1a甲基化在宫颈组织中的表达情况,分析PAX1和lmx1a甲基化的表达与正常宫颈、宫颈炎症、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌的临床病理因素之间的关系。方法 150例因宫颈脱落血细胞异常,将其分为宫颈低级别上皮内瘤变(Low-grade cervical intraepithelial neoplasia,LG-CIN)、高级别上皮内瘤变(High-grade cervical intraepithelial neoplasia,HG-CIN)、浸润性宫颈鳞癌(Invasive Cervical Cancers,ICC)将慢性宫颈炎患者作为正常对照(Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy,NLM)。检测PAX1和lmx1a甲基化在宫颈组织中的表达情况。结果相较于对照组,试验组所有患者PAX1和lmx1a甲基化比例均较高,但是试验组的甲基化水平却降低,差异无统计学意义(P>0.05);ICC甲基化比例高于HG-CIN,但是甲基化水平更低,HG-CIN甲基化比例高于LG-CIN,但是甲基化水平更低,差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌组织及脱落细胞中PAX1与lmx1a基因甲基化比例越高,患者宫颈癌发生和发展越严重,同时甲基化水平降低可作为诊断宫颈癌的生物学指标。

关键词：宫颈癌组织脱落细胞 PAX1 lmx1a 基因甲基化

SCAMP1/miR-499a-5p/lmx1a/NLRC5途径在调节胶质瘤细胞恶性生物学行为中的机制研究

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SCAMP1/miR-499a-5p/LMX1A/NLRC5途径在调节胶质瘤细胞恶性生物学...

作者：宗哲琦中国医科大学

学位级别：硕士

目的:脑胶质瘤是中枢神经系统最常见,同时也是恶性程度最高的的原发性肿瘤。即使经过手术,术后放疗和化疗等一系列治疗后,胶质瘤预后仍然很差,易复发,中位生存期约15个月。长链非编码RNA(Inc RNAs)在肿瘤发生和恶性进展中是重要的表观... 详细信息

目的:脑胶质瘤是中枢神经系统最常见,同时也是恶性程度最高的的原发性肿瘤。即使经过手术,术后放疗和化疗等一系列治疗后,胶质瘤预后仍然很差,易复发,中位生存期约15个月。长链非编码RNA(Inc RNAs)在肿瘤发生和恶性进展中是重要的表观遗传调控因子。本研究旨在研究长链非编码RNA SCAMP1能否调控胶质瘤细胞(GCs)的恶性生物学行为,进一步深入研究SCAMP1/miR-499a-5p/lmx1a/NLRC5途径在调控GCs的恶性生物学行为中的作用机制。研究方法:培养人的GCs-U87、U251和人正常星型胶质细胞HA。应用Real-time PCR检测SCAMP1、miR-499a-5p、lmx1a、NLRC5,应用Western blot检测lmx1a、NLRC5在正常脑组织、胶质瘤组织、人正常星型胶质细胞及GCs中的表达水平。应用CCK-8法检测细胞增殖能力。采用Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力的变化。应用流式细胞仪检测细胞凋亡能力。应用通过细胞转染的方法构建SCAMP1和NLRC5表达沉默的细胞系miR-499a-5p和lmx1a的过表达和表达沉默的细胞系。Real-time PCR检测lmx1a和NLRC5的m RNA变化和及miR-499a-5p的表达变化。Western Blot方法检测lmx1a,NLRC5,clclin D1,c-Myc,β-catenin,MMP-7蛋白的表达变化。双荧光素酶基因报告系统检测SCAMP1和miR-499a-5P,miR-499a-5P和lmx1a靶向结合作用。结果:SCAMP1在胶质瘤组织和GCs中高表达。沉默SCAMP1显著抑制GCs的增殖,迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。miR-499a-5p脑胶质瘤组织和GCs中低表达。过表达miR-499a-5p显著抑制GCs的增殖,迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。SCAMP1与miR-499a-5p存在靶向结合作用。沉默SCAMP1通过负性调控miR-499a-5p,降低lmx1a和NLRC5的表达,抑制GCs的恶性生物学行为。miR-499a-5p与lmx1a存在靶向结合作用。过表达miR-499a-5p通过负性调控lmx1a和NLRC5的表达,进而降低cyclin D1、c-Myc、β-catenin、MMP-7的表达,从而调控Wnt/β-catenin信号通路,抑制GCs的恶性生物学行为。沉默lmx1a通过负性调控NLRC5的表达,进而调控Wnt/β-catenin信号通路。从而显著抑制胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。NLRC5在GCs中高表达。表达沉默的NLRC5,通过降低cyclin D1,c-Myc,β-catenin,MMP-7的表达,调控Wnt/β-catenin信号通路,进而抑制GCs的恶性生物学行为。结论:***1在胶质瘤组织和细胞中高表达,miR-499a-5p在胶质瘤组织和细胞中低表达,沉默SCAMP1、过表达miR-499a-5p能够抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,抑制GCs的恶性生物学行为。***1与miR-499a-5p存在靶向结合作用。lmx1a是miR-499a-5p的靶基因。沉默SCAMP1通过上调miR-499a-5p的表达,显著降低lmx1a和NLRC5的表达,抑制GCs的恶性生物学行为。过表达miR-499a-5p通过下调lmx1a和NLRC5的表达,降低cyclin D1,c-Myc,β-catenin,MMP-7表达,进而抑制Wnt/β-catenin通路活性,抑制GCs的恶性生物学行为。***1A和NLRC5在胶质瘤组织和细胞中高表达。沉默lmx1a通过下调NLRC5的表达,下调cyclin D1,c-Myc,β-catenin,MMP-7表达,进而抑制wnt/β-catenin通路活性,调控胶质瘤细胞的恶性生物学行为。

