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运动通过Wnt/β-catenin通路调控Tg APP/PS1小鼠海马Aβ转运的研究

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运动通过Wnt/β-catenin通路调控Tg APP/PS1小鼠海马Aβ转运的研究

作者：赵慧华东师范大学

学位级别：硕士

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)目前已成为发病率和死亡率较高的一种神经退行性疾病,伴有记忆力下降和认知功能异常,并出现语言障碍和执行能力的减退。β-淀粉样蛋白(amybid β-protein,Aβ)在细胞外异常聚集是AD的主要致病因素... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)目前已成为发病率和死亡率较高的一种神经退行性疾病,伴有记忆力下降和认知功能异常,并出现语言障碍和执行能力的减退。β-淀粉样蛋白(amybid β-protein,Aβ)在细胞外异常聚集是AD的主要致病因素。AD神经血管假说认为,脑微血管Aβ外排转运蛋白如低密度脂蛋白受体相关蛋白 1(Low density lipoprotein receptor related protein,lrp-1)和P糖蛋白(glycoprotein,P-gp)受损会导致Aβ清除速率下降,引起脑内Aβ异常聚集,诱发AD。脑内Aβ清除的主要途径是通过血脑屏障(blood brain barrier,BBB)表面的转运蛋白将Aβ转运至外周血液。Wnt/β-catenin信号通路下游的外排转运蛋白P-gp对脑内Aβ清除具有重要的作。此外,有研究表明,运动可以增强脑内Aβ清除速率,降低AD的发病风险。因此,本研究对TgAPP/PS1小鼠模型施以12周跑台运动干预,探究运动对Wnt/β-catenin信号通路及Aβ转运清除的影响,以期为AD的防治提供新的理论依据。目的:以3月龄TgAPP/PS1雄性小鼠作为实验动物模型,12周中等强度的跑台运动,探讨中等强度跑台运动对Tg APP/PS1小鼠海马Aβ转运的影响,从海马Wnt/β-catenin信号通路和Aβ转运蛋白的表达两个方面,阐述跑台运动调节Aβ转运的可能分子机制。方法:将3月龄雄性Tg APP/PS1小鼠随机分为转基因运动组(Transgenictype exercise,TG-EXE,N=18)和转基因安静组(Transgenic type Sed,TG-Sed,N=18),选同窝野生型小鼠作为野生安静组(Wild type Sed,WT-Sed,N=18)和野生运动组(Wild-type exercise group,WT EXE,n=18)作为对照组。每组随机选取6只进行0.9%Nacl心脏灌注和4%多聚甲醛全脑固定,制作石蜡切片进行免疫组织化学实验;每组随机选取6只脱颈处死,分离双侧海马,用于RT-PCR和Elisa实验;余下6只脱颈处死,分离双侧海马,用于Western blotting实验。通过Western Blotting、免疫组化、RT-PCR、Elisa等实验技术对APP/PS1雄性小鼠海马mRNA、蛋白及斑块表达情况进行检测。研究结果:(1)7 月龄 TgAPP/PS1 小鼠海马 Aβ40(P1)、Aβ42(P1)蛋白含量及斑块数量(P1)显著高于野生型小鼠,12周中等强度的跑台运动显著下调Tg APP/PS1 小鼠海马 Aβ40(P1 小鼠海马转运蛋白 lrp-1(P1)和 P-gp(P1)蛋白及mRNA表达水平显著低于野生型小鼠,12周中等强度的跑台运动显著提高TgAPP/PS1小鼠海马lrp-1和P-gp(P1)mRNA及蛋白表达水平。(3)7月龄Tg APP/PS1小鼠海马CK1(P12周中等强度的跑台运动显著提高Tg APP/PS1小鼠海马Wnt3a mRNA及蛋白表达水平、Axin2(P1)、CK1(P1)mRNA表达水平及GSK3β活性;各组小鼠海马β-catenin蛋白总量无显著性区别,与TG-Sed组小鼠相比,TG-EXE组小鼠海马β-catenin磷酸化水平有下降的趋势。结论:(1)12周中等强度的跑台运动能够降低Tg APP/PS1小鼠海马Aβ含量和老年斑数量,跑台运动通过提高Aβ外排转运蛋白P-gp、lrp-1的表达,加速Aβ转运速率,降低脑内Aβ含量和Aβ斑块数量。(2)12周中等强度的跑台运动提高Aβ外排转运蛋白P-gp、lrp-1的表达,提高Aβ转运速率,运动对Aβ外转蛋白P-gp表达的影响是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。(3)Tg APP/PS1小鼠海马Wnt/β-catenin信号通路活性较低,12周中等强度的跑台运动能够激活Tg APP/PS1小鼠海马Wnt/β-catenin信号通路。

