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lpa2调控胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移以及机制的初步探究

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LPA2调控胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移以及机制的初步探究

作者：马琳娜兰州大学

学位级别：硕士

目的:研究讨论胃癌细胞SGC-7901是否能被lpa2调控,首先探讨lpa2是否可调节胃癌细胞的侵袭迁移、增殖凋亡;其次研究lpa2与Notch1信号、姜黄素是否存在相关性。方法:(1)用si-994、si-1098、si-1146以及阴性对照(NC)四种siRNA转染SGC-7901... 详细信息

目的:研究讨论胃癌细胞SGC-7901是否能被lpa2调控,首先探讨lpa2是否可调节胃癌细胞的侵袭迁移、增殖凋亡;其次研究lpa2与Notch1信号、姜黄素是否存在相关性。方法:(1)用si-994、si-1098、si-1146以及阴性对照(NC)四种siRNA转染SGC-7901细胞,si RNA转染48 h后利用qrt-PCR和Western blotting检测lpa2的敲除情况,选出敲除成功的siRNA序列;用0、0.5、1.0和1.5μg的pcDNA3.1-lpa2表达载体进行细胞转染,质粒转染24 h后用Western blotting检测lpa2蛋白表达情况。(2)利用Western blotting分别检测siRNA敲除组和pcDNA3.1-lpa2过表达组E-cadherin及Vimentin蛋白表达情况。(3)行Transwell小室实验观察敲除组和过表达组细胞的侵袭和迁移能力。(4)检测敲除组和过表达组细胞的增殖情况,以及细胞的凋亡情况。(5)将SGC-7901用siRNA转染后,Western blotting检测Notch1的表达是否改变。(6)siRNA转染SGC-7901细胞后,再用姜黄素0、10、20μmol/L作用各组细胞24h,行迁移实验。结果:(1)si-1098、si-1146对lpa2敲除成功,E-cadherin表达增高,Vimentin表达降低;综合比对选择si-1098进行后续实验。PcDNA3.1-lpa2质粒对SGC-7901细胞转染成功,且呈剂量依赖性,E-cadherin表达降低,Vimentin表达增高。(2)siRNA与NC组比较,siRNA组侵袭迁移能力低;过表达组与0μg组比较,过表达组侵袭迁移能力高。(3)siRNA与NC组比较,siRNA增殖能力低,凋亡能力高;过表达组与0μg组比较,增殖能力高,凋亡能力低。(4)NC组相比siRNA组,Notch1表达降低。(5)转染lpa2的0、10、20μmol/L姜黄素之间比较,细胞侵袭迁移能力呈逐渐降低。结论:(1)lpa2对SGC-7901胃癌细胞的侵袭和迁移能力呈正向调控、对增殖亦呈正向调控,但对凋亡呈负向调控。(2)lpa2蛋白和Notch1蛋白在SGC-7901胃癌细胞中的表达呈正相关。(3)姜黄素可能是通过抑制lpa2蛋白过程,从而抑制胃癌细胞的迁移能力。

关键词：胃癌 lpa2 敲除过表达侵袭迁移 Notch1 姜黄素

lpa通过其受体lpa2和Notch通路调控胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移机制的研究

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LPA通过其受体LPA2和Notch通路调控胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移机制...

作者：任志恒兰州大学

学位级别：硕士

溶血磷脂酸(lpa)是一种结构简单的小分子甘油磷脂,具有生长因子类物质的活性,通过其受体lpa2调节某些肿瘤的生物学行为。Notch1分子是Notch致瘤通路中的关键分子,但是lpa2和Notch1在胃癌中的相互作用目前并不清楚。目的:探究lpa通过lpa2... 详细信息

