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lxrα gene downregulation by lentiviral-based RNA interference enhances liver function after fatty liver transplantation in rats

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Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International 2015年第4期14卷 386-393页

作者： Ying-Peng Zhao Li Li Jing-Pan Ma Gang Chen Jian-Hua Bai Department of Hepatobiliary and Transplantation Surgery Ganmei Affiliated Hospital Kunming Medical University

Steatotic liver grafts, although accepted, increase the risk of poor posttransplantation liver function. However, the growing demand for adequate donor organs has led to the increased use of so-called marginal grafts. Liver X receptor alpha （lxrα） is important in fatty acid metabolism and inter- related with the specific ischemia-reperfusion injury in fatty liver transplantation. This study aimed to investigate whether lxra RNA interference （RNAi） could improve the organ func- tion of liver transplant recipients. METHODS： Fifty Sprague-Dawley rats were fed with a high-fat diet and 56% alcohol. The livers of these animals had greater than 60% macrovesicular steatosis and were used as liver do- nors. The experimental donors were treated with 7×10^7 TU lxrα-RNAi-LV of a mixture injection and control donors with negative control-LV vector injection into the portal vein 72 hours before the operation. The effects of lxra-RNAi-LV were assessed by serum aminotransferases, histology, immunostain- ing, and protein levels. The transcription of lxrα mRNA was assessed by reverse transcription-polymerase chain reaction. RESULTS： Compared with controls, lxra RNAi inhibited the expression of lxrα at the mRNA （0.53±0.03 vs 0.94±0.02, P〈0.05） and protein levels （0.51±0.08 vs 1.09±0.12, P〈0.05）. lxra RNAi also decreased the expressions of sterol regula- tory element-binding protein lc （SREBP-Ic） and CD36. lxra RNAi consequently reduced fatty acid accumulation in hepa- tocytes. Compared with control animals, lxrα RNAi-treated group had lower serum alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, interleukin-1β, and tumor necrosis factor- alpha levels and milder pathologic damages. TUNEL analysisrevealed a significant reduction of apoptosis in the livers of rats treated with lxra-RNAi-LV, and overall survival as determined by the Kaplan-Meier method was improved among rats treated with lxrα-RNAi-LV （P〈0.05）. CONCLUSION： lxra-RNAi-LV treatment significantly down- regulated lxra expr

关键词： fatty liver liver transplantation lxrα RNA interference ischemia-reperfusion injury

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基于报告基因检测的PXR、FXR和lxrα激动剂高通量筛选模型的建立

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中国药理学通报 2015年第2期31卷 289-293页

作者：庄嘉琅曾行钟国平金晶苟晓丽毕惠嫦黄民中山大学药学院药物代谢与药动学实验室广东广州510006

目的建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型,用来发现PXR、FXR和lxrα受体激动剂。方法利用Real-time定量PCR方法比较HEK293、Hep G2和LS174T细胞中内源性核受体PXR、FXR和lxrα的表达量,将p SG5-h PXR和p GL3-XREM-CYP3A4、p EGFP-N3... 详细信息

目的建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型,用来发现PXR、FXR和lxrα受体激动剂。方法利用Real-time定量PCR方法比较HEK293、Hep G2和LS174T细胞中内源性核受体PXR、FXR和lxrα的表达量,将p SG5-h PXR和p GL3-XREM-CYP3A4、p EGFP-N3-h FXR和EcRETK-Luc、p CMX-FLAG-h lxrα和p GL3-XREM-CYP3A4等质粒分别共转染到工具细胞中,优化共转染比例,并考察阳性药与萤光素酶报告基因表达强度的量效关系、模型特异性和稳定性。结果 1根据Real-time定量PCR结果,模型选用低表达PXR、FXR和lxrα的HEK293细胞作为工具细胞;2根据不同共转染比例对报告基因活性的结果,PXR、FXR和lxrα报告基因药物筛选模型的报告基因和过表达质粒比例,最终分别选择1∶1、2∶1和2∶1;3模型中,报告基因活性均与相应阳性药物(PXR/Rif、FXR/CDCA和lxrα/T0901317)呈剂量依赖性增长;4仅PXR激动剂Rif、FXR激动剂CDCA和lxrα激动剂T0901317可分别明显增加相应筛选模型的报告基因活性,分别重复5次试验后,计算得Z'值分别为0.58、0.66和0.63。结论该研究建立的PXR、FXR和lxrα激动剂高通量筛选模型,具有良好的特异性和稳定性,适用于对PXR、FXR和lxrα受体激动剂的筛选,进而开发以核受体作为药物靶点的药物。

关键词：核受体报告基因高通量筛选 PXR FXR lxrα

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Effects of Siwei Yuganzi decoction on lxrα and CYP7A1 in hyperlipidemic rats

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Traditional Medicine Research 2019年第6期4卷 305-313页

作者： Ru-Yi Yang Hong-Bin Wang Pan-Pan Zhou Department of Integrative Medicine Affiliated Hospital of Qinghai UniversityXining 810000China Medical College of Qinghai University Xining 810000China.

