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神经生长因子促进海马胆碱能神经再生过程中lhx8的动态表达

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解剖学报 2014年第4期45卷 441-445页

作者：李浩明朱培培金国华施金洪邹琳清田美玲衣昕秦建兵南通大学医学院人体解剖学系江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的探讨神经生长因子(NGF)促进海马胆碱能神经再生与同源盒基因lhx8之间的关系。方法SD大鼠72只,在制备切割右侧穹隆海马伞模型和NGF侧脑室注射的基础上,分为对照组、切割组、NGF组、切割联合NGF组;Real-time PCR和Western blotting分... 详细信息

目的探讨神经生长因子(NGF)促进海马胆碱能神经再生与同源盒基因lhx8之间的关系。方法SD大鼠72只,在制备切割右侧穹隆海马伞模型和NGF侧脑室注射的基础上,分为对照组、切割组、NGF组、切割联合NGF组;Real-time PCR和Western blotting分别检测各组动物海马中lhx8蛋白的表达变化;免疫荧光技术检测各组动物海马齿状回颗粒下层中胆碱乙酰转移酶(ChAT)/lhx8双标细胞数。结果切割组和NGF组中lhx8蛋白的表达量较对照组增高,切割联合NGF组增高更为明显,且lhx8基因表达也增高;NGF组和切割联合NGF组中海马齿状回颗粒下层(SGZ)中的ChAT/lhx8双标细胞数也较对照组和切割组明显增多。结论侧脑室注射NGF促进海马胆碱能神经再生与lhx8的高表达有关。

关键词： lhx8 海马神经生长因子胆碱能神经再生实时定量聚合酶链反应大鼠

lhx8促进海马神经干细胞向胆碱能神经元分化

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解剖学报 2013年第6期44卷 735-739页

作者：田美玲朱培培金国华李浩明秦建兵施金洪南通大学医学院人体解剖学系江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的构建大鼠lhx8全长结构基因真核表达载体。方法 PCR法扩增lhx8全长结构基因,经EcoRI和BamHI双酶切后连接至真核表达载体pEGFP-C3中,重组质粒pEGFP-C3-lhx8经测序鉴定后,采用脂质体转染的方法转染至体外培养的海马神经干细胞中。结果... 详细信息

目的构建大鼠lhx8全长结构基因真核表达载体。方法 PCR法扩增lhx8全长结构基因,经EcoRI和BamHI双酶切后连接至真核表达载体pEGFP-C3中,重组质粒pEGFP-C3-lhx8经测序鉴定后,采用脂质体转染的方法转染至体外培养的海马神经干细胞中。结果测序鉴定表明,重组质粒pEGFP-C3-lhx8-EGFP构建成功,该重组质粒转入体外培养的神经干细胞后,质粒转染组中ChAT阳性的细胞数较阴性对照组明显增多(Plhx8-EGFP构建成功,lhx8能够促进NSCs向ChAT阳性的细胞分化。

关键词： lhx8 神经干细胞海马基因表达聚合酶链反应大鼠

切割穹窿海马伞大鼠海马内lhx8 mRNA表达的变化

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解剖学杂志 2008年第2期31卷 145-147,172页

作者：蒋媛媛金国华秦建兵田美玲张新化王磊朱蕙霞南通大学医学院人体解剖学教研室神经生物学研究所江苏省神经再生重点实验室

目的:探讨切割穹窿海马伞大鼠切割侧与正常侧海马内lhx8 mRNA表达的差异。方法:切割SD大鼠右侧穹窿海马伞。切割后7d制备海马冰冻切片,用体外转录法制备地高辛标记的lhx8 RNA探针进行原位杂交,分析切割侧和正常侧海马锥体细胞层和齿状... 详细信息

目的:探讨切割穹窿海马伞大鼠切割侧与正常侧海马内lhx8 mRNA表达的差异。方法:切割SD大鼠右侧穹窿海马伞。切割后7d制备海马冰冻切片,用体外转录法制备地高辛标记的lhx8 RNA探针进行原位杂交,分析切割侧和正常侧海马锥体细胞层和齿状回颗粒层中及齿状回门区和颗粒下层中的lhx8 mRNA阳性细胞的数量和平均光密度值。结果:切割侧和正常侧海马锥体细胞层和齿状回颗粒层lhx8 mRNA阳性细胞数量无明显差异,但切割侧平均光密度值较正常侧明显增加;在齿状回的门区和颗粒下层,切割侧lhx8 mRNA阳性细胞数和平均光密度值均较正常侧升高。结论:切割穹窿海马伞后海马中lhx8 mRNA表达上调,可能与其中的神经干细胞向胆碱能神经元分化的神经再生机制有关。

