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绝经后妇女骨质疏松症肾阳虚证的关联蛋白ltbp1的表达及其cDNA测序的研究

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中国骨质疏松杂志 2015年第8期21卷 905-909页

作者：许惠娟陈娟谢丽华李生强赖玉链邹厚辉葛继荣福建省中医药研究院骨质疏松证候基因组学重点研究室福州350003

目的探讨绝经后骨质疏松症肾阳虚证与ltbp1蛋白表达及cDNA变化的关联性。方法随机选择绝经后骨质疏松症患者,中医辨证肾阳虚证组27例,27例健康绝经后妇女为对照组,Western-blot法检测外周血ltbp1的蛋白表达,对cDNA片段进行测序。结果肾... 详细信息

目的探讨绝经后骨质疏松症肾阳虚证与ltbp1蛋白表达及cDNA变化的关联性。方法随机选择绝经后骨质疏松症患者,中医辨证肾阳虚证组27例,27例健康绝经后妇女为对照组,Western-blot法检测外周血ltbp1的蛋白表达,对cDNA片段进行测序。结果肾阳虚证组ltbp1蛋白表达水平(0.365±0.278)低于健康对照组(0.675±0.583)(Pltbp1蛋白表达下调相关联,测序发现与碱基突变无关。

关键词：中医绝经后骨质疏松症肾阳虚证 ltbp1 蛋白表达 cDNA

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鸡ltbp1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

河南农业科学 2020年第12期49卷 144-150页

作者：滕蔓迟佳琦柴书军罗俊河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南省农业科学院中英禽病国际研究中心河南郑州450002 北京中医药大学东方医院北京100078 河南科技大学动物科技学院/动物疫病与公共卫生重点实验室河南洛阳471003

为了研究鸡潜在转化生长因子结合蛋白(ltbp1)功能,构建原核表达重组质粒pET-30a-ltbp1,转化E.coli BL21感受态细胞并经IPTG诱导进行表达。对以包涵体形式表达的ltbp1蛋白进行变复性和亲和层析纯化,然后免疫Balb/C小鼠,利用细胞融合技术... 详细信息

为了研究鸡潜在转化生长因子结合蛋白(ltbp1)功能,构建原核表达重组质粒pET-30a-ltbp1,转化E.coli BL21感受态细胞并经IPTG诱导进行表达。对以包涵体形式表达的ltbp1蛋白进行变复性和亲和层析纯化,然后免疫Balb/C小鼠,利用细胞融合技术建立单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备抗鸡ltbp1的单克隆抗体。通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选,获得了2株杂交瘤细胞株3C11-A9和2B1-G7。以效价较高的3C11-A9制备单克隆抗体腹水,间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)试验结果均表明,单克隆抗体3C11-A9可特异性识别鸡源细胞CEF和DF-1表达的ltbp1蛋白,同时IFA结果还显示,3C11-A9单克隆抗体腹水可与包括人、猴、猪和鼠在内的8种常见哺乳动物细胞发生特异性染色。综上,成功制备了抗鸡ltbp1单克隆抗体,且具有多物种广谱识别特性。

关键词：鸡 ltbp1 原核表达单克隆抗体间接免疫荧光试验蛋白免疫印迹试验

ltbp1促进食管鳞癌进展及顺铂耐药的研究

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LTBP1促进食管鳞癌进展及顺铂耐药的研究

作者：王萍南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景:食管鳞癌是困扰人类健康的常见癌症之一。我国的食管鳞癌发病率和死亡率均排名世界首位。其中,临床上食管鳞癌病人预后不良的重要原因是淋巴结转移和化疗耐药。因此,寻找食管鳞癌发生发展的潜在分子靶点,对于食管鳞癌的早期确... 详细信息

