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作者：谢华华贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:探索linc00858在胰腺癌中的表达及临床意义,验证linc00858对胰腺癌增殖、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过下载公共数据库TCGA-PAAD,运用生物信息学方法分析筛选出在胰腺癌中有差异表达的lnc RNA,结合文献挑选出表达... 详细信息

目的:探索linc00858在胰腺癌中的表达及临床意义,验证linc00858对胰腺癌增殖、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过下载公共数据库TCGA-PAAD,运用生物信息学方法分析筛选出在胰腺癌中有差异表达的lnc RNA,结合文献挑选出表达差异高的基因——linc00858。通过收集贵州医科大学附属医院肝胆外科胰腺癌和匹配的癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)实验检测linc00858在胰腺癌组织及胰腺癌细胞系中的表达情况。统计胰腺癌患者临床病理资料,分析linc00858的表达与患者临床预后及临床病理资料的相关性。进一步利用RNA核浆分离及RNA-FISH(RNA荧光原位杂交)实验确定linc00858在胰腺癌细胞中的亚细胞分布。构建linc00858小干扰RNA三条,转染胰腺癌细胞PANC-1和MIA Pa Ca-2验证其转染效率;构建阴性对照、过表达及下调慢病毒稳转株,并验证其感染效率。通过CCK-8细胞增殖实验、克隆平板实验和Ed U实验检测linc00858对胰腺癌细胞增殖能力的影响;通过Transwell实验、伤口愈合实验检测linc00858对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响;Western Blot实验检测周期相关蛋白、侵袭转移相关蛋白变化。随后通过生物信息学网站mi RDB、mi RTarget数据库预测linc00858的下游调控机制,筛选出linc00858通过海绵化吸附作用可结合的mi RNA及下游靶蛋白。并通过预实验(q RT-PCR/Western Blot)及查阅文献,最终确定linc00858可结合的mi R-92a-3p以及下游靶蛋白TRAM2。利用双荧光素酶报告基因实验、q RT-PCR实验验证linc00858和mi R-92a-3p的关系。同时进行Spearman相关系数分析linc00858与mi R-92a-3p的相关性。将过表达linc00858与mi R-92a-3p mimics共转染后,通过q RT-PCR检测mi R-92a-3p的表达情况。使用体外实验(如CCK-8实验、平板克隆实验、Ed U实验、Transwell实验、伤口愈合实验、Western Blot实验)检测细胞增殖和侵袭转移能力的变化,进一步验证mi R-92a-3p是linc00858的直接靶标。利用mi RNA靶基因数据库mi RDB、mi RTarget、ENCORI预测靶基因TRAM2。Western Blot实验检测敲低TRAM2后AKT-m TOR通路蛋白的变化。将mi R-92a-3p mimics与TRAM2过表达共转染,进行体外回复实验,进一步验证TRAM2是mi R-92a-3p的直接靶蛋白。最后通过体内实验(裸鼠皮下成瘤实验)验证linc00858对胰腺癌细胞增殖能力的影响。结果:通过TCGA-PAAD数据库和结合文献筛选出在胰腺癌中差异表达倍数最高的lnc RNA为linc00858,其主要定位于细胞质中;linc00858在胰腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织;linc00858在胰腺癌细胞中的表达明显高于正常胰腺上皮细胞,其中以PANC-1和MIA Pa Ca-2细胞最为显著。linc00858表达与胰腺癌患者生存预后、淋巴转移、TNM分期及临床病理分期相关。实验结果发现:过表达linc00858后细胞的增殖、侵袭、迁移能力较对照组显著增加;下调linc00858后,上述体外实验则出现相反结果。过表达linc00858后,Western Blot实验显示linc00858能够促进Cyclin E1、CDK2、N-cadherin、Vimentin蛋白的表达,抑制P27、E-cadherin蛋白的表达,其结果是加快细胞周期G1/S期转换,诱导EMT发生,细胞增殖和侵袭转移增加;下调linc00858后,上述实验则出现相反结果。根据mi RTarget等数据库预测发现linc00858的下游调控机制可能与mi R-92a-3p相关。双荧光素酶报告实验结果显示:共转染了mi R-92a-3p mimics的linc00858-WT组的荧光素酶活性较对照组表达减少,而linc00858-MT组荧光素酶活性没有明显差异。Spearman等级相关性结果显示linc00858与mi R-92a-3p表达呈负相关。mi R-92a-3p mimics能够逆转linc00858促进胰腺癌细胞增殖和侵袭转移效应。双荧光素酶报告实验结果提示:共转染了mi R-92a-3p mimics的TRAM2-WT-3’-UTR组的荧光素酶活性较对照组表达减少,而TRAM2-MT-3’-UTR组荧光素酶活性没有明显差异。Spearman等级相关性结果显示mi R-92a-3p与TRAM2表达呈负相关。Western Blot实验结果显示敲低TRAM2后磷酸化的AKT、m TOR的蛋白表