关键词：穹窿海马伞切割海马 lhx8

lhx8基因沉默抑制NGF诱导的海马NSCs向胆碱能神经元分化的研究

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神经解剖学杂志 2014年第6期30卷 629-633页

作者：李浩明金国华朱培培施金洪邹琳清张新化田美玲衣昕秦建兵成翔南通大学医学院人体解剖学系江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的:明确lhx8在神经生长因子(nerve growth factors,NGF)促进海马神经干细胞向胆碱能神经元分化中的作用。方法:体外培养海马神经干细胞并应用NGF促进其向胆碱能神经元分化的过程中,将构建的lhx8干扰慢病毒加入至培养液中,7 d后应用免... 详细信息

目的:明确lhx8在神经生长因子(nerve growth factors,NGF)促进海马神经干细胞向胆碱能神经元分化中的作用。方法:体外培养海马神经干细胞并应用NGF促进其向胆碱能神经元分化的过程中,将构建的lhx8干扰慢病毒加入至培养液中,7 d后应用免疫荧光标记技术检测分化所得胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,Ch AT)和微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)双标阳性细胞。结果:在空白对照组中,仅检测到少量的Ch AT/MAP-2双标阳性细胞;在NGF组或是NGF联合阴性对照慢病毒组中则可检测到较多的Ch AT/MAP-2双标阳性细胞;在加入lhx8干扰慢病毒的实验组中,分化所得的Ch AT/MAP-2双标阳性细胞数较NGF组或是NGF联合阴性慢病毒组明显减少。结论:lhx8基因沉默抑制了NGF诱导的海马神经干细胞向胆碱能神经元的分化。

关键词： lhx8 基因沉默神经生长因子神经干细胞胆碱能神经元海马

lhx8通过Arx调控新生大鼠海马神经元的发育

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Lhx8通过Arx调控新生大鼠海马神经元的发育

作者：孙迪吉林大学

学位级别：硕士

目的:探究lhx8调控新生大鼠胆碱能神经元和GABA能神经元的作用机制,为深入阐明阿尔兹海默症、血管性痴呆、抑郁症、癫痫等神经系统疾病提供依据。方法:结合生物信息学软件的预测,设计与lhx8蛋白结合的Arx寡核苷酸探针,人工合成双链,使... 详细信息