关键词：阿尔茨海默病 lrp-1 P-gp Wnt/β-catennin信号通路 Aβ

从Aβ转运清除探讨活血荣络片治疗阿尔茨海默病的机理

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从Aβ转运清除探讨活血荣络片治疗阿尔茨海默病的机理

作者：李彩云湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的：从Aβ转运清除探讨活血荣络片治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法：APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、模型+活血荣络片组(低、中、高剂量)、模型+多奈哌齐组,各组均为5只,同期将同月龄KM小鼠作为正常组。给予相应药物治疗2月后,... 详细信息

目的：从Aβ转运清除探讨活血荣络片治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法：APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、模型+活血荣络片组(低、中、高剂量)、模型+多奈哌齐组,各组均为5只,同期将同月龄KM小鼠作为正常组。给予相应药物治疗2月后,行Morris水迷宫实验评估小鼠学习及记忆能力,HE染色观察小鼠海马组织形态改变,Western Blot检测脑组织Aβ、lrp-1及RAGE的表达。结果：①Morris水迷宫：模型组小鼠逃避潜伏期、首次进入区域时间与其他各组相比明显延长,穿越区域次数最少,与正常组及其他给药组比较有明显差异(P1);APP/PS1双转基因小鼠中,高剂量活血荣络片组小鼠综合表现最优。②HE染色：模型组小鼠海马组织的神经细胞数量较少、排列欠规则、结构破坏明显,而其他各组小鼠神经细胞数量较多,分布较均匀,结构较完整。③Western Blot检测：模型组小鼠脑组织中Aβ、RAGE的表达最高,lrp-1表达最低,与正常组及其他各组比较有统计学意义(P1);APP/PS1双转基因小鼠中,高剂量活血荣络片组小鼠的Aβ、RAGE表达最低,lrp-1表达最高。结论：活血荣络片可能通过上调lrp-1的表达,下调RAGE的表达,减少APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ的沉积,改善APP/PS1双转基因小鼠的学习及记忆能力,并减轻APP/PS1双转基因小鼠海马组织神经元的损伤。

关键词：阿尔茨海默病活血荣络片 Aβ沉积 lrp-1 RAGE

黄芩苷通过血脑屏障途径清除Aβ的抗AD作用机制研究

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黄芩苷通过血脑屏障途径清除Aβ的抗AD作用机制研究

作者：陈洪达广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:在前期预实验中,我们用黄芩苷干预治疗AD模型小鼠,发现小鼠的认知功能显著改善,同时,我们还发现黄芩苷可以减少大脑皮层和海马区域的老年斑沉积,这些结果表明黄芩苷具有抗AD作用,其机制可能是通过清除Aβ而起抗AD作用,基于此,本研... 详细信息