溶血磷脂酸(lpa)是一种结构简单的小分子甘油磷脂,具有生长因子类物质的活性,通过其受体lpa2调节某些肿瘤的生物学行为。Notch1分子是Notch致瘤通路中的关键分子,但是lpa2和Notch1在胃癌中的相互作用目前并不清楚。目的:探究lpa通过lpa2和Notch1分子调控胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移的具体机制。方法:(1).使用划痕实验、Transwell实验确定能够引起SGC-7901细胞最大侵袭迁移效应的lpa实验浓度及作用时间;(2).qrt-PCR、Western Blotting检测lpa2和Notch1在SGC-7901细胞和正常胃腺上皮细胞GES-1的表达,用lpa刺激SGC-7901细胞,qrt-PCR、Western Blotting检测lpa2和Notch通路相关分子表达情况;(3).使用lpa刺激SGC-7901细胞Western Blotting检测EMT过程相关分子表达,IFA检测细胞骨架形态是否发生改变;(4).使用小干扰RNA分别下调SGC-7901细胞lpa2、Notch1的表达,使用qrt-PCR、Western Blotting检测转染是否成功及lpa2、Notch1是否参与调控由lpa所诱导的SGC-7901细胞发生侵袭迁移、EMT及细胞形态学改变;(5).使用内源性免疫共沉淀技术探究lpa2和Notch1分子是否在SGC-7901细胞中发生相互作用。结果:(1).确定15μmol/L lpa和24 h是本研究中能够引起SGC-7901细胞最大侵袭迁移效应的实验浓度及作用时间;(2).SGC-7901细胞中lpa2和Notch1的相对表达量较GES-1细胞明显增多(plpa刺激SGC-7901细胞24 h后lpa2和Notch通路中Notch1、Hes-1的表达明显增高(plpa刺激下,E-Cadherin表达降低,Vimentin表达增加,且发生EMT是由于细胞骨架改变并形成伪足而实现;(4).lpa2、Notch1可分别调控SGC-7901细胞侵袭迁移、EMT、细胞形态学改变;(5).SGC-7901细胞中存在lpa2和Notch1协同相互作用,这种作用可在lpa刺激下放大。结论:本研究首次证实lpa可通过lpa2和Notch信号通路调控胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移,主要依赖于lpa2与Notch1的相互作用,从而将G蛋白偶联信号通路与Notch信号通路联系在一起,为今后开展胃癌分子病理学诊断和治疗提供良好基础。

关键词：胃癌细胞 lpa lpa2 Notch1 侵袭迁移蛋白互作

溶血磷脂酸诱导神经元样PC12细胞凋亡的机制研究

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溶血磷脂酸诱导神经元样PC12细胞凋亡的机制研究

作者：张杰武汉大学

学位级别：硕士

目的:1.探究lpa诱导神经元样PC12细胞凋亡的分子机制。2.探究lpa受体（lpa1和lpa2）和MAPK通路（ERK1/2、p38和JNK）在lpa诱导的神经元样PC12细胞凋亡中的作用3.提出有效阻断lpa诱导的神经元样PC12细胞凋亡的干预措施。方法:将经神经生... 详细信息