研究背景:食管鳞癌是困扰人类健康的常见癌症之一。我国的食管鳞癌发病率和死亡率均排名世界首位。其中,临床上食管鳞癌病人预后不良的重要原因是淋巴结转移和化疗耐药。因此,寻找食管鳞癌发生发展的潜在分子靶点,对于食管鳞癌的早期确诊、及时治疗以及改善预后,进而降低食管鳞癌病人的病死率,提高生存率具有重要的科学、临床意义。课题组前期通过串联质谱标记技术筛选来源于食管上皮的癌组织与正常组织的差异蛋白,获得了在癌组织中高表达蛋白——潜在转化生长因子β结合蛋白1（Latent transforming growth factor beta binding protein 1,ltbp1）,并已用western blot方法及GEPIA数据库进行验证[1]。ltbp1在食管癌中的作用未曾有过报道,因此本课题旨在研究ltbp1在食管鳞癌中的作用,并阐明其潜在的机制。研究方法及内容:1.利用免疫组织化学技术检测ltbp1在152例食管鳞癌组织与正常配对组织中的表达水平,分析ltbp1表达与临床病理各项指标间的关系。2.构建ltbp1表达抑制的食管鳞癌细胞株,用CCK-8实验、transwell迁移/侵袭实验,裸鼠尾静脉注射实验检测ltbp1对体内、外食管鳞癌细胞增殖、迁移侵袭和转移能力的影响。3.Western blot实验检测上皮间充质转化（EMT）标记物的表达。GEPIA数据库分析ltbp1与FN1的关系及WB、ELISA实验验证不同细胞中两者的表达。建立食管鳞癌细胞与成纤维细胞共培养体系。WB、免疫荧光实验检测肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）标记物的表达,CCK8检测共培养后细胞增殖活性。免疫组化方法检测食管鳞癌组织中ltbp1和FN1的表达和定位。4.Western blot实验检测食管鳞癌耐药细胞株中ltbp1的表达水平。通过流式细胞术、CCK-8药敏实验检测ltbp1对食管鳞癌耐药细胞顺铂敏感性的影响。采用细胞黏附实验检测粘附性的变化。采用免疫组化方法和影像学比较化疗后不同反应评级的食管鳞癌病人其化疗前ltbp1表达情况。研究结果:1.ltbp1在食管鳞癌组织中高表达,与淋巴结有转移显著相关,可作为评价患者肿瘤进展程度的一个因素。2.ltbp1具有促进体内、外食管鳞癌细胞迁移、侵袭和转移的功能;而与增殖无关。3.ltbp1参与食管鳞癌EMT及诱导CAFs转化,肿瘤实质ltbp1的表达与间质FN1的表达呈正相关。4.ltbp1表达升高,增加细胞与基质的粘附性,诱导食管鳞癌顺铂耐药;食管鳞癌活检组织中ltbp1表达高,新辅助化疗效果差。结论:ltbp1促进食管鳞癌进展及顺铂耐药。

关键词： ltbp1 食管鳞癌淋巴结转移 EMT CAFs FN1 耐药

BCR、HLA-A、KEAP1、ltbp1基因单核苷酸多态性与冠心病发生的相关性研究

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BCR、HLA-A、KEAP1、LTBP1基因单核苷酸多态性与冠心病发生的相关...

作者：张可心延边大学

学位级别：硕士

心血管疾病包括冠心病、周围末梢动脉血管疾病、风湿性心脏病、先天性心脏病、深静脉血栓和肺栓塞的一组心脏和血管疾患。冠心病是遗传和环境之间相互作用引起的多因素复杂的疾病。尽管在治疗方面取得了很大进展,但心血管疾病仍然是世... 详细信息

心血管疾病包括冠心病、周围末梢动脉血管疾病、风湿性心脏病、先天性心脏病、深静脉血栓和肺栓塞的一组心脏和血管疾患。冠心病是遗传和环境之间相互作用引起的多因素复杂的疾病。尽管在治疗方面取得了很大进展,但心血管疾病仍然是世界范围内的主要死亡原因。因此,对冠心病遗传基础的深入了解可能有助于识别易感个体,探索疾病的发生,以及发现用于疾病预防和治疗的新药物靶点。目的:探讨BCR、HLA-A、KEAP1、ltbp1基因单核苷酸多态性与冠心病发生的相关性,为心血管疾病危险预测、预防和治疗提供新视角。方法:本实验应用病例-对照的研究设计方法,共调查1216例研究对象,其中冠心病组600例,健康对照组616例。对BCR（rs2267018）、HLA-A（rs3094165）、KEAP1（rs11668429）、ltbp1（rs2290449）进行基因分型,采用卡方检验计算各个基因型分布是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。应用SPSS22.0软件进行数据分析。应用Logistic回归模型计算比值比（OR）和95%置信区间（CI）的估计。结果:1)冠心病组与健康对照组一般临床资料对比分析结果显示在性别、民族、喝酒情况三组数据差异具有统计学意义（P＜0.05）。2)4个基因位点的基因型频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡（P＞0.05）。3)4个基因位点的3种基因型分布在冠心病组与健康对照组之间有统计学意义（P＜0.05）;在BCR（rs2267018）位点中,GG+GA基因型是冠心病的危险因素;在HLA-A（rs3094165）位点中,GG+GA基因型是冠心病的危险因素;在KEAP1（rs11668429）位点中,TG+GG基因型是冠心病的危险因素;在ltbp1（rs2290449）位点中,AA+GA基因型是冠心病的危险因素。4)在人群中携带2个危险基因型与不携带危险基因型数量比较发生冠心病的风险增加2.075倍（95%CI:1.093-3.941,P=0.026）,携带3个危险基因型与不携带危险基因型数量比较发生冠心病的风险增加2.657倍（95%CI:1.392-5.070,P=0.003）,携带4个危险基因型与不携带危险基因型数量比较发生冠心病的风险增加5.683倍（95%CI:2.055-15.718,P=0.001）。结论:BCR（rs2267018）、HLA-A（rs3094165）、KEAP1（rs11668429）、ltbp1（rs2290449）均为冠心病易感位点,携带危险基因型数量与冠心病发生风险呈正相关,且同时携带4个危险基因型的人群患冠心病的风险最高。