Background:Hyperlipidemia(HLP)is a disorder in which lipids in the blood are disturbed due to abnormal lipid *** and fibrates lipid-regulating drugs prevent the generation of lipids and improves HLP,thereby reducing the likelihood of developing cardiovascular and cerebrovascular ***,their adverse reactions and side effects limit a wide range of clinical *** medicine compound preparation Siwei Yuganzi decoction(SYD)is an adaptation of a classical prescription of the Tibetan medicine Sanguo decoction,that has been proved to have the effect of improving lipid metabolism;however,its possible mechanism remains ***:Sixty specific-pathogen free grade Sprague Dawley rats were randomly divided into the blank control group,the HLP group,the Chinese patent medicine Xuezhikang positive control group,and the treatment groups with Tibetan SYD high-,middle-,and low-dosages *** rats were assigned to each *** rat in these groups was fed with a high-fat emulsion to establish the hyperlipidemic animal model,except for those in the blank control *** the rats in the blank control and HLP groups were fed with 0.9%normal saline,those in Xuezhikang group were fed with Xuezhikang suspension at the dose of 0.11 g/kg/d,and those in SYD groups were fed with the SYD suspension at the dosage of 16.2 g/kg/d(high dosage),10.8 g/kg/d(middle dosage),and 5.4 g/kg/d(low dosage),*** 8 weeks,the levels of serum total cholesterol(TC),triglyceride(TG),low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C),and high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C)were detected by the *** mRNA and protein expression levels of liver X receptorα(lxrα)and cholesterol 7α-hydroxylase 1(CYP7A1)were detected using RT-PCR,western blotting,and ***:The serum levels of TC,TG,and LDL-C in the HLP group were higher than those in the blank control group(P<0.05),whereas the serum levels of HDL-C and the expression l

关键词： Hyperlipidemia Experimental study Tibetan medicine Siwei Yuganzi decoction lxrα CYP7A1

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鹅lxrα基因的克隆及填饲对其mRNA水平的影响

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畜牧兽医学报 2009年第9期40卷 1405-1409页

作者：韩春春黄晓宇王继文四川农业大学畜禽品种资源发掘与利用重点实验室雅安625014

为了研究填饲对lxrαmRNA表达水平的影响,本试验以四川白鹅和朗德鹅为试验对象,通过RT-PCR方法克隆了鹅肝脏X受体α(lxrα)基因部分序列,并采用SYBR-Green法研究了填饲对lxrα基因在肝脏和脂肪组织中转录水平的影响。结果获得了1 005 b... 详细信息

为了研究填饲对lxrαmRNA表达水平的影响,本试验以四川白鹅和朗德鹅为试验对象,通过RT-PCR方法克隆了鹅肝脏X受体α(lxrα)基因部分序列,并采用SYBR-Green法研究了填饲对lxrα基因在肝脏和脂肪组织中转录水平的影响。结果获得了1 005 bp的鹅lxrα部分序列,且与其它物种有较高的相似性,但存在8个氨基酸变异位点。lxrα基因在肝脏、腹脂和皮脂中都有表达,但在肝脏中的表达量最高。填饲引起鹅皮脂、腹脂和肝脏的lxrαmRNA表达丰度的显著增加。对照组中,lxrα在朗德鹅肝中的表达量高于四川白鹅(Plxrα的表达量四川白鹅显著高于朗德鹅(PlxrαmRNA表达丰度与皮脂、腹脂和肝脏的相对质量呈显著正相关,并且朗德鹅的相关性要强于四川白鹅。结论:填饲引起鹅肝脏和脂肪组织的lxrαmR-NA表达丰度的显著增加,填饲对lxrαmRNA表达的影响存在显著的品种差异。