目的:探究lhx8调控新生大鼠胆碱能神经元和GABA能神经元的作用机制,为深入阐明阿尔兹海默症、血管性痴呆、抑郁症、癫痫等神经系统疾病提供依据。方法:结合生物信息学软件的预测,设计与lhx8蛋白结合的Arx寡核苷酸探针,人工合成双链,使用生物素对探针进行3,的标记,进行EMSA实验检测转录调控因子lhx8是否可以与Arx基因结合。空载体质粒,命名为Lenti-CON（p LVX-Tight-IRES-Zs Green-Neo）;将r lhx8 c DNA链接入p LVX-Tight-IRES-Zs GreenNeo质粒产生lhx8过表达慢病毒载体质粒,命名为Lenti-lhx8（p LVX-Tight-r L hx8-IRES-Zs Green-Neo）;将Arx sh RNA基因片段,两端加上限制性内切酶Ba m H I,链接入p LVX-Tight-IRES-Zs Green-Neo质粒产生干扰Arx基因表达的慢病毒载体质粒,命名为Lenti-Arx sh RNA（p LVX-Tight-Arxsh RNA-IRES-Z s Green-Neo）;Arx sh RNA基因片段链接入p LVX-Tight-r lhx8-IRES-Zs Green-Neo质粒产生lhx8过表达同时干扰Arx基因表达的慢病毒载体质粒,命名为Lentilhx8/Arx sh RNA（p LVX-Tight-r lhx8-Arxsh RNA-IRES-Zs Green-Neo）。将载体质粒、包装质粒p LP1、p LP2、p LP/VSVG及Tet-on调控质粒共转染293T细胞,包装出慢病毒。使用Lenti-CON、Lenti-lhx8、Lenti-Arx sh RNA及Lenti-Lh x8/Arx sh RNA四种慢病毒,对新生大鼠进行侧脑室定位注射,腹腔注射强力霉素2.7mg/kg（Doxitard,DOX）,诱导搭载Tet-on系统的慢病毒载体质粒中lhx8基因和/或Arx小干扰RNA表达。侧脑室注射48h、72h及96h后,提取鼠的左侧海马RNA进行RT-PCR,提取鼠的右侧海马总蛋白进行Western blot,取鼠全脑制作石蜡切片。通过这些技术检测Arx、lhx8以及胆碱能神经元表面阳性标记物（Choline Acetyltransferase,CHAT）与GABA能神经元表面阳性标记物GAD65（Glutamic Acid Decarboxylases 65,GAD65）的m RNA和蛋白表达变化。结果:1、EMSA实验显示lhx8蛋白可以与Arx DNA探针结合;2、将lhx8 c DNA与Arx发夹环构建于同一载体,可以有效实现lhx8基因过表达及Arx基因的低表达;3、成功包装慢病毒载体Lenti-CON、Lenti-lhx8、Lenti-Arx sh RNA及Lenti-lhx8/Arx sh RNA,经浓缩纯化后感染效率良好;4、注射慢病毒48h时,RT-PCR、Western Blot及免疫荧光结果显示,各项指标各组之间无差异。5、注射慢病毒72h及96h时,RT-PCR结果显示,过表达lhx8使Arx m RNA表达减少,过表达lhx8使CHAT m RNA表达增加,使GAD65 m RNA表达减少;干扰Arx对CHAT m RNA表达没有影响,但使GAD65 m RNA表达减少;过表达lhx8组与过表达lhx8同时干扰Arx组相比,GAD65 m RNA表达没有差异。Western Blot及免疫荧光结果显示,过表达lhx8使CHAT蛋白表达增加,使GAD65蛋白表达减少;干扰Arx使GAD65蛋白表达减少。结论:lhx8作为转录调控因子,可以与Arx基因结合,抑制Arx基因的表达;lhx8基因过表达能够促进新生大鼠海马区胆碱能神经元的分化,抑制GABA能神经元的分化;Arx基因对新生大鼠海马区GABA能神经元的分化有正向调控的作用,对胆碱能神经元的分化无影响。

关键词： lhx8 Arx EMSA 慢病毒胆碱能神经元 GABA能神经元

lhx8基因对新生大鼠海马胆碱能神经元和GABA能神经元的影响

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Lhx8基因对新生大鼠海马胆碱能神经元和GABA能神经元的影响

作者：卫海艳吉林大学

学位级别：硕士

目的:lhx8基因对于胆碱能和GABA能神经元的发生分化发育有重要作用,但其在新生鼠神经元发育中的作用尚不明确,尤其是lhx8基因对于GABA能神经元的调节作用尚未得到一致的认同,基于此,本实验采用包含有Tet-on系统的慢病毒来调控lhx8的表达... 详细信息