目的:在前期预实验中,我们用黄芩苷干预治疗AD模型小鼠,发现小鼠的认知功能显著改善,同时,我们还发现黄芩苷可以减少大脑皮层和海马区域的老年斑沉积,这些结果表明黄芩苷具有抗AD作用,其机制可能是通过清除Aβ而起抗AD作用,基于此,本研究以黄芩苷为干预手段,以AD模型小鼠为研究对象,先通过AD模型小鼠的认知和行为改变来评价黄芩苷对AD的影响,然后再通过体内实验观察AD模型小鼠血脑屏障(BBB)上Aβ转运蛋白的表达变化,借此阐明黄芩苷改善认知功能和减少Aβ沉积的机制,从而为黄芩苷在AD病理过程中的保护作用提供客观的实验依据,为防治AD提供新手段。方法:第一部分:黄芩苷对AD模型小鼠认知功能的影响研究对象选择APP/PS1双转基因AD模型小鼠,干预方法采用黄芩苷,采用多种方法检测行为学,如Morris水迷宫、探索实验、定速航行实验等,综合系统地评价AD模型小鼠学习记忆能力在黄芩苷干预下产生的变化。第二部分:黄芩苷对AD模型小鼠Aβ清除的影响通过ELISA、免疫荧光方法检测手段,分析小鼠脑组织中Aβ的含量,及其在脑组织、微血管上的表达、沉积的变化,借此分析黄芩苷对AD模型小鼠脑中Aβ蛋白沉积的影响。第三部分:血脑屏障内皮细胞评价黄芩苷对Aβ转运及转运蛋白表达的影响应用Western blot方法检测脑中的Aβ转运受体lrp-1的蛋白表达,分析黄芩苷对转运蛋白表达的影响。结果:1.在Morris水迷宫的定位导航实验中,黄芩苷组较对照组逃避潜伏期明显缩短;空间探索实验中,黄芩苷组较对照组在游泳总路程上明显缩短、跨越平台次数显著上升;2.免疫组织化学结果显示黄芩苷组较对照组Aβ1-42表达下降、老年斑个数减少;3.Western-blot试验结果显示黄芩苷组较对照组小鼠海马lrp-1表达水平显著增加、Aβ1-42表达水平显著下降;4.ELISA检测结果显示黄芩苷组较对照组脑内Aβ1-42的含量显著降低;5.免疫荧光试验显示,黄芩苷小鼠海马Aβ相对表达量明显少于对照组。结论:1.Morris水迷宫的实验结果表明:黄芩苷干预治疗能显著提升8月龄AD模型小鼠的学习记忆能力;2.黄芩苷能减少AD模型小鼠大脑海马组织中Aβ的沉积;这可能是黄芩苷改善AD小鼠学习记忆能力的机制之一;3.经过黄芩苷干预治疗后,AD模型小鼠的海马区lrp-1含量增多,这说明跨血脑屏障的Aβ转运代谢增多,Aβ沉积减少,微血管损伤减轻,这可能是黄芩苷改善AD小鼠学习记忆能力的机制之二。

关键词：阿尔茨海默病 APP/PS1双转基因小鼠 Aβ lrp-1 血脑屏障黄芩苷

载盐霉素的高密度脂蛋白体外抗宫颈癌活性的研究

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载盐霉素的高密度脂蛋白体外抗宫颈癌活性的研究

作者：殷夕芮吉林大学

学位级别：硕士

宫颈癌（Cervical cancer）是妇科癌症中的第4大恶性肿瘤,严重的威胁了全球女性的生命健康。虽然人们持续努力开发更有效的治疗方法,但临床试验表明,由于肿瘤的转移和复发,宫颈癌仍然是无法治愈的疾病。近年来,肿瘤干细胞（Cancer stem ... 详细信息

