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lgals1通过MCP-1调节肥胖幼鼠脂代谢的机制研究

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中国科技期刊数据库医药 2024年第6期 0194-0197页

作者：郝崇伟郴州市第一人民医院湖南郴州423001

分析lgals1通过MCP-1调节肥胖幼鼠脂代谢的机制。方法选取8-9周龄C57BL / 6孕小鼠40,小鼠在出生后进行鉴定,断乳后随机分笼,持续给予60%高脂或正常脂肪喂养70d,设置为lgals1?/? +高脂组,lgals1?/? +正常脂组,lgals1+/+ +高脂组,lgals1+... 详细信息

分析lgals1通过MCP-1调节肥胖幼鼠脂代谢的机制。方法选取8-9周龄C57BL / 6孕小鼠40,小鼠在出生后进行鉴定,断乳后随机分笼,持续给予60%高脂或正常脂肪喂养70d,设置为lgals1?/? +高脂组,lgals1?/? +正常脂组,lgals1+/+ +高脂组,lgals1+/+ +正常脂组,苦味酸标记,持续给予60%高脂或正常脂肪喂养70d,每3天监测体重并记录。比较各组大鼠临床指标。结果与lgals1+/+ +正常脂组相比,lgals1?/?+高脂组ALT、HDL-C下降、AST、TG、TC、LDL-C指标上升,lgals1+/++高脂组ALT、HDL-C上升、AST、TG、TC、LDL-C指标下降;lgals1?/?+正常脂组ALT、HDL-C上升、AST、TG、TC、LDL-C指标下降(Plgals1+/+ +正常脂组相比,lgals1?/?+高脂组胰岛素水平、胰岛素指数下降,lgals1+/++高脂组胰岛素水平、胰岛素指数下降,lgals1?/?+正常脂组胰岛素水平、胰岛素指数下降(Plgals1+/+ +正常脂组相比,lgals1?/?+高脂组lgals1、FABP4、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白表达下降,lgals1+/++高脂组lgals1、FABP4、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白表达下降,lgals1?/?+正常脂组lgals1、FABP4、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白表达下降(Plgals1通过FABP4调节能够促进脂肪细胞增殖和脂质沉积,从而促进肥胖的发生发展,维持机体能量平衡。

关键词： lgals1 FABP4调节肥胖幼鼠脂代谢

lgals1对猪繁殖与呼吸综合征病毒在Marc-145中复制的影响

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中国兽医学报 2020年第7期40卷 1280-1285页

作者：崔一龙石芸薛江东马德慧内蒙古民族大学动物科学技术学院内蒙古通辽028000 内蒙古自治区肉牛疾病防控工程技术研究中心内蒙古通辽028042

为探索lgals1对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在Marc-145中复制的影响,设置lgals1免疫血清和PRRSV共同孵育Marc-145细胞的试验组、lgals1 siRNA转染Marc-145细胞后再接种PRRSV的试验组以及PRRSV直接孵育Marc-145细胞的对照组,利用间接... 详细信息

为探索lgals1对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在Marc-145中复制的影响,设置lgals1免疫血清和PRRSV共同孵育Marc-145细胞的试验组、lgals1 siRNA转染Marc-145细胞后再接种PRRSV的试验组以及PRRSV直接孵育Marc-145细胞的对照组,利用间接免疫荧光、TCID50测定、荧光定量和Western blot来测定病毒的增殖、滴度变化和表达情况。结果发现,抗lgals1血清组、转染lgals1 siRNA质粒组与对照组荧光、TCID50、病毒mRNA和蛋白水平差异均不显著。结果表明,lgals1对PRRSV在Marc-145中复制无影响。