关键词： BCR HLA-A KEAP1 ltbp1 冠心病单核苷酸多态性

基于蛋白组学技术筛选的差异表达蛋白及环境因素与冠心病患病的关联研究

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基于蛋白组学技术筛选的差异表达蛋白及环境因素与冠心病患病的关...

作者：温烨莹福建医科大学

学位级别：硕士

目的:筛选冠心病组与对照组血浆中差异表达的蛋白;探讨冠心病患病的主要环境影响因素;分析差异表达蛋白与冠心病患病的关联;构建基于差异蛋白的冠心病患病诊断模型,为探索冠心病的疾病机制及精准防控提供理论基础。方法:1.采用串联质谱... 详细信息

目的:筛选冠心病组与对照组血浆中差异表达的蛋白;探讨冠心病患病的主要环境影响因素;分析差异表达蛋白与冠心病患病的关联;构建基于差异蛋白的冠心病患病诊断模型,为探索冠心病的疾病机制及精准防控提供理论基础。方法:1.采用串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)定量蛋白质组学技术,在冠心病新发病例与对照血浆样本中筛选冠心病患病相关的差异表达蛋白,进行GO和KEGG分析并构建蛋白互作网络(protein protein interaction network,PPI)。2.采用病例-对照研究,于2019年7月至2021年12月,在福建医科大学附属第一医院和协和医院共纳入4705名研究对象(1922名冠心病病例和2783名对照),调查内容包括一般人口学特征、行为因素和社会心理因素指标等。3.依据蛋白质组学的定量结果并结合文献,在病例对照各100例的血浆样本中通过酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)验证差异表达的蛋白,采用多因素logistic回归模型探讨差异表达蛋白是否为冠心病患病的独立危险因素。4.采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)、净重新分类指数(net reclassification improvement,NRI)、整合鉴别改善指数(integrated discrimination improvement,IDI)、校准曲线和决策曲线分析(decision curve analyses,DCA)评价差异表达蛋白对冠心病患病的诊断价值。结果:1.59种蛋白在冠心病组和对照组表达量有差异有统计学意义,其中43种蛋白质表达量上调,16种蛋白质表达量下调。GO、KEGG分析提示差异表达蛋白质主要富集的生物学过程有TGF-β信号通路、黏着斑、过氧化物酶体等;PPI网络提示THBS1、TGF-β1等网络节点数较多的蛋白质在冠心病发生发展机制中发挥着作用。2.一般人口学特征、行为因素和社会心理因素等最终模型包括了三个不可改变(性别,年龄和冠心病家族史)和五个可改变(患有高血压,高脂血症,2型糖尿病,吸烟和睡眠时长)的变量。3.蛋白ltbp1在冠心病组的表达水平高于对照组(P1),蛋白THBS3在冠心病组中的表达水平低于对照组(P1)。多因素logistic回归分析结果提示,ltbp1高表达和THBS3低表达是冠心病患病的独立影响因素。ltbp1、THBS3的共表达生信分析提示,二者共同参与的生物过程包括转化生长因子β(TGF-β)激活、细胞外信号转导。4.ltbp1、THBS3诊断曲线下面积(area under the cure,AUC)为0.766(95%CI:0.702～0.831)、0.687(95%CI:0.613～0.761)。在性别、年龄、冠心病家族史、高血压、2型糖尿病、高脂血症、吸烟情况的模型基础上,分别纳入差异蛋白ltbp1、THBS3及联合纳入ltbp1和THBS3后,AUC提高至0.950(95%CI:0.910～0.976,P=0.002)、0.931(95%CI:0.887～0.962,P=0.003)、0.973(95%CI:0.940～0.991,P1)。净重新分类指数(NRI)为0.310(95%CI:0.181～0.439,P1)、0.150(95%CI:0.020～0.279,P=0.023)、0.380(95%CI:0.236～0.524,P1);整合鉴别改善指数(IDI)为0.143(95%CI:0.097～0.188,P1)、0.044(95%CI:0.014～0.074,P=0.003)、0.216(95%CI:0.159～0.274,P1);校准曲线显示出模型与实际观测之间具有较好的一致性;决策曲线分析显示净获益和潜在临床应用价值优于基础模型。结论:1.冠心病组与对照组血浆蛋白质组学中存在差异表达蛋白,涉及TGF-β信号通路、黏着斑、过氧化物酶体等生物过程。2.男性,老年人,存在冠心病家族史,患有高血压、2型糖尿病、高脂血症,吸烟,短睡眠时长与冠心病高患病风险有关。3.ltbp1高表达、THBS3低表达是冠心病患病的独立危险因素,可作为诊断冠心病患病的有效生物标志物。