关键词：长链非编码RNA 短链非编码RNA lmx1a NLRC5 胶质瘤

lmx1a抑制胃癌细胞系MKN45的生长和成瘤能力的研究

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中国临床医学 2015年第6期 727-729页

作者：冯莉廉伟谢蕴复旦大学附属闵行医院消化内科复旦大学附属闵行医院病理科

目的:探讨转录因子lmx1a(LIM homeobox transcription factor 1,alpha)对胃癌细胞系MKN45的生长及成瘤能力的影响。方法:在胃癌细胞系MKN45中过表达lmx1a,检测空载或lmx1a过表达MKN45的生长及其在小鼠皮下的成瘤能力。结果:lmx1a诱发MK... 详细信息

目的:探讨转录因子lmx1a(LIM homeobox transcription factor 1,alpha)对胃癌细胞系MKN45的生长及成瘤能力的影响。方法:在胃癌细胞系MKN45中过表达lmx1a,检测空载或lmx1a过表达MKN45的生长及其在小鼠皮下的成瘤能力。结果:lmx1a诱发MKN45凋亡的同时抑制其生长并且能够显著抑制MKN45在小鼠皮下的成瘤能力(Plmx1a作为肿瘤抑制因子在胃癌的发生发展过程中可能发挥作用。

关键词： lmx1a 胃癌 MKN45

lmx1a基因启动子在胃癌中的异常甲基化研究

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中国药物与临床 2012年第1期12卷 23-25页

作者：冯莉董文洁张浩吴云林上海市闵行区中心医院消化科 201100 郑州大学附属第一医院消化科上海交通大学附属瑞金医院消化科

目的研究lmx1a基因启动子在胃癌细胞中的甲基化状态。方法运用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)法检测30例原发胃癌和癌旁组织中lmx1a基因的甲基化水平。甲基化修饰后亚硫酸盐测序聚合酶链反应(BSP)分析胃癌细胞MKN45细胞lmx1a基因启动子Cp... 详细信息

目的研究lmx1a基因启动子在胃癌细胞中的甲基化状态。方法运用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)法检测30例原发胃癌和癌旁组织中lmx1a基因的甲基化水平。甲基化修饰后亚硫酸盐测序聚合酶链反应(BSP)分析胃癌细胞MKN45细胞lmx1a基因启动子CpG岛甲基化状态。提取细胞RNA,通过实时定量聚合酶链反应(PCR)检测lmx1a基因mRNA在不同浓度的DNA甲基化酶抑制剂5′-杂氮-2′-脱氧胞嘧啶(5-aza-dC)处理MKN45细胞后,lmx1a基因mRNA的改变情况。结果原发性胃癌的甲基化异常检出率是33%(10/30)。lmx1a基因在MKN45细胞中存在高甲基化状态,MKN45细胞经5-aza-dC处理后lmx1a基因mRNA表达明显上调。结论 lmx1a基因在原发性胃癌中存在甲基化异常,说明lmx1a基因甲基化异常可能参与胃癌的发生。

关键词：胃肿瘤基因 DNA3甲基化 lmx1a

EGFP和lmxlA双基因共表达重组腺病毒的构建及检测

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中国生物工程杂志 2014年第9期34卷 72-79页

作者：周艳王小囡闫姗姗吴晋元孙茂盛张磊李鸿钧中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的:通过携带绿色荧光蛋白(EGFP)和转录因子lmx1a(LIM homeobox transcription factor1-alpha)的双顺反子重组腺病毒的构建和包装,评价双顺反子构建方法的可行性,为进一步探讨转录因子lmx1a在间充质干细胞分化为神经元细胞的潜能提供... 详细信息