关键词： lgals1 猪繁殖与呼吸综合征病毒 siRNA 复制

lgals1与PRRSV 2b蛋白相互作用的验证研究

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LGALS1与PRRSV 2b蛋白相互作用的验证研究

作者：杨达汉内蒙古民族大学

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是一种单股正链RNA病毒,属于尼多病毒目(Nido virales),动脉炎病毒科(Ateriviridae),动脉炎病毒属(Arterivirus)。PRRSV能够引起母猪繁殖功能障碍和新生仔猪呼吸道症状。2b蛋白是PRRSV中较小的结构蛋白,它可能在病毒脱壳时扮演某种离子通道的角色,与病毒感染过程有关,可以促使PRRSV粒子脱壳,释放RNA到宿主细胞内,但对病毒的装配不起作用。研究2b蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用,对全面了解PRRSV感染机制与深入认识2b蛋白功能具有重要意义。在前期研究中,用含有PRRSV 2b基因构建的钓饵菌株与猪肺泡巨噬细胞(PAM)cDNA文库进行酵母双杂交,成功的筛选到了与其相互作用的凝集素-1(lgals1)。本研究成功构建了pGADT7-lgals1重组质粒,并转入Y187酵母感受态中,与含有2b基因的Y2H酵母菌株进行了酵母回返试验,结果显示在SD/-Trp-Leu-His-Ade/AbA/X-α-gal的平板上长出了蓝色菌落,说明两种蛋白间发生相互作用。在GST-pull down试验中,构建了带有GST标签的重组质粒pEGX-KG-2b和带有His标签的重组质粒pET-28a-lgals1,通过转入大肠杆菌感受态BL21中进行原核诱导表达,蛋白经过纯化后,进行pull down试验,结果显示,PRRSV 2b与lgals1之间发生相互作用。在免疫共沉淀试验中,构建了pCMV-HA-2b与pCMV-Myc-lgals1真核表达重组质粒,并将其共同转染至HEK293细胞中培养,使细胞在非变性条件下裂解,通过免疫共沉淀的方法验证了PRRSV 2b与lgals1之间发生相互作用。本研究利用酵母回返试验、GST-pull down试验、免疫共沉淀试验三种方法成功验证了lgals1与PRRSV 2b蛋白间的相互作用,为研究PRRSV感染途径和增殖过程提供了理论基础。

关键词： 2b蛋白 lgals1 酵母双杂交 GST-pull down 免疫共沉淀

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猪lgals1基因的原核表达及序列分析

中国生物制品学杂志 2020年第8期33卷 885-889页

作者：崔一龙杨达汉石芸范培超薛江东马德慧内蒙古民族大学动物科学技术学院内蒙古通辽028000 内蒙古自治区肉牛疾病预防与防控工程技术研究内蒙古通辽028042

目的原核表达猪源lgals1并进行序列分析。方法提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,RT-PCR法扩增lgals1的cDNA序列,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-lgals1并测序,应用生物分析软件对基因序列进行同源性比对及系统进化树分析;将构建正... 详细信息

目的原核表达猪源lgals1并进行序列分析。方法提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,RT-PCR法扩增lgals1的cDNA序列,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-lgals1并测序,应用生物分析软件对基因序列进行同源性比对及系统进化树分析;将构建正确的质粒pMD18-T-lgals1亚克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a-lgals1,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、Ni2+亲和层析纯化后,进行Western blot分析。结果PCR扩增获得了全长为408 bp的cDNA序列,与GenBank中登录的lgals1编码区序列(NM001001867.1)相似性达99%,核苷酸序列同源性分析表明,克隆基因序列与猪源lgals1同源性最高;质粒pET-30a-lgals1经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;表达的lgals1相对分子质量约21000,经纯化后,可与lgals1 Antibody发生反应,具有反应原性。结论成功表达了猪源lgals1。

关键词：猪 lgals1 克隆序列分析原核表达

水泡性口炎病毒G蛋白与lgals1的相互作用研究

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水泡性口炎病毒G蛋白与LGALS1的相互作用研究

作者：王丽吉林大学

学位级别：硕士

水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus, VSV）是一种非节段的反义RNA病毒，属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）水泡病毒属（Vesiculovirus）。其天然宿主有牛、猪、马和其他哺乳动物以及它们的昆虫媒介。VSV感染动物后特征性临床... 详细信息