目的:lhx8基因对于胆碱能和GABA能神经元的发生分化发育有重要作用,但其在新生鼠神经元发育中的作用尚不明确,尤其是lhx8基因对于GABA能神经元的调节作用尚未得到一致的认同,基于此,本实验采用包含有Tet-on系统的慢病毒来调控lhx8的表达,研究过表达lhx8对于新生大鼠脑内胆碱能神经元和GABA能神经元的影响。方法:从Gene Bank中调取Rattus norvegicus lhx8(rlhx8)序列,上游加入Kozak序列,人工合成全序列,链接入pLVX-Tight-IRES-Zs Green-Neo质粒产生载体质粒pLVX-Tight-rlhx8-IRES-Zs Green-Neo,对获得的质粒进行鉴定和扩增;使用293T细胞进行慢病毒包装,并使用293T细胞检测其感染能力;将获得的含有大鼠lhx8(rlhx8)的慢病毒及其相应对照慢病毒对新生大鼠进行脑室注射,给予0.5mg/ml四环素诱导rlhx8的表达,在注射病毒48h,72h和96h后,每只新生大鼠取左侧海马提取RNA,右侧海马提取蛋白质,通过RT-PCR和Western blot检测新生大鼠脑内胆碱能神经元表面标志物(Choline Acetyltransferase,CHAT)和GABA能神经元表面标志物(Glutamic Acid Decarboxylases 65,GAD65)表达的变化,取全脑制备石蜡切片,利用免疫荧光组织化学技术检测CHAT和GAD65的表达,利用荧光显微镜观察染色结果,每只大鼠选择4张切片,每张切片选择4个视野观察拍照,所获得的图片经过Ipwin检测平均荧光密度,取平均值,经过Graphpad来对各组数据进行平均值和方差计算,组间比较使用t检验,Plhx8-IRES-Zs Green-Neo)和调控质粒(pLVX-Tet-On-Puro)鉴定成功后,对其进行扩增,通过大提试剂盒可得到满足实验需求的质粒。pLP1,pLP2,pLP/VSVG,pLVX-Tet-On-Puro和pLVX-Tight-rlhx8-IRES-Zs Green-Neo五质粒共转染293T细胞,可见绿色荧光,收集上清,离心沉淀获得慢病毒,同时用其感染293T细胞,表明慢病毒具有感染能力。RT-PCR结果表明,诱导lhx8基因过表达48h时,各组间检测指标无差异;72h及96h时,胆碱能神经元表面标志物CHAT增加,GABA能神经元表面标志物GAD65减少(P8基因的过表达,使新生大鼠海马CHAT阳性表达细胞数增加,使GAD65阳性表达细胞数减少,(P8h时,实验组各组间没有差异,72h及96h时,GAD65的蛋白翻译水平有降低,(Plhx8基因过表达72h及96h后能够促进胆碱能神经元的标志物CHAT表达,抑制GABA能神经元表面标志物GAD65的表达。

关键词： lhx8 胆碱能神经元 GABA能神经元慢病毒 Tet-on系统

切割穹窿海马伞后海马齿状回内lhx8的表达变化及其对RGCs向胆碱能神经元分化的影响

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神经解剖学杂志 2014年第4期30卷 447-451页

作者：田美玲李浩明金国华朱培培施金洪邹琳清秦建兵南通大学医学院人体解剖学系、江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的:明确lhx8在SD大鼠切割穹窿海马伞后海马齿状回颗粒下层和门区中的表达变化。方法:切割SD大鼠穹窿海马伞,成功制备海马去神经支配动物模型后,通过Western Blot的方法检测切割后第1、3、7、14、21、28 d海马中lhx8蛋白的表达变化;通... 详细信息

目的:明确lhx8在SD大鼠切割穹窿海马伞后海马齿状回颗粒下层和门区中的表达变化。方法:切割SD大鼠穹窿海马伞,成功制备海马去神经支配动物模型后,通过Western Blot的方法检测切割后第1、3、7、14、21、28 d海马中lhx8蛋白的表达变化;通过免疫组织化学方法检测切割后第7天海马齿状回颗粒下层和门区中lhx8阳性细胞的表达定位,并通过免疫荧光化学方法检测lhx8/ChAT双标阳性细胞的共定位情况;切割SD大鼠穹窿海马伞并制备海马提取液,将其加入至细胞培养液中,模拟体内海马神经再生微环境,检测培养的海马放射状胶质细胞(radial slia cells,RGCs)向胆碱能神经元分化的情况。结果:切割穹窿海马伞后第7 d,lhx8蛋白表达量较其他各时相点明显增高;海马齿状回颗粒下层和门区中lhx8阳性细胞数目和光密度也明显高于正常侧,lhx8/ChAT双标阳性细胞数目也较正常侧增多;体外细胞培养,切割穹窿海马伞侧海马提取液也较正常侧海马提取液更能促进海马放射状胶质细胞向胆碱能神经元的分化。结论:切割穹窿海马伞后,lhx8表达明显上调,与海马齿状回的胆碱能神经再生有关。

关键词： lhx8 穹窿海马伞放射状胶质细胞胆碱能神经元海马

小鼠卵原细胞减数分裂启动与lhx8调节卵泡形成的分子机制

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小鼠卵原细胞减数分裂启动与Lhx8调节卵泡形成的分子机制

作者：张连君青岛农业大学

学位级别：硕士

原始生殖细胞通过减数分裂分化成配子是包括人类在内的真核生物最基本的生命过程之一。雌性哺乳动物卵原细胞正常进入减数分裂,形成初级卵母细胞,对于卵泡形成进而发育至成熟卵母细胞是十分重要的前期过程。有研究表明,布雷菲尔德菌素A... 详细信息