关键词：鹅填饲 lxrα 基因克隆 mRNA表达

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过表达lxrα和RXRA对HepG2全基因组转录的影响

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基因组学与应用生物学 2020年第10期39卷 4711-4726页

作者：肖龙会黄海燕吴强上海交通大学生命科学技术学院上海200240 上海交通大学系统生物医学研究院比较生物医学研究中心系统生物医学教育部重点实验室上海200240 上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200240

lxrα(Liver Xreceptorα)是一种氧甾醇核受体在免疫和脂类代谢等生物过程中发挥重要作用,为了进一步探究lxrα的生物学功能,本研究对lxrα和RXRA共同过表达的HepG2细胞进行了全基因组转录分析。在HepG2细胞中lxrα和RXRA共同过表达导致... 详细信息

lxrα(Liver Xreceptorα)是一种氧甾醇核受体在免疫和脂类代谢等生物过程中发挥重要作用,为了进一步探究lxrα的生物学功能,本研究对lxrα和RXRA共同过表达的HepG2细胞进行了全基因组转录分析。在HepG2细胞中lxrα和RXRA共同过表达导致451个基因发生差异表达(plxrα和RXRA过表达也导致细胞死亡和凋亡相关基因的部分沉默或激活,证明lxrα也参与调控细胞死亡和凋亡。本研究首次在HepG2细胞中通过同时过表达lxrα和RXRA分析lxrα的靶基因及其所参与的生物过程和信号通路,为后续lxrα的功能发掘和相关疾病的药物开发和治疗提供了理论依据。

关键词： lxrα HepG2 RNA-seq 差异基因表达分析

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六味降脂汤对NAFLD大鼠肝脏脂肪酸代谢及lxrα-SREBP-1c-FAS信号通路的影响

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中成药 2023年第2期45卷 406-414页

作者：全德森柯尊丽张远哲黎豫川马晶鑫刘林潇田维毅蔡琨贵州中医药大学基础医学院贵州贵阳550025 贵州中医药大学第二附属医院药学部贵州贵阳550025

目的探究六味降脂汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠的干预作用及其机制。方法 42只大鼠随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组(0.9 mg/kg)及六味降脂汤低、中、高剂量组(5.4、10.7、21.4 g/kg),给予高脂饲料合并高脂乳剂喂养6周建立N... 详细信息

目的探究六味降脂汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠的干预作用及其机制。方法 42只大鼠随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组(0.9 mg/kg)及六味降脂汤低、中、高剂量组(5.4、10.7、21.4 g/kg),给予高脂饲料合并高脂乳剂喂养6周建立NAFLD大鼠模型,造模成功后予相应药物干预2周后,检测血清ALT、AST、SOD活性及MDA、NEFA水平,检测肝组织TC、TG水平并计算肝脏指数,HE和油红O染色观察肝组织病理学改变,RT-qPCR和免疫组化(IHC)法检测肝组织lxrα、SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠肝组织存在广泛较大的脂肪滴,脂肪变性明显,血清ALT、AST活性,MDA、NEFA水平及肝组织TC、TG水平,lxrα、SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白表达均升高(Plxrα、SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),肝组织SOD活性升高(P<0.05,P<0.01)。结论六味降脂汤具有调控肝脏脂肪酸代谢,减轻氧化应激反应,从而治疗NAFLD的作用,其潜在机制可能与抑制SREBP-1c-FAS信号通路有关。

关键词：六味降脂汤 NAFLD 脂肪酸代谢氧化应激 lxrα SREBP-1c FAS

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胆酸对代谢性炎症模型大鼠炎性因子及PPARα和lxrα表达与分布的影响

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中国兽医学报 2022年第6期42卷 1241-1248页

作者：何秀玲孙苗石琳琳李培锋关红郭凤英内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010011 内蒙古农业大学职业技术学院内蒙古包头014109

为了探讨胆酸对代谢性炎症模型大鼠炎症的影响,揭示其调控机理,从而为宠物新型抗代谢性炎症药物的研究提供试验基础,试验用饲喂高脂饲料60 d的SD大鼠建立代谢性炎症模型。将大鼠随机分为5组,即模型组,胆酸高、中、低剂量组,阴性对照组,... 详细信息