水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus, VSV）是一种非节段的反义RNA病毒，属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）水泡病毒属（Vesiculovirus）。其天然宿主有牛、猪、马和其他哺乳动物以及它们的昆虫媒介。VSV感染动物后特征性临床表现为舌、唇、口腔黏膜、蹄冠部和乳头上皮出现水疱和溃疡，与口蹄疫、水疱疹、猪水泡病等极为相似，因此，在兽医临床诊断上极易误诊。此外，VSV还可以感染人，轻者引起口唇水泡和流感样症状，严重的可导致病毒性脑炎。因此，该病毒感染具有重要的公共卫生学意义。VSV吸附和入侵宿主细胞主要由表面的糖蛋白G介导，G蛋白是病毒感染力的决定性抗原，具有刺激机体产生中和抗体的作用。G蛋白通过结合宿主细胞表面受体，直接影响着病毒吸附宿主细胞的过程以及病毒的出芽。尽管针对VSV的受体研究有一些文献资料，但VSV-G蛋白的受体尚未确定。因此，开展VSV-G蛋白互作蛋白的研究将对其受体的确定、病毒的侵染过程及致病机制等都具有重要的意义。在前期研究中，以VSV-G为诱饵，利用酵母双杂交方法从MDBK细胞的cDNA文库中筛选出VSV-G的互作蛋白半乳糖凝集素1（lectingalactoside-binding soluble1, lgals1），并通过pull-down实验进行了初步的验证。本研究在此基础上，将VSV-G全基因插入到pEF1a-IRES-DsRed-Express2真核表达载体中，构建了pEF1α-VSV-G重组质粒;双酶切和PCR的鉴定结果证实了该重组质粒的正确性;将pEF1α-VSV-G转染至BHK-21细胞中，24h后进行的荧光检测结果可见蛋白表达后发出的红色荧光;Western blot对细胞总蛋白中VSV-G蛋白的检测结果显示出与预期目的蛋白大小一致的条带，说明VSV-G蛋白在细胞内成功表达。同时，本研究将lgals1基因插入到pEGFP-N1真核表达载体中，构建了pN1-lgals1重组质粒并进行了鉴定。将双酶切及PCR方法鉴定正确的重组质粒转染BHK-21细胞24后进行荧光检测，可见有明显的绿色荧光出现;Westernblot检测结果显示，转染重组质粒的细胞中lgals1的表达量明显高于转染空载体的细胞内lgals1的表达量，说明该基因在细胞中成功表达。在上述两个基因成功表达的基础上，本研究利用间接免疫荧光方法对lgals1与VSV-G在MDBK细胞中的相互作用进行了定位分析，可见红色与绿色荧光重叠后形成的黄色荧光，初步证明二者发生了相互作用;通过免疫共沉淀实验，用兔抗VSV-G抗体分别对共转染pEF1α-VSV-G和pEGFP-N1重组质粒的BHK-21细胞和单独转染pEGFP-N1重组质粒的BHK-21细胞的总蛋白中的VSV-G蛋白及其结合蛋白进行筛选，并用Western blot对筛选的蛋白进行检测。结果显示，前者同时检测到VSV-G和lgals1蛋白，而后者并未检测到VSV-G或lgals1蛋白，进一步验证了VSV-G与lgals1能够发生结合。将不同质量的lgals1预先与VSV作用后，再接种MDBK细胞，观察lgals1对病毒的抑制效果。结果显示，随着与VSV结合的lgals1增多，细胞的病变情况逐渐减轻，而且过量的lgals1能够阻碍VSV对细胞的感染。用一定量的VSV接种MDBK细胞，荧光定量PCR检测细胞中lgals1的变化，结果显示lgals1基因的表达量在VSV感染细胞后显著上升。综合以上实验结果，本研究确定lgals1可以与VSV-G蛋白发生相互作用，而且lgals1在VSV感染细胞过程中充当受体的角色，其表达水平与VSV的复制水平呈正相关。本研究结果不仅为深入探讨VSV所致的水泡性口炎发病机制奠定基础，有助于揭示病毒的感染途径和复制过程等一系列分子致病机制问题，而且将可为利用鉴定获得的受体蛋白研制新的预防和治疗制剂提供物质基础。

关键词：水泡性口炎病毒 G蛋白 lgals1 真核表达蛋白互作

人源肾细胞(HEK293T)蛋白lgals1真核表达载体的构建

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现代畜牧科技 2021年第8期40卷 6-9,16页

作者：刘起豪孙延鸣石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

目的:扩增lgals1、ZFP36L2、WBSCR22三种蛋白的基因,构建其真核表达载体,为后续蛋白互作、毒力因子分析等实验奠定基础。方法:根据毒力蛋白基因序列,使用premier 5.0软件设计了三对特异性引物用于基因扩增。以HEK293T细胞中提取出的RNA... 详细信息

目的:扩增lgals1、ZFP36L2、WBSCR22三种蛋白的基因,构建其真核表达载体,为后续蛋白互作、毒力因子分析等实验奠定基础。方法:根据毒力蛋白基因序列,使用premier 5.0软件设计了三对特异性引物用于基因扩增。以HEK293T细胞中提取出的RNA反转录出的cDNA为模板,PCR法扩增三种基因lgals1、ZFP36L2、WBSCR22,连接至pMD19-T载体,构建出pMD19-T-lgals1、ZFP36L2、WBSCR22,分别经Nde I和BamH I,EcoR I和Nde I,BamH I和EcoR I双酶切后连接到pGBKT7真核表达载体中,构建出pGBKT7-lgals1、pGBKT7-ZFP36L2、pGBKT7-WBSCR22。结果:目的基因lgals1、ZFP36L2、WBSCR22扩增成功,pMD19-T-lgals1、pMD19-T-ZFP36L2、pMD19-T-WBSCR22连接成功,双酶切成功,真核表达载体pGBKT7-lgals1构建成功,pGBKT7-ZFP36L2、pGBKT7-WBSCR22构建失败。结论:真核表达载体pGBKT7-lgals1成功构建,为后续实验的进行提供了便利。pGBKT7-ZFP36L2、pGBKT7-WBSCR22构建失败,积累了丰厚的实验经验。