宫颈癌（Cervical cancer）是妇科癌症中的第4大恶性肿瘤,严重的威胁了全球女性的生命健康。虽然人们持续努力开发更有效的治疗方法,但临床试验表明,由于肿瘤的转移和复发,宫颈癌仍然是无法治愈的疾病。近年来,肿瘤干细胞（Cancer stem cells,CSCs）理论的出现为癌症的探索开辟了新的方向。CSCs被认为是肿瘤细胞群中的一个小的亚群,通常处于休眠状态,在适当的条件下可被激活,可能是诱导宫颈癌转移和复发的主要原因。因此,发现一种能够靶向宫颈癌细胞及宫颈癌干细胞的药物或可成为治疗宫颈癌的关键。盐霉素（Salinomycin,Sal）被许多研究证实是一种有效的抗癌药物,且对CSCs具有很强的杀伤作用,但盐霉素水溶性较差且具有一定的毒副作用,限制了盐霉素的使用。高密度脂蛋白（High density lipoprotein,HDL）是一种密度较大的复杂脂蛋白,在血浆中以多功能聚集体的形式存在。HDL因其具有独特的物理化学性质,包括天然生理成分、两亲性载脂蛋白、特异的蛋白质-蛋白质相互作用、具有纳米级粒径及磷脂核心可与疏水性药物结合等特性,可作为许多药物的有效载体。本研究是在实验室前期合成的载盐霉素的高密度脂蛋白（Salinomycinloaded high density lipoprotein,S-HDL）基础上进行的。S-HDL是利用载脂蛋白A-Ⅰ（Apolipoprotein A-I,Apo A-I）,载脂蛋白E（Apolipoprotein E,Apo E）,卵磷脂和盐霉素通过胆酸钠法制备的一种重组HDL,将疏水性药物盐霉素包裹在HDL的亲脂内核里,具有两亲性载脂蛋白的亲水端暴露于纳米粒外。S-HDL可以改善Sal的水溶性,并且具有的纳米级粒径使得S-HDL易通过实体瘤组织的高通透性和滞留效应实现对肿瘤组织的被动靶向,降低S-HDL的系统毒性;此外,S-HDL外壳的Apo E可以与低密度脂蛋白受体相关蛋白1（Low density lipoproprotein receptor-related Protein 1,lrp-1）结合;lrp-1被认为在许多恶性肿瘤中表达,且与肿瘤的恶性程度呈现正相关。因此利用Apo E的这一特性或许可以实现对恶性肿瘤组织的主动靶向。因此,为了验证S-HDL体外对宫颈癌的作用,本文进行了如下实验:使用紫外分光光度计对S-HDL进行定量,测定S-HDL粒径与电位;磁珠分选法从宫颈癌细胞系HeLa细胞中分选出CD44（+）CD24（-）的HeLa干细胞（Stem cells,SC）,并使用流式细胞仪鉴定HeLa SC表面CD44,CD24表达情况,western blotting法鉴定HeLa SC干性标志物C-myc与Sox-2的表达情况;western blotting法检测HeLa细胞、HeLa SC与人卵巢上皮细胞（IOSE80）表面lrp-1的表达情况,用荧光染料香豆素6（Coumarin-6,C6）代替S-HDL中的盐霉素,合成载香豆素6的高密度脂蛋白（Coumarin 6-loaded high density lipoprotein,C6-HDL）,激光共聚焦显微镜观察HeLa细胞与IOSE80细胞对C6和C6-HDL的摄取情况;CCK-8法测定S-HDL对HeLa细胞与HeLa SC增殖能力的影响;高通量测序检验SHDL作用对HeLa细胞在基因水平的影响,将差异基因进行GO富集得到显著改变的生物过程,并进行验证。实验结果提示,S-HDL在胆酸钠:卵磷脂比例为1:1时,包封率最高,为50.73±4.29%。S-HDL粒径处于10nm-50nm之间,峰值在20-25nm之间,平均粒径为38.98nm,Zeta电位为-3.44m V;流式鉴定结果显示磁珠分选法成功分选出了CD44（+）CD24（-）的HeLa SC,且western blotting结果证明HeLa SC的C-myc与Sox-2表达量远高于HeLa细胞,提示分选出的HeLa SC为宫颈癌干细胞;western blotting结果显示HeLa与HeLa SC的lrp-1表达量相当,分别是IOSE80的lrp-1表达量的2.5倍与2.3倍,摄取实验结果表明HeLa细胞对C6-HDL的摄取远高于对C6的摄取,HeLa细胞对C6-HDL的摄取远高于IOSE80细胞对C6-HDL的摄取;CCK8法结果显示S-HDL对HeLa细胞与HeLa SC增殖抑制能力比等量盐霉素更强;高通量测序结果表明,SHDL作用HeLa细胞后的基因表达情况分别与空白对照（NC组）和阳性对照（同浓度Sal组）进行对比,分别存在1163个以及239个差异基因,富集分析后,选取细胞凋亡,细胞周期与细胞迁移3个生物过程进行后续验证;在细胞凋亡,细胞周期与细胞迁移实验中,S-HDL均表现出了比同等剂量盐霉素对HeLa细胞和HeLa SC更强