目的:通过携带绿色荧光蛋白(EGFP)和转录因子lmx1a(LIM homeobox transcription factor1-alpha)的双顺反子重组腺病毒的构建和包装,评价双顺反子构建方法的可行性,为进一步探讨转录因子lmx1a在间充质干细胞分化为神经元细胞的潜能提供实验基础。方法:通过PCR方法获得增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和转录因子lmx1a的CDS区序列,将其构建到双顺反子表达质粒pcDNA3.0BA,通过PCR的方法获得双顺反子表达盒,并插入到腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV中,经过与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的同源重组,获得阳性重组质粒pAd-EGFP-lmx1a,并进一步在HEK293细胞中包装为腺病毒。用携带EGFP和lmx1a基因的重组腺病毒感染人脐带间充质干细(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs),通过RT-PCR、免疫荧光及Western blot的方法检测EGFP和lmx1a的表达及产物定位。结果:透射电镜检查包装好的重组腺病毒为典型的腺病毒颗粒形态,大小约为75nm。Ad-EGFP-lmx1a感染hUC-MSCs后检测到EGFP和lmx1a的转录产物,表达产物互不影响,表达强弱无明显差异。结论:利用双顺反子真核表达质粒pcDNA3.0BA能够构建同时表达两个基因的重组腺病毒,腺病毒感染细胞后能够将两个基因传递至间充质干细胞中并表达。通过EGFP的观察可对腺病毒的表达效率进行实时观察,这些研究结果为任意组合的双基因表达建立了快速有效的构建方法,重组腺病毒Ad-EGFPlmx1a的成功构建也为将来研究lmx1a在间充质干细胞分化为神经元过程中的作用提供了实验基础。

关键词：增强型绿色荧光蛋白 lmx1a 重组腺病毒双顺反子

Direct conversion of mouse astrocytes into neural progenitor cells and specific lineages of neurons

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Translational Neurodegeneration 2018年第1期7卷 307-321页

作者： Kangmu Ma Xiaobei Deng Xiaohuan Xia Zhaohuan Fan Xinrui Qi Yongxiang Wang Yuju Li Yizhao Ma Qiang Chen Hui Peng Jianqing Ding Chunhong Li Yunlong Huang Changhai Tian Jialin C.Zheng Center for Translational Neurodegeneration and Regenerative Therapy Shanghai Tenth People’s Hospital affiliated to Tongji University School of MedicineShanghai 200072China Collaborative Innovation Center for Brain Science Tongji UniversityShanghai 200092China Departments of Pharmacology and Experimental Neuroscience University of Nebraska Medical CenterOmahaNE 68198-5930USA Department of Neurology&Institute of Neurology Ruijin Hospital affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of MedicineShanghai 200025China Department of Pathology and Microbiology University of Nebraska Medical CenterOmahaNE 68198-5930USA

Background:Cell replacement therapy has been envisioned as a promising treatment for neurodegenerative *** to the ethical concerns of ESCs-derived neural progenitor cells(NPCs)and tumorigenic potential of iPSCs,reprogramming of somatic cells directly into multipotent NPCs has emerged as a preferred approach for cell ***:Mouse astrocytes were reprogrammed into NPCs by the overexpression of transcription factors(TFs)Foxg1,Sox2,and *** generation of subtypes of neurons was directed by the force expression of cell-type specific TFs Lhx8 or Foxa2/***:Astrocyte-derived induced NPCs(AiNPCs)share high similarities,including the expression of NPC-specific genes,DNA methylation patterns,the ability to proliferate and differentiate,with the wild type *** AiNPCs are committed to the forebrain identity and predominantly differentiated into glutamatergic and GABAergic neuronal ***,additional overexpression of TFs Lhx8 and Foxa2/lmx1a in AiNPCs promoted cholinergic and dopaminergic neuronal differentiation,***:Our studies suggest that astrocytes can be converted into AiNPCs and lineage-committed AiNPCs can acquire differentiation potential of other lineages through forced expression of specific *** the impact of the TF sets on the reprogramming and differentiation into specific lineages of neurons will provide valuable strategies for astrocyte-based cell therapy in neurodegenerative diseases.

关键词： Astrocytes iNPCs Reprogramming Transcription factor Neuronal lineage Cholinergic neurons Dopaminergic neurons Lhx8 Foxa2 lmx1a