为了探讨胆酸对代谢性炎症模型大鼠炎症的影响,揭示其调控机理,从而为宠物新型抗代谢性炎症药物的研究提供试验基础,试验用饲喂高脂饲料60 d的SD大鼠建立代谢性炎症模型。将大鼠随机分为5组,即模型组,胆酸高、中、低剂量组,阴性对照组,连续灌胃给药30 d后处死大鼠,采用HE染色法,观察肝脏组织病理学变化;采用ELISA试剂盒检测单核细胞趋化因子1(MCP-1)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)的含量;采用实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、白介素10(IL-10)、白介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)表达量;采用免疫组化法检测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)及肝X受体α(lxrα)的分布及表达。结果显示,与阴性对照组相比,模型组大鼠的肝脏组织中出现脂肪空泡以及以巨噬细胞为主的炎性细胞聚集;而给予胆酸治疗的高、中、低剂量组大鼠的肝脏细胞中细胞形态和大小均正常,且炎性细胞减少以及脂肪蓄积得到改善。与阴性对照组相比,模型组的MIP-1α及IL-8的表达量极显著升高(Plxrα受体均分布在肝脏细胞核,模型组PPARα表达量较阴性对照组极显著下降(Plxrα表达量极显著下调(Plxrα的表达,抑制脂肪生成,从而降低代谢性炎症模型大鼠的炎症反应。

关键词：大鼠胆酸代谢性炎症 PPARα lxrα

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lxrα基因RNA干扰和过表达对奶山羊乳腺上皮细胞脂肪酸代谢的影响

LXRα基因RNA干扰和过表达对奶山羊乳腺上皮细胞脂肪酸代谢的影响

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作者：钟瑜西北农林科技大学

学位级别：硕士

肝X受体α(Liver X receptorsα,lxrα)为核受体超家族中的一员,在巨噬细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞、肠细胞等脂类代谢旺盛的细胞中表达量较高。lxrα基因在分布上具有组织的特异性,在维持胆固醇代谢、脂肪代谢、炎症反应以及糖代谢平... 详细信息

肝X受体α(Liver X receptorsα,lxrα)为核受体超家族中的一员,在巨噬细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞、肠细胞等脂类代谢旺盛的细胞中表达量较高。lxrα基因在分布上具有组织的特异性,在维持胆固醇代谢、脂肪代谢、炎症反应以及糖代谢平衡等方面有重要的调节作用。本研究克隆了西农萨能奶山羊lxrα基因cDNA;重组并包装了lxrα基因的shRNA腺病毒干扰载体及腺病毒过表达载体;通过RT-qPCR技术在奶山羊乳腺上皮细胞中检测了shRNA腺病毒干扰载体、lxrα激动剂TO901317及腺病毒过表达载体对lxrα、脂肪酸合酶(FASN)、脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、乙酰辅酶A羧化酶(ACACA)、固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1)、过氧化物酶体激活物增生受体(PPARγ)基因的mRNA表达量的影响,为lxrα基因在脂肪酸代谢中的功能研究提供了实验依据。主要研究结果如下:(1)利用RT-PCR和RACE技术克隆了西农萨能奶山羊lxrα基因cDNA全长,并获得GenBank登陆号GU332719,全长1654bp,CDS区长1344bp,编码447个氨基酸;5′UTR 150bp;3′UTR 160bp。山羊lxrα基因CDS区与牛、猪、小鼠、大鼠和人lxrα基因CDS区的核苷酸同源性分别为98%、93%、87%、87%、90%。lxrα基因5′UTR和3′UTR序列与牛、猪、小鼠、人的核苷酸序列同源性分别为94%、89%、84%、80%和98%、87%、81%、84%。(2)用本实验筛选出的最佳浓度为10-6mol/L的激动剂TO901317处理奶山羊乳腺上皮细胞后发现,lxrα、FASN、ACACA、SREBP-1基因的mRNA表达量上升,H-FABP、PPARγ基因的表达量下降。(3)转染HEK293细胞,筛选出两条具有明显干扰效果的shRNA(pENTR/ CMV-GFP/U6- Lsh-490和pENTR/CMV-GFP/ U6- Lsh-923)。通过LR重组,在HEK293细胞中,将构建的shRNA载体进行了重组和包装,两个腺病毒的滴度均为5×108 PFU/mL,在乳腺上皮细胞中的最佳MOI值分别为30、75。pENTR/ CMV- GFP/ U6- Lsh-490腺病毒载体在乳腺上皮细胞中对lxrα基因的干扰效率为70%。pENTR/ CMV- GFP/U6- Lsh-490腺病毒感染乳腺上皮细胞后,FASN、ACACA表达量下降,而SREBP-1和PPARγ基因的mRNA表达量上升。(4)构建了lxrα基因过表达穿梭载体,同源重组后转染HEK293细胞,获得滴度为5×107PFU/mL的腺病毒过表达载体(Ad-lxrα),其在乳腺上皮细胞中最佳MOI值为250。荧光实时定量结果显示,重组腺病毒过表达载体Ad-lxrα感染乳腺上皮细胞,lxrα、FASN、ACACA、SREBP-1基因mRNA表达量均上升;H-FABP、PPARγ基因在乳腺上皮细胞中的表达量均下降。本研究克隆了lxrα基因cDNA全长,构建了lxrα基因的腺病毒干扰及过表达载体。RNA干扰lxrα基因导致奶山羊乳腺上皮细胞FASN、ACACA的表达量下降,SREBP-1和PPARγ基因的表达量上升。过表达lxrα基因可引起乳腺上皮细胞FASN、ACACA、SREBP-1基因的表达上调和PPARγ基因的表达下调,为进一步研究lxrα基因的功能提供了实验依据。