关键词：宫颈癌肿瘤干细胞盐霉素高密度脂蛋白 lrp-1

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PAI-1调节脂肪组织功能和糖代谢的研究

PAI-1调节脂肪组织功能和糖代谢的研究

作者：王琳西南医科大学

学位级别：硕士

目的:纤溶酶原激活物抑制剂-1(Plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)是丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中重要的一员。内源性PAI-1主要的生理作用是快速抑制组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA),不仅与血栓形成和纤... 详细信息

目的:纤溶酶原激活物抑制剂-1(Plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)是丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中重要的一员。内源性PAI-1主要的生理作用是快速抑制组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA),不仅与血栓形成和纤维化有关,而且与胰岛素抵抗和代谢综合征相关。研究显示,PAI-1在肥胖的人和小鼠的白色脂肪组织(WAT)中表达很高,而其他组织,比如心脏、肾脏、肝脏、骨骼肌等表达都相对较低。因此,提示肥胖的人和小鼠的WAT是PAI-1的主要来源。最新研究揭示,PAI-1的高度表达引起个体脂肪的累积,而PAI-1基因敲除后,个体体重的增加会大大减慢,即使是在高脂饮食(High fat diet,HFD)饲喂的情况下,体重增加也不明显。另外,在HFD饲喂的情况下,白色脂肪细胞出现肥大和增生,而PAI-1基因敲除后,脂肪细胞形态变得更小,提示PAI-1可能是引起肥胖的原因。另外,在HFD饲喂的情况下,正常小鼠的代谢出现了紊乱,而PAI-1基因敲除小鼠在同样的条件下饲喂,代谢则处于正常状态。因此,提示PAI-1可能是参与了WAT的功能与代谢。肥胖者PAI-1过度表达的机制很复杂,目前尚不清楚,有待进一步研究和阐释。巨噬细胞(Macrophage)根据功能和激活状态的差别可分为M1型即经典活化的巨噬细胞(Classically activated macrophage)和M2型即替代活化的巨噬细胞(Alternatively activated macrophage)两种亚型。M1型巨噬细胞主要参与促炎症反应,M2型巨噬细胞主要是起抗炎作用。研究发现,在精瘦的小鼠的WAT中,M2型巨噬细胞多于M1型巨噬细胞,抗炎作用大于促炎作用,所以小鼠的WAT代谢处于正常状态;与此相反,肥胖小鼠的WAT中,M1型巨噬细胞的比例显著增加,多于M2型巨噬细胞,从而打破M1和M2型巨噬细胞的比例平衡,促炎作用大于抗炎作用,小鼠的WAT代谢处于紊乱状态。