原始生殖细胞通过减数分裂分化成配子是包括人类在内的真核生物最基本的生命过程之一。雌性哺乳动物卵原细胞正常进入减数分裂,形成初级卵母细胞,对于卵泡形成进而发育至成熟卵母细胞是十分重要的前期过程。有研究表明,布雷菲尔德菌素A作为蛋白转运抑制剂,能影响卵母细胞的减数分裂。本研究分离11.5dpc雌性胎鼠生殖嵴后添加BFA体外培养,分析BFA诱导卵原细胞减数分裂启动及对卵泡发育的影响。通过联会复合体分析和定量RT-PCR分析,发现BFA能够促进卵母细胞减数分裂进程;将BFA处理后的雌性生殖嵴移植到肾囊下发育,发现BFA处理后的卵母细胞可以正常发育,能与颗粒细胞共同形成原始卵泡,并启动卵泡发育。本实验证实了BFA能够诱导小鼠雌性生殖细胞发生减数分裂启动,为研究减数分裂启动的机制提供了体外模型。卵泡发育受到了大量基因表达的调控,其中一个主要途径是通过转录因子参与调控基因以特定的强度在特定的时间与空间表达成蛋白质分子。表观遗传修饰作为转录水平主要的调节方式,可改变染色体的空间构象以及与转录因子的结合模式。本研究分析了卵子发生过程中,生殖细胞特异的转录因子lhx8的表达变化与表观遗传修饰之间的关系。通过免疫组织化学、定量RT-PCR及蛋白印迹分析检测其在13.5dpc （day post coitum）、17.5dpc、0dpp （day post partum）、3dpp、7dpp和14dpp各时间点卵子发育过程中的表达定位。结果表明,lhx8蛋白定位表达在卵母细胞的细胞核中,并且其表达水平在原始卵泡启动的时候最高。DNA甲基化分析结果表明,lhx8-3’甲基化变化明显,在Cysts解聚形成原始卵泡时期呈现低甲基化水平,次级卵泡时期呈现高甲基化水平,而lhx8-5’甲基化在整个卵泡形成与发育过程变化不明显。染色体免疫共沉淀-定量PCR分析结果表明,lhx8基因的组蛋白H3乙酰化水平随着原始卵泡募集而不断升高。综上研究结果,lhx8基因在原始卵泡激活过程中的高表达提示其可能在此过程中发挥重要作用,并且这种高表达与lhx8-3’非翻译区的低甲基化和组蛋白H3的高乙酰化相关。

关键词：减数分裂卵泡形成 lhx8 DNA甲基化组蛋白乙酰化

转录因子lhx8对初级卵泡发育的影响以及对Zp3基因表达调控的初步探究

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转录因子LHX8对初级卵泡发育的影响以及对Zp3基因表达调控的初步...

作者：金美玉中国医科大学

学位级别：硕士

目的:卵巢早衰(POF)是指女性40岁前,由于卵巢内卵泡耗竭而发生的卵巢功能衰竭,临床表现为原发性或继发性闭经,同时伴有围绝经期症状。卵巢作为雌性哺乳动物的生殖器官,具有产生成熟卵泡、分泌雌激素等功能,卵泡是其基本的结构与功能单位... 详细信息