关键词：胰腺癌 linc00858 miR-92a-3p TRAM2 增殖侵袭转移

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TFESB调控lncRNA linc00858/miR-324-5p通路抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭

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现代肿瘤医学 2022年第1期30卷 38-44页

作者：徐蕾王珊珊陈琳十堰市妇幼保健院产科湖北十堰442000 十堰市妇幼保健院保健科湖北十堰442000

目的:探讨半枝莲总黄酮提取物(total flavonoids extract from Scutellaria barbata D.Don,TFESB)调控长链非编码RNA(lncRNA)linc00858/miR-324-5p通路对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:qRT-PCR检测20例宫颈癌组织和与其对应的癌旁组织中linc00858和miR-324-5p的表达水平。以宫颈癌SiHa细胞为研究对象,将SiHa细胞随机分为Con组、TFESB处理组、si-NC组、si-linc00858组、miR-NC组、miR-324-5p组、TFESB+pcDNA组和TFESB+pcDNA-linc00858组。qRT-PCR检测各组细胞中linc00858和miR-324-5p的表达水平。细胞计数(CCK-8)试剂盒检测细胞增殖活力。Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。Western blot检测增殖相关蛋白(CyclinD1、p21)和迁移侵袭相关蛋白(MMP-2、MMP-9)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证linc00858和miR-324-5p的靶向调控关系。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中linc00858的表达水平显著升高,miR-324-5p的表达水平显著降低。与Con组比较,TFESB处理组SiHa细胞linc00858的表达水平显著降低,miR-324-5p的表达水平显著升高,细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低,并呈显著的浓度依赖性;与si-NC组比较,si-linc00858组SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低;与miR-NC组比较,miR-324-5p组SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低;与TFESB+pcDNA组比较,TFESB+pcDNA-linc00858组SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著提高。结论:半枝莲总黄酮提取物可抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制与调控lncRNA linc00858/miR-324-5p通路有关。

关键词：半枝莲总黄酮提取物 linc00858 miR-324-5p 宫颈癌增殖侵袭迁移

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白首乌提取物通过linc00858/miR-153-3p调控人胃癌细胞株生物学行为的影响

白首乌提取物通过LINC00858/miR-153-3p调控人胃癌细胞株生物学行...

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作者：魏铭甫郑州大学

学位级别：硕士

背景胃癌是全球范围内一种常见的恶性肿瘤,也是世界上与癌症相关死亡的第三大主要原因。到目前为止,化学疗法和放射治疗仍是胃癌患者的主要治疗手段。然而,放、化疗对胃癌患者的毒副作用较大,严重影响患者的生活质量,并且胃癌患者通常... 详细信息