最新研究揭示,肥胖个体的WAT中,巨噬细胞浸润增加,这些巨噬细胞分散在白色脂肪细胞周围,组成形似“王冠”状的结构,而正是这些“王冠”结构导致了WAT功能紊乱和代谢失调。PAI-1与巨噬细胞浸润均能加重WAT功能紊乱和代谢失调,那两者是否有一定关系呢?另外,提到葡萄糖代谢,就绕不开葡萄糖转运蛋白(Glucose transporter,GLUT)。顾名思义,其功能主要与葡萄糖转运有关。其中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)主要存在于脂肪细胞中,主管脂肪细胞的葡萄糖转运。有研究发现,低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(Low density lipoprotein receptor-related protein-1,lrp-1)可介导脂肪细胞GLUT4,从而影响脂肪细胞的葡萄糖转运。那么PAI-1是否和这个过程有关系呢?因此,本研究将从PAI-1影响脂肪组织巨噬细胞极性、浸润和脂肪组织lrp-1和GLUT4表达的视角研究PAI-1加重WAT功能紊乱和代谢失调的机制,进一步查明PAI-1与巨噬细胞和lrp-1之间的关系,为临床预防、诊断和治疗代谢类疾病提供新的治疗靶点及理论依据。方法:1.实验准备:繁殖和鉴定C57/BL6小鼠和Pai-1小鼠,挑选两种同龄雄性小鼠,每组9只。2.建立糖尿病小鼠模型:以HFD饲喂C57/BL6小鼠,连续喂养14周左右,此组记作HFD-WT小鼠。同时,以正常饮食(ND)饲喂C57/BL6小鼠,此组记作ND-WT小鼠;以HFD饲喂Pai-1小鼠,此组记作HFD-Pai-1小鼠;以ND饲喂Pai-1小鼠,此组记作ND-Pai-1小鼠;相同条件下饲喂14周左右,每周固定时间测定这4组小鼠的体重和血糖值。3.q RT-PCR检测PAI-1和lrp-1 m RNA表达:ND-WT小鼠,HFD-WT小鼠,ND-Pai-1小鼠,HFD-Pai-1小鼠这4组分别取其附睾脂肪垫(e WAT),放入事先准备好的无酶研磨管中,使用组织细胞破碎仪研磨组织15sec,静置数分钟,使其细胞充分破裂,参照提取总RNA的实验步骤提取e WAT的总RNA,运用总RNA琼脂糖电泳实验检测总RNA的质量,然后进行逆转录实验,将总RNA逆转录为c DNA。最后利用q RT-PCR仪分析其目的基因PAI-1和lrp-1 m RNA的表达量。4.PAI-1抑制剂的应用:PAI-039是PAI-1的一种小分子抑制剂。配制PAI-039溶液:每只小鼠PAI-039的剂量为2 mg/kg/day,以无菌水为溶剂,包含0.5%甲基纤维素和2%吐温80。PAI-039处理HFD-WT小鼠,挑选血糖值已达标的HFD-WT小鼠,每天固定时间灌胃,持续30天,此组记作HFD-WT+PAI-039小鼠。加上之前的ND-WT小鼠、HFD-WT小鼠、ND-Pai-1小鼠和HFD-Pai-1小鼠这

