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c-Myc通过lnc cropr1或lnc cropr2调控口腔鳞状细胞癌进展的研究

c-Myc通过LNC CROPR1或LNC CROPR2调控口腔鳞状细胞癌进展的研究

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作者：秦晓峰安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:口腔鳞状细胞癌(OSCC)是最常见的头颈部鳞癌之一,具有高复发、高转移和预后差等特点,患者5年生存率不到50%。c-Myc是最常见的原癌基因,可以调节非编码基因从而影响不同癌症的发生发展。长链非编码RNAs(lnc RNAs),虽然缺乏蛋白质编... 详细信息

目的:口腔鳞状细胞癌(OSCC)是最常见的头颈部鳞癌之一,具有高复发、高转移和预后差等特点,患者5年生存率不到50%。c-Myc是最常见的原癌基因,可以调节非编码基因从而影响不同癌症的发生发展。长链非编码RNAs(lnc RNAs),虽然缺乏蛋白质编码潜力,但依然可以在基因表达和肿瘤进展方面发挥重要影响。前期,我们课题组通过P493-6细胞基因芯片筛选出了与c-Myc相关的多个lnc RNAs,因此本实验进一步对c-Myc调控的lnc cropr1(c-Myc regulates OSCC progression related lnc RNA1)和lnc cropr2(c-Myc regulates OSCC progression related lnc RNA2)影响OSCC的进展进行研究。方法:采用q RT-PCR检测c-Myc过表达和敲低对lnc cropr1或lnc cropr2的影响,c-Myc与lnc cropr1或lnc cropr2在OSCC组织和癌旁组织中的表达关系。采用双荧光素酶报告实验来验证c-Myc与lnc cropr1或lnc cropr2基因启动子区域的结合。采用核质分离实验和RNA FISH来确定lnc cropr1或lnc cropr2在OSCC细胞系中的定位情况。通过q RT-PCR、Western blots、划痕实验、培养基颜色和酸度变化、细胞计数、克隆形成实验来观察lnc cropr1或lnc cropr2的过表达、敲低对OSCC细胞迁移、代谢和增殖方面的影响。通过rescue实验来验证lnc cropr1或lnc cropr2的rescue是否可以逆转其各自的敲低作用。用不同浓度的辛伐他汀处理OSCC细胞,通过观察c-Myc与lnc cropr1或lnc cropr2的变化情况来判断辛伐他汀在OSCC中的抑癌作用。通过生物素RNA pull-down实验和质谱检测来寻找与lnc cropr1或lnc cropr2存在相互作用的蛋白。用RNA结合蛋白免疫沉淀实验来反向验证质谱检测得出的PCBP2蛋白与lnc cropr1相互作用。q RT-PCR检测过表达和敲低lnc cropr1后PCBP2的变化情况。结果:在OSCC细胞系和OSCC组织中c-Myc正向调控lnc cropr1和lnc cropr2的表达。双荧光素酶报告实验验证了c-Myc与lnc cropr1或lnc cropr2基因启动子区域存在相互作用。核质分离实验和RNA FISH都表明lnc cropr1和lnc cropr2主要是细胞核定位。lnc cropr1或lnc cropr2的过表达促进OSCC细胞系的迁移、代谢和增殖。lnc cropr1或lnc cropr2的敲低抑制OSCC细胞系的迁移、代谢和增殖。Rescue实验表明lnc cropr1或lnc cropr2的rescue可以逆转其各自的敲低作用。辛伐他汀处理OSCC细胞可明显看到它对c-Myc与lnc cropr1或lnc cropr2的抑制作用。通过生物素RNA pull-down实验和质谱检测找到了多个与lnc cropr1或lnc cropr2相互作用的蛋白。PCBP2的RNA结合蛋白免疫沉淀实验反向验证了PCBP2与lnc cropr1的相互作用。过表达和敲低lnc cropr1后发现PCBP2的表达与lnc cropr1呈正相关关系。结论:在OSCC细胞系中c-Myc转录调控lnc cropr1或lnc cropr2的表达,在癌组织中其表达正相关;并且c-Myc通过lnc cropr1或lnc cropr2影响OSCC的迁移、代谢和增殖。辛伐他汀可抑制OSCC细胞中c-Myc与lnc cropr1或lnc cropr2的表达。lnc cropr1和PCBP2相互作用,并维持PCBP2蛋白表达水平,c-Myc可能通过lnc cropr1/PCBP2轴来影响OSCC的进展。

关键词：口腔鳞状细胞癌 c-Myc lnc cropr1 lnc cropr2

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