目的:1.探究lpa诱导神经元样PC12细胞凋亡的分子机制。2.探究lpa受体（lpa1和lpa2）和MAPK通路（ERK1/2、p38和JNK）在lpa诱导的神经元样PC12细胞凋亡中的作用3.提出有效阻断lpa诱导的神经元样PC12细胞凋亡的干预措施。方法:将经神经生长因子诱导分化的神经元样PC12细胞分别种在96孔板、24孔板、6孔板或6cm皿中培养。PC12细胞经三种方式处理。处理方式一:用不同浓度（0μM、20μM、40μM、60μM）的lpa处理PC12细胞24h后用于后续实验;处理方式二:用60μM的lpa处理PC12细胞不同时间（0h、6h、12h、24h）后用于后续实验;处理方式三:用dmso（vehicle）、lpa1抑制剂（AM095,5μM）、lpa2抑制剂（lpa2 antagonist 1,5μM）、ERK1/2抑制剂（U0126,5μM）、p38抑制剂（SB203580,8μM）和JNK抑制剂（SP600125,10μM）预处理PC12细胞两小时,然后加入lpa,使所有组的lpa浓度均为60μM,再孵育24h,处理完毕后用于后续实验。后续实验:CCK-8法检测PC12细胞的细胞活力;TUNEL染色检测PC12细胞的凋亡;罗丹明123染色检测PC12细胞的线粒体膜电位;Western Blot检测PC12细胞的Bcl2蛋白水平和确定Bcl2/Bax比率;实时定量PCR检测PC12细胞的Bcl2 m RNA水平。结果:***以浓度依赖和时间依赖的方式使PC12细胞的线粒体膜电位降低、凋亡比率增加和细胞活力降低。***以浓度依赖和时间依赖的方式下调了PC12细胞的抗凋亡蛋白Bcl2m RNA水平、Bcl2蛋白水平和Bcl2/Bax比率,增加Bax向线粒体的转位。***受体（lpa1和lpa2）抑制剂和MAPK通路（ERK1/2、p38和JNK）抑制剂均能阻断lpa诱导的PC12细胞的细胞活力的下降,其中lpa2抑制剂、p38抑制剂和JNK的阻断效果较好,lpa1抑制剂和ERK1/2的阻断效果最差。***受体（lpa1和lpa2）抑制剂和MAPK通路（ERK1/2、p38和JNK）抑制剂均能阻断lpa诱导的PC12细胞的线粒体膜电位的下降和凋亡比率的增加。其中,lpa2抑制剂、ERK1/2抑制剂、p38抑制剂和JNK抑制剂阻断效果较好,lpa1抑制剂的阻断效果最差。***受体（lpa1和lpa2）抑制剂和MAPK通路（ERK1/2、p38和JNK）抑制剂均能阻断lpa诱导的Bcl2 m RNA水平、Bcl2蛋白水平和Bcl2/Bax比率的下调以及Bax向线粒体的转位。其中,lpa2抑制剂、ERK1/2抑制剂、p38抑制剂和JNK抑制剂阻断效果较好,lpa1抑制剂的阻断效果最差。结论:***下调了PC12细胞的Bcl2 m RNA水平,进而降低了抗凋亡蛋白Bcl2蛋白水平及Bcl2/Bax比率,这促进了Bax向线粒体的转位,从而引起了细胞线粒体功能障碍,最终导致了PC12细胞的凋亡比率的增加。***受体（lpa1和lpa2）抑制剂和MAPK通路（ERK1/2、p38和JNK）抑制剂均能阻断lpa诱导的PC12细胞的Bcl2 m RNA水平的下降,进而减轻了Bcl2蛋白水平和Bcl2/Bax比率的下调,从而阻断了Bax向线粒体的转位,因而减轻了PC12细胞线粒体功能障碍,最终降低了PC12细胞的凋亡比率。其中,lpa2抑制剂、ERK1/2抑制剂、p38抑制剂和JNK抑制剂阻断效果较好,lpa1抑制剂的阻断效果最差。***以浓度依赖和时间依赖的方式使PC12细胞的细胞活力下降,而lpa受体（lpa1和lpa2）和MAPK（ERK1/2、p38和JNK）通路抑制剂均能阻断lpa诱导的PC12细胞的细胞活力的下降。在本文中,PC12细胞活力的高低基本与细胞凋亡率成负相关。然而,本文也提示细胞活力似乎是一个多因素相关的指标。例如,在本文中的实验条件下,ERK1/2特异性抑制剂能够明显阻断lpa诱导的PC12细胞凋亡,但对于lpa诱导的PC12细胞活力下降的阻断效果却十分有限。

关键词：溶血磷脂酸 PC12 lpa1 lpa2 MAPK 凋亡线粒体功能障碍

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人血浆高密度脂蛋白的不均一性

国外医学（临床生物化学与检验学分册） 1999年第1期20卷 1-3页

作者：许敏刘秉文华西医科大学载脂蛋白研究室浙江海宁制药厂生化研究室610041

人血浆高密度脂蛋白（HDL）极不均一，不同分离方法可得到不同亚类。HDL亚类因载脂蛋白组成、脂质含量不同，其密度、颗粒大小、电荷及抗原性均各不相同，所发挥的生理功能也不一样。在各种分离方法中，免疫亲和层析法对HDL损伤最小，... 详细信息

人血浆高密度脂蛋白（HDL）极不均一，不同分离方法可得到不同亚类。HDL亚类因载脂蛋白组成、脂质含量不同，其密度、颗粒大小、电荷及抗原性均各不相同，所发挥的生理功能也不一样。在各种分离方法中，免疫亲和层析法对HDL损伤最小，分离出的亚类能反映血浆HDL的真实情况。

关键词：血浆高密度脂蛋白 HDL 不均一性 lpa1 lpa2