关键词： HEK293T lgals1 ZFP36L2 WBSCR22 真核表达载体

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抑制差减杂交克隆肺泡发育上游调节基因

分子细胞生物学报 2006年第6期39卷 553-562页

作者：赵立青 Thiennu H.Vu 南开大学生命科学学院生物化学与分子生物学系加州大学旧金山分校(UCSF)医学系肺生物学研究中心

肺泡是肺进行气体交换的基本功能单位,但对其发生、发育及调节机制的认识还十分有限。为克隆调节肺泡发生的新基因,我们利用抑制差减杂交技术,以与肺泡发生密切相关的原始肺泡期和肺泡期的小鼠肺为材料,分别相对于肺泡成熟期鼠肺组织构... 详细信息

肺泡是肺进行气体交换的基本功能单位,但对其发生、发育及调节机制的认识还十分有限。为克隆调节肺泡发生的新基因,我们利用抑制差减杂交技术,以与肺泡发生密切相关的原始肺泡期和肺泡期的小鼠肺为材料,分别相对于肺泡成熟期鼠肺组织构建了两个抑制差减杂交cDNA文库,从中筛选出118个肺泡发生的上游因子。这些基因涉及机体生长发育过程及其调节的多个方面。如可增加内皮细胞渗透性而参与肺血管系统的发生和重建的瞬时受体蛋白(TRPC4),通过刺激平滑肌生长促进肺泡壁毛细血管的发育凝集素(lgalsl)等。特别是神经元蛋白3．1(亦称P311),因其同时特异表达于原始肺泡期和肺泡期而引起我们的注意。实时PCR进一步显示,P311表达于肺发育的全过程,但表达高峰仅出现于肺泡发育相关阶段,而在成熟肺组织中降至最低点。提示P311可能与肺泡形成密切相关。

关键词：肺泡发育抑制差减杂交 P311 lgals1 TRPC4

水疱性口炎病毒糖蛋白基因的真核表达及其初步应用

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中国兽医学报 2014年第3期34卷 446-449页

作者：王丽王改丽兰云刚赵魁贺文琦高丰宋德光吉林大学动物医学学院吉林长春130062

为验证水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)糖蛋白与半乳糖凝集素1(lectin galactoside-binding soluble 1,lgals1)之间的相互作用,本研究将VSV-G全基因插入至真核表达载体pEF1α-IRES-DsRed-Express2中,构建了真核表达质粒pEF1α-VSV-G。在DNA转染试剂的作用下,将pEF1α-VSV-G转染至BHK-21细胞中,转染后24h经荧光显微镜观察即可见细胞内有红色荧光信号。提取细胞蛋白后经Western-blotting检测,证明VSV-G蛋白成功表达。将表达的蛋白与lgals1共同用于免疫共沉淀试验,Western-blotting检测结果说明表达的蛋白可以用于蛋白相互作用的研究。本试验为深入开展VSV-G蛋白受体的研究奠定了基础。

关键词：水疱性口炎病毒 G蛋白真核表达 lgals1

生物信息学分析和预测Galectin-1的靶向作用miRNA分子

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现代医学与健康研究电子杂志 2017年第2期1卷 7-9页

作者：张林付翔杰张魏谭潭南华大学附属郴州市第一人民医院湖南郴州423000

目的通过生物信息学软件分析和预测能够靶向结合Galectin-1(lgals1)的miRNA。方法首先预测能够靶向结合Galectin-1的miRNAs,并对所获得的miRNAs进行计算和分析,获得与Galectin-1结合特异性最强,稳定性最高的miRNA。结果有12个miRNAs可与... 详细信息

目的通过生物信息学软件分析和预测能够靶向结合Galectin-1(lgals1)的miRNA。方法首先预测能够靶向结合Galectin-1的miRNAs,并对所获得的miRNAs进行计算和分析,获得与Galectin-1结合特异性最强,稳定性最高的miRNA。结果有12个miRNAs可与Galectin-1靶向结合;其中,miR-1827、miR-22与Galectin-1结合的稳定性和特异性均较好。结论 miR-1827、miR-22可能靶向结合于Galectin-1。

关键词：生物信息学 lgals1 miRNA 靶基因