关键词： PAI-1 炎症巨噬细胞脂肪组织 HFD lrp-1 GLUT4

PTK2B对认知功能障碍小鼠血液和脑组织中Aβ和Tau蛋白磷酸化水平的影响

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PTK2B对认知功能障碍小鼠血液和脑组织中Aβ和Tau蛋白磷酸化水平...

作者：郝凯敏山西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)样动物模型脑组织中ptk2b基因及其表达产物PTK2B蛋白随着年龄变化的规律,及其与血液和脑组织中生物标记物Aβ、Tau蛋白磷酸化(p-Tau)和行为学功能的关系。分析ptk2b基因对AD病理学和行为学... 详细信息

目的:探讨阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)样动物模型脑组织中ptk2b基因及其表达产物PTK2B蛋白随着年龄变化的规律,及其与血液和脑组织中生物标记物Aβ、Tau蛋白磷酸化(p-Tau)和行为学功能的关系。分析ptk2b基因对AD病理学和行为学的影响及机制。研究分两部分进行:(1)在APP/PS1转基因动物脑组织中ptk2b基因和PTK2B蛋白随着年龄增长变化的规律,PTK2B与血液和脑组织中Aβ、p-Tau和lrp-1含量的变化关系;(2)探讨ptk2b基因、PTK2B蛋白与lrp-1转运蛋白的关系,分析认知功能障碍小鼠血液和脑组织中的Aβ变化与PTK2B的关系。方法:第一部分:3个实验组:5月龄、10月龄和15月龄的APP/PS1转基因小鼠,以及3个对照组:同月龄的C57BL/6J小鼠,共计6组,每组各8只。实验组动物经基因鉴定,筛选出符合AD样基因特征的小鼠进行实验。所有小鼠的认知行为学能力用Morris水迷宫检测之后,分别用IHC、Western blot或ELISA检测小鼠海马组织或血清中PTK2B、Aβ、磷酸化Tau蛋白与总Tau含量比值(p-Tau/Tau)和lrp-1的表达,通过HE染色观察小鼠海马组织形态学改变,q RT-PCR检测海马ptk2b m RNA的表达。第二部分:随机将64只三月龄C57BL/6J小鼠分为实验组及对照组,并行侧脑室插管术。所有实验组小鼠经侧脑室(i.c.v.)注射凝聚态Aβ(0.1μg/μL,3.6μL)建立认知功能障碍模型,3天后,分别各注射PTK2B抑制剂PF431396(15μg/m L,Aβ+PF组)、PTK2B激动剂PMA(18.75μg/m L,Aβ+PMA组)、lrp-1抑制剂RAP(0.2μg/m L,Aβ+RAP组)以及生理盐水(Aβ+NS);对照组则经侧脑室插管注射NS,3天后各i.c.v.注射等量的PF431396(PF组)、PMA(PMA组)、RAP(RAP组)以及NS(NS组)。每组均注射2μL。1周后通过Morris水迷宫检测小鼠认知行为学功能,用IHC和ELISA以及Western blot检测血清和海马组织中Aβ、lrp-1、PTK2B的表达,用q RT-PCR检测海马ptk2b m RNA的表达。结果:第一部分:Morris水迷宫结果显示,APP/PS1各实验组与其C57对照组小鼠比较,认知行为学功能显著降低(动物寻找平台的平均潜伏期P1;空间探索试验的穿越平台次数P1;穿越平台所在象限的时间均为P1)。各实验组行为学结果可见,APP/PS1转基因小鼠的认知行为学功能随月龄增长呈现进行性下降(寻找平台的平均潜伏期,APP/PS1-10 M与5 M以及15 M与10 M比较均显著延长,P1或P1;空间探索试验的穿越平台次数和穿越平台所在象限的时间APP/PS1-10 M与5 M以及15 M与10 M比较均显著减少,P1或P1);对照组C57小鼠则无显著的变化。随着年龄的增长,APP/PS1转基因小鼠血清中的Aβ则逐渐降低(APP/PS1-10 M与5 M相比降低、15 M与10 M比较也降低,均为P1-10 M与5 M相比;15 M与10M比较相比,均升高,P1或P1)、ptk2b m RNA(APP/PS1-10M与5 M及15 M与10 M比较均升高,均为P1)、Aβ(APP/PS1-10 M与5 M及15 M与10 M相比,均升高,P1)和p-Tau/Tau(APP/PS1-10 M与5 M比较;15 M与10 M比较,均升高,均为P1)的表达均呈现逐渐升高的趋势;海马组织中lrp-1(APP/PS1-10 M与5 M相比;15 M与10 M相比,均降低,P1或P1)表达则逐渐下调。HE结果也显示,APP/PS1转基因小鼠随年龄增加海马组织病理学形态的变化及细胞数量减少均更显著。各年龄的APP/PS1小鼠与其C57小鼠比较上述指标均有显著差异(P1或P1)。各对照组之间比较,除海马组织中lrp-1随着年龄增加而降低以外(C57-10M与5 M;15 M与10 M比较均降低,P1)其余指标均无显著差异。第二部分:Morris水迷宫结果表明,各实验组小鼠同其对照组C57小鼠相比,认知行为学能力均显著下降(定位航行试验中小鼠寻找平台潜伏期显著延长,P1;穿越平台次数、穿越平台所在象限时间都减少,均P1);各实验组之间比较,侧脑室应用PTK2B抑制剂PF431396可明显改善Aβ诱导的认知功能

关键词： PTK2B 阿尔茨海默病 β样淀粉蛋白 Tau lrp-1

细胞粘附调节因子lrp-1调控SMMC-7721细胞粘附状态及自噬活性的研究

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细胞粘附调节因子LRP-1调控SMMC-7721细胞粘附状态及自噬活性的研...

细胞—生命的基础——中国细胞生物学学会2013年全国学...