关键词：奶山羊 lxrα RNA干扰及过表达腺病毒载体乳腺上皮细胞

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三七总皂苷对泡沫细胞内ABCA1和lxrα mRNA表达的影响

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第三军医大学学报 2009年第7期31卷 592-594页

作者：李卓莹何雪峰张海港贾乙李晓辉第三军医大学新药研究中心暨药剂学教研室重庆400038

目的观察三七总皂苷(Panaxnotoginsengsaponins,PNS)对泡沫细胞ABCA1和lxrαmRNA表达及脂质沉积的影响。方法提取SD大鼠腹腔巨噬细胞纯化后,与高、中、低剂量PNS(80、40、20μg/ml)及氧化低密度脂蛋白共孵育48h。油红O染色观察细胞内脂... 详细信息

目的观察三七总皂苷(Panaxnotoginsengsaponins,PNS)对泡沫细胞ABCA1和lxrαmRNA表达及脂质沉积的影响。方法提取SD大鼠腹腔巨噬细胞纯化后,与高、中、低剂量PNS(80、40、20μg/ml)及氧化低密度脂蛋白共孵育48h。油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值。采用RT-PCR法检测泡沫细胞ABCA1和lxrαmRNA表达情况。结果模型组细胞中TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(PlxrαmRNA的表达均显著高于模型组(PlxrαmRNA表达并减少巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质沉积。

关键词：三七总皂苷泡沫细胞 ABCA1 lxrα

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西农萨能奶山羊lxrα基因的克隆、序列分析及组织表达

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西北农业学报 2011年第3期20卷 8-14页

作者：王维罗军钟瑜朱越滕炎玲林先滋王桢西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100

采集西农萨能奶山羊乳腺组织,利用RT-PCR和RACE技术分离并克隆lxrα基因的cDNA序列。其全长1 654 bp(GenBank收录号为GU332719),包括5′UTR150 bp,CDS1 344 bp和3′UTR160 bp,该基因编码447个氨基酸。经氨基酸序列分析发现,山羊lxrα与G... 详细信息

采集西农萨能奶山羊乳腺组织,利用RT-PCR和RACE技术分离并克隆lxrα基因的cDNA序列。其全长1 654 bp(GenBank收录号为GU332719),包括5′UTR150 bp,CDS1 344 bp和3′UTR160 bp,该基因编码447个氨基酸。经氨基酸序列分析发现,山羊lxrα与GenBank中牛(Bos taurus)、小鼠(Mus muscu-lus)、褐鼠(Rattus norvegicus)、猪(Sus scrofa)和人(Homosapiens)的lxrα相似性较高,均在90%以上。蛋白质结构分析表明,其蛋白质分子量为50.35 ku,等电点为6.3。具有受体特征结构域:配体结合区域(Lig-and-binding Domain,LBD)、DNA结合区域(DNA-binding Domain,DBD)和锌指蛋白C4型区域(Zinc fingerC4 type,zf-C4)。整个序列具有较强的亲水性且不含信号肽与跨膜结构,该基因定位于细胞核。此外,还通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对lxrα基因进行组织表达分析。在所检测的西农萨能奶山羊11个组织中均有lxrα基因的mRNA存在,其中小肠组织中表达最丰富,乳腺、肝脏、脾脏、皮脂次之,心脏相对最低。

关键词：西农萨能奶山羊 lxrα 序列分析组织表达

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