关键词：冠状动脉粥样硬化性心脏病蛋白质组学环境因素 ltbp1 THBS3

4个绵羊品种TGF-β通路关键基因InDel检测及其与生长性状关系分析

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4个绵羊品种TGF-β通路关键基因InDel检测及其与生长性状关系分析

作者：朱艳娇西北农林科技大学

学位级别：硕士

动物分子育种、现代分子遗传学和DNA分析理论及技术的不断发展与进步,使得在DNA水平上直接进行基因分型、实现早期选种选育的可能性大为增加,极大程度地提高了选种的准确性。InDel(插入/缺失)标记具有简易的分型系统、较高的稳定性、较... 详细信息

动物分子育种、现代分子遗传学和DNA分析理论及技术的不断发展与进步,使得在DNA水平上直接进行基因分型、实现早期选种选育的可能性大为增加,极大程度地提高了选种的准确性。InDel(插入/缺失)标记具有简易的分型系统、较高的稳定性、较好的多态性,广泛地在动植物分子育种、群体遗传学分析等方面应用。TGF-β信号通路在调控细胞的增殖分化、胚胎发育、骨骼形成等方面具有非常重要的作用,而ltbp1、THBS1、SMAD4、PITX2等基因是TGF-β信号通路中的重要成员。ltbp1可与TGF-β相结合,而THBS1可与ltbp1相结合,SMAD4则是TGF-β通路中重要的信号转导分子,PITX2是SMAD4下游的重要效应分子。本研究以同羊(166只)、湖羊(201只)、小尾寒羊(195只)和兰州大尾羊(69只)等4个品种绵羊(631只)为研究对象,探究TGF-β信号通路中的4个基因(ltbp1、THBS1、SMAD4、PITX2)以及邻近信号通路LHX3的插入/缺失变异对绵羊的体斜长、体重等生长性状的影响;旨在比较四种绵羊群体在生长性状上的差异,并阐明ltbp1、THBS1、SMAD4、PITX2等基因与绵羊生长性状的相关性,为绵羊分子育种提供数据支持。研究结果表明:1.对于ltbp1基因的3个InDel位点,共发现9种单倍型,多态性较丰富。InDel-1(rs1089171651)的DD基因型兰州大尾羊母羊的体斜长和十字部高显著高于ID基因型(P1085487085)的ID基因型兰州大尾羊母羊十字部高和胸围极显著高于DD基因型(P1),而II基因型小尾寒羊公羊胸围极显著低于ID基因型和DD基因型(P1);InDel-3(rs1086780404)的ID基因型小尾寒羊体斜长显著高于DD基因型(P1基因的2个位点,发现了4种单倍型,多态性较丰富。在THBS1基因InDel-1位点(rs1092852024),II基因型湖羊体重极显著高于DD基因型(P1),而ID基因型小尾寒羊体斜长极显著高于II基因型(P1);THBS1基因InDel-2位点(rs1094397979),兰州大尾羊公羊ID基因型胸围极显著高于II基因型和DD基因型(P1)。3.对于SMAD4基因的InDel位点(rs595529487),鉴定出3种基因型,在4个绵羊品种中的多态性较丰富。DD基因型兰州大尾羊公羊体重和十字部高显著高于ID基因型(P19460 g.3107494-3107522),在4个绵羊品种中的多态性较丰富。DD基因型同羊体斜长和胸宽显著高于ID基因型(P19463:g.14890658-1489066和NC19463:g.14885723-14885734),所有个体中都没有发现DD型,属于低多态性,在湖羊,同羊和小尾寒羊中发现了4种单倍型,兰州大尾羊中仅有2种单倍型。PITX2基因InDel-1位点ID基因型同羊母羊胸宽和小尾寒羊母羊胸深极显著高于II基因型(P1);PITX2基因InDel-2位点ID基因型同羊母羊体斜长和湖羊母羊胸围显著高于II基因型(Pltbp1、THBS1、SMAD4、LHX3、PITX2等5个基因的9个位点具有较丰富的InDel多样性,可以在绵羊分子育种中作为兰州大尾羊胸围和十字部高、小尾寒羊胸围和体斜长、湖羊体重和胸围以及同羊体斜长和胸宽等生长性状的候选DNA标记位点。

关键词：绵羊插入/缺失 ltbp1 THBS1 SMAD4