作者：景晓红西安医学院基础医学研究所

细胞粘附于外基质对维持细胞内稳态及功能至关重要。当细胞从外基质上脱离会则会引起代谢压力并通过失巢凋亡导致细胞程序性死亡。肿瘤细胞在从外基质脱离后能够激活自身的自噬活性得以生存,并能够重新粘附。这也是肿瘤复发的原因之一,... 详细信息

细胞粘附于外基质对维持细胞内稳态及功能至关重要。当细胞从外基质上脱离会则会引起代谢压力并通过失巢凋亡导致细胞程序性死亡。肿瘤细胞在从外基质脱离后能够激活自身的自噬活性得以生存,并能够重新粘附。这也是肿瘤复发的原因之一,我们的研究证明。低密度脂蛋白受体相关蛋白1(lrp-1)能够调节肝癌细胞的自噬活性,促进自噬体的产生及相关蛋白质

关键词： lrp-1 细胞粘附自噬 SMMC-7721

来源： cnki会议评论

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中药调控血脑屏障对Aβ的转运

世界科学技术-中医药现代化 2015年第9期17卷 1906-1910页

作者：胡谦锋周春祥于蓓蓓南京中医药大学基础医学院南京210046

阿尔茨海默病发病(Alzheimer’s Disease,AD)主要病理改变是脑组织中β-淀粉样蛋白(β-amyloid Protein,Aβ)的异常堆积所形成的淀粉样老年斑块(Senile Plaques,SP)。血脑屏障(Blood-brain Barrier,BBB)可以调控Aβ脑内的代谢,通过相关... 详细信息

阿尔茨海默病发病(Alzheimer’s Disease,AD)主要病理改变是脑组织中β-淀粉样蛋白(β-amyloid Protein,Aβ)的异常堆积所形成的淀粉样老年斑块(Senile Plaques,SP)。血脑屏障(Blood-brain Barrier,BBB)可以调控Aβ脑内的代谢,通过相关的转运体完成Aβ的跨血脑屏障转运。本文主要通过介绍血脑屏障晚期糖基化终产物受体(Receptor for Advanced Glycation End Products,RAGE)及低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(Low Density Lipoprotein Receptor-related Protein-1,lrp-1)这两个主要转运体来阐释Aβ的脑内堆积及其产生的炎性因子对神经元毒性的作用机理,由此进一步探讨利用中医药对血脑屏障RAGE与lrp-1两种转运蛋白的调节,减少Aβ脑内的异常沉积、缓解脑内炎症反应,保护脑神经元。

关键词：阿尔茨海默病 Aβ 血脑屏障中药 RAGE lrp-1

胰岛素治疗对糖尿病大鼠脑组织中lrp-1与Aβ1-40表达的影响

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临床合理用药杂志 2018年第4期11卷 27-28页

作者：王苗邵丽葛许华史帝江苏省徐州市第一人民医院神经内科 221002

目的分析胰岛素治疗前后糖尿病大鼠脑组织中低密度脂蛋白受体相关蛋白lrp-1和Aβ1-40的表达。方法将正常健康雄性鼠龄1个月Wistar大鼠60只随机分为4组,分别为正常对照组、糖尿病组、糖尿病胰岛素治疗组、糖尿病胰岛素未治疗组各15只。... 详细信息

目的分析胰岛素治疗前后糖尿病大鼠脑组织中低密度脂蛋白受体相关蛋白lrp-1和Aβ1-40的表达。方法将正常健康雄性鼠龄1个月Wistar大鼠60只随机分为4组,分别为正常对照组、糖尿病组、糖尿病胰岛素治疗组、糖尿病胰岛素未治疗组各15只。通过高脂高糖饮食和小剂量腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型后,在造模成功的糖尿病组、糖尿病胰岛素治疗组及糖尿病胰岛素未治疗组大鼠中每组随机取10只继续进行后续实验。应用免疫组化法对脑组织中lrp-1与Aβ1-40的表达进行测定。结果正常对照组、糖尿病组、糖尿病胰岛素治疗组、糖尿病胰岛素未治疗组大鼠脑组织均有lrp-1及Aβ1-40的阳性表达,糖尿病组大鼠相比于正常对照组,在上述组织中的lrp-1阳性表达血管数明显减少,Aβ1-40阳性表达血管数明显增加(Plrp-1的阳性表达则明显增加,Aβ1-40的阳性表达显著减少(P1-40的表达量并提高了lrp-1的表达。

关键词： 2型糖尿病胰岛素治疗 lrp-1 Aβ1-40