目的:卵巢早衰(POF)是指女性40岁前,由于卵巢内卵泡耗竭而发生的卵巢功能衰竭,临床表现为原发性或继发性闭经,同时伴有围绝经期症状。卵巢作为雌性哺乳动物的生殖器官,具有产生成熟卵泡、分泌雌激素等功能,卵泡是其基本的结构与功能单位,由卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞组成。卵泡发育主要由原始卵泡开始,经历初级卵泡、次级卵泡、有腔卵泡最终发育成熟并排卵。卵泡由原始卵泡发育至次级卵泡的阶段称为腔前或非促性腺激素依赖阶段,该阶段主要依靠生殖细胞相关转录因子发挥重要的调控作用,例如FIGLA、SOHLH1、lhx8等均参与调控腔前卵泡的发育过程。lhx8作为生殖细胞发育相关转录因子,是LIM同源框转录因子家族的一员,LIM结构域由两个特殊的锌指构成,位于同源结构域的N端,使LIM-HD蛋白能够以同分或异分的方式与其他转录因子相互作用。文献报道lhx8雌鼠卵巢内无原始卵泡,原始卵泡组装发生异常,卵母细胞无法生长,出生后生殖细胞缺失,成年后卵巢萎缩,大量生殖细胞特异性基因表达紊乱,出现生殖功能障碍。生殖细胞的发育是一个连续的过程,在卵泡的不同发育阶段,相同的转录因子能够发挥不同的调控作用,广泛性敲除实验只能探究转录因子lhx8在原始卵泡组装过程中作用,lhx8表达贯穿于卵泡发育的各个阶段,在后续卵泡发育过程中作用机制尚未有文献报道。Zp1、Zp2、Zp3是小鼠透明带基因家族成员,Zp1、Zp2、Zp3通过编码翻译形成透明带蛋白,对卵母细胞的发育、受精及着床具有非常重要的作用。文献报道在卵泡发育的早期阶段,FIGLA能够直接转录调控Zp1、Zp2、Zp3基因的表达,SOHLH1能够转录调控Zp1、Zp3基因的表达,间接调控Zp2基因的表达。在初级卵泡阶段,SOHLH1蛋白逐渐消失,ZP1、ZP2、ZP3蛋白在初级卵泡中大量表达直至排卵前。文献报道对lhx8广泛性敲除新生雌鼠芯片结果分析,得出Zp2、Zp3等卵母细胞发育关键基因均出现表达差异,Zp1基因表达无显著差异,在初级卵泡中进行验证后,推测lhx8可能直接或间接调控Zp2、Zp3的表达。通过生物信息学预测发现Zp3基因启动子序列存在lhx8转录结合位点,因此推测lhx8可能直接调控Zp3基因的表达。本研究通过体外分离培养初级卵泡,运用显微注射siRNA的方法,通过形态学观察以及分子生物学实验初步探究转录因子lhx8对初级卵泡发育的影响以及对Zp3基因表达的调控。研究方法:本研究通过构建lhx8-pcDNA3.0真核表达质粒,验证lhx8-siRNA干扰效率;通过对比空白对照组、阴性对照组、显微注射lhx8-siRNA组体外培养初级卵泡,观察卵泡由初级发育至次级的形态学变化及时间点变化;通过q RT-PCR实验、Western blot实验检测lhx8基因沉默前后初级卵泡发育相关基因m RNA及蛋白的表达水平;构建Zp3启动子荧光素酶表达质粒和lhx8真核表达质粒并利用荧光素酶活性测定实验检测荧光值,通过Ch IP实验检测lhx8在Zp3基因启动子序列上的结合情况并筛选主要结合位点。结果:1、成功构建lhx8-pcDNA3.0真核表达质粒,通过与lhx8-siRNA共转染HEK293T细胞,获得lhx8-mus-972干扰效率最高,抑制率为95.3%。2、qRT-PCR实验和Western blot实验表明lhx8基因沉默后lhx8 m RNA和蛋白表达量均下降,说明显微注射lhx8-siRNA可以有效使初级卵泡中lhx8基因沉默。3、通过体外培养初级卵泡,阴性对照组与空白对照组相比表明:显微注射操作未对初级卵泡生长及发育造成影响,两组均2d开始逐渐发育,经历5d发育为次级卵泡;注射lhx8-siRNA组与阴性对照组相比:lhx8基因沉默后,初级卵泡发育较为缓慢甚至出现暂时停滞,颗粒细胞增殖受阻,显微注射后6d开始恢复发育,7d可发育为次级卵泡。4、qRT-PCR和Western blot实验结果显示,在初级卵泡中,lhx8基因沉默后,Zp2、Zp3m RNA表达量显著下调,ZP2、ZP3蛋白表达量显著下调。5、共转染lhx8真核表达质粒和Zp3启动子区域荧光素酶质粒的实验组荧光素酶活性高于对照组,Ch IP实验结果显示转录因子lhx8可以结合于Zp3转录起始位点上游(-1663bp,-1556bp)、(-1305bp,-1298bp)、(-1256bp,-1251bp)、(-1047bp,-1040bp)的结构域,与(-1305bp,-1298bp)(CTAATTAA)位点结合作用最强。结论:1、lhx8是卵泡由初级发育至次级的关键基因。2、转录因子lhx8可直接激活Zp3的转录,(-1305bp,-1298bp)(CTAATTAA)为主要特异性结合位点。

关键词：初级卵泡 lhx8-siRNA lhx8 Zp2 Zp3