背景胃癌是全球范围内一种常见的恶性肿瘤,也是世界上与癌症相关死亡的第三大主要原因。到目前为止,化学疗法和放射治疗仍是胃癌患者的主要治疗手段。然而,放、化疗对胃癌患者的毒副作用较大,严重影响患者的生活质量,并且胃癌患者通常对放、化疗产生抵抗性,大多数患者会在一两年内死亡。为了降低胃癌的死亡率,急需要开发一些新的治疗措施。中药在中国和东亚其他国家被广泛使用。根据中医理论和胃癌的病理生理机制,开发新型治疗手段以预防或治疗胃癌显得尤为重要。告达亭是一类从中药白首乌中提取的化合物,具有抗炎、抗氧化、免疫调节和抗肿瘤等多种药理功效。近期研究显示,告达亭在多种肿瘤包括胃癌中发挥抗肿瘤作用,然而其分子机制尚不完全清楚。目的本研究目的在于探究告达亭对胃癌细胞生物学行为的影响,并探讨其分子机制是否与调控linc00858/miR-153-3p有关,以期为胃癌的治疗和预后提供一定的实验依据。方法1.采用MTT实验检测不同浓度的告达亭对胃癌AGS和HGC27细胞活力的影响,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。2.分别采用AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡实验和流式细胞术检测不同浓度的告达亭对AGS和HGC27细胞凋亡和细胞周期的影响。3.采用Transwell实验检测不同浓度的告达亭对AGS和HGC27细胞迁移和侵袭能力的影响。4.采用qRT-PCR技术检测lincRNA linc00858和miR-153-3p在胃癌细胞和胃粘膜上皮细胞中的表达量,以及告达亭对linc00858和miR-153-3p表达的影响。5.采用脂质体转染技术将linc00858过表达载体转染至胃癌细胞,分别采用MTT、平板克隆形成、AnnexinV-FITC/PI、流式细胞术和Transwell实验检测胃癌细胞增殖、凋亡、周期、迁移和侵袭能力的变化。6.采用生物信息学在线数据库starBase预测linc00858和miR-153-3p的靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验和Pull-down实验验证二者的靶向结合关系,qRT-PCR检测linc00858对miR-153-3p的靶向负调控关系。7.Western blot检测Wnt/β-catenin通路中关键蛋白β-tatenin、cyclinD1和c-myc的表达情况。结果1.告达亭能够呈浓度依赖性的抑制胃癌AGS和HGC27细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期进程。2.linc00858在胃癌细胞中呈高表达,且告达亭能够呈浓度依赖性的抑制linc00858 的表达。3.过表达linc00858能够逆转告达亭对胃癌细胞生物学行为的调控作用。4.miR-153-3p在胃癌细胞中呈低表达,且告达亭能够呈浓度依赖性的上调miR-153-3p 的表达。5.linc00858和miR-153-3p存在靶向结合位点,且linc00858能够靶向负调控miR-153-3p的表达。6.告达亭可通过抑制linc00858的表达进而上调miR-153-3p的表达。7.告达亭能够抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,过表达linc00858可逆转告达亭对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。结论1.告达亭能够抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期进程。2.过表达linc00858能够逆转告达亭对胃癌细胞增殖、凋亡、周期、迁移和侵袭的调控作用。3.linc00858能够靶向负调控miR-153-3p的表达。4.告达亭通过调控linc00858/miR-153-3p影响胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为。5.过表达linc00858可逆转告达亭对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。

关键词：白首乌提取物告达亭 linc00858 miR-153-3p 胃癌生物学行为

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长链非编码RNA linc00858在胃癌中的表达及其临床意义

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胃肠病学和肝病学杂志 2019年第7期28卷 769-773页

作者：杜娟陈亚妮史海燕王爱红殷松娜赵菊梅延安大学医学院

目的检测长链非编码RNAlinc00858在人胃癌及其癌旁组织中的表达情况,分析linc00858表达量变化与人胃癌发生、发展的关系。方法利用在线统计软件分析TCGA数据库中linc00858在人胃癌中的表达情况及其表达量变化与胃癌患者总生存期、无病... 详细信息

目的检测长链非编码RNAlinc00858在人胃癌及其癌旁组织中的表达情况,分析linc00858表达量变化与人胃癌发生、发展的关系。方法利用在线统计软件分析TCGA数据库中linc00858在人胃癌中的表达情况及其表达量变化与胃癌患者总生存期、无病生存期及患者临床分期间的关系。用实时荧光定量PCR法检测linc00858在胃癌及其配对癌旁正常组织中的表达情况。统计学方法分析linc00858表达量与胃癌患者年龄、性别及临床分期的关系。结果linc00858在三种肾癌和骨髓癌组织中的表达量有所下降,在胃癌及其他类型的肿瘤组织中呈上升趋势;胃癌患者肿瘤组织中linc00858表达量越高患者的临床分期越晚。结论linc00858表达量的升高与胃癌的发生、发展相关,linc00858表达量的检测及调控可能有助于临床胃癌患者病情的监测及治疗。

关键词： linc00858 胃癌长链非编码RNA LncRNA

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