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超声破坏lhrh靶向微泡联合紫杉醇治疗卵巢癌的实验研究

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超声破坏LHRH靶向微泡联合紫杉醇治疗卵巢癌的实验研究

作者：贺娟重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分lhrh靶向卵巢癌的脂质微泡制备与鉴定目的:用共价结合法制备人卵巢癌靶向超声造影剂(TUCA)即lhrh-LM,并在体外培养卵巢癌细胞Ovcar3上观察体外寻靶作用方法:己二酸COOH-(CH2)4-COOH作为媒介,利用胺基羧基发生缩合反应的共价结... 详细信息

第一部分lhrh靶向卵巢癌的脂质微泡制备与鉴定目的:用共价结合法制备人卵巢癌靶向超声造影剂(TUCA)即lhrh-LM,并在体外培养卵巢癌细胞Ovcar3上观察体外寻靶作用方法:己二酸COOH-(CH2)4-COOH作为媒介,利用胺基羧基发生缩合反应的共价结合原理将lhrh粘附于NH2-LM上,制备成lhrh-LM即人卵巢癌TUCA。通过免疫荧光法,与卵巢癌细胞株Ovcar3结合的体外寻靶法鉴定。并通过lhrh阻断试验再次验证Ovcar3上有lhrh的受体。用马尔文激光粒径测量仪测量TUCA粒径大小及电位。结果:制备的TUCA荧光免疫试验阳性,体外寻靶试验显示TUCA能较好的黏附在Ovcar3细胞上,经反复洗涤不掉,而作为对照的LM与Ovcar3细胞株混合反应后经反复洗涤,微泡与细胞完全分离,无结合。且lhrh成功阻断TUCA与Ovcar3的结合。TUCA的粒径为4179.2nm,电位-24.9mv。结论:采用共价结合法成功制备了靶向超声造影剂,该造影剂在体外能高效地与人卵巢癌细胞株Ovcar-3结合。第二部分超声破坏lhrh靶向脂质微泡联合紫杉醇对卵巢癌细胞ovcar3的增殖、凋亡及细胞内药物浓度的影响目的:从细胞增殖和凋亡及细胞内药物浓度,观察靶向微泡协同紫杉醇联合超声辐照对Ovcar3细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用和细胞内药物浓度的上调影响。方法:通过MTT比色法选择紫杉醇对Ovcar3细胞体外治疗浓度,然后检测靶向微泡协同紫杉醇联合超声辐照后卵巢癌Ovcar3细胞的增殖能力;采用FCM法测诱导凋亡率;采用HPLC法检测靶向微泡协同紫杉醇联合超声辐照对卵巢癌Ovcar3细胞作用后细胞内紫杉醇药物浓度的改变。结果:紫杉醇对Ovcar3细胞体外治疗的有效浓度是10-6mol/L;靶向微泡协同紫杉醇联合超声辐照Ovcar3细胞具有更明显的抗增殖能力和诱导细胞凋亡能力。且使细胞内药物浓度明显增加。结论:TUCA协同紫杉醇联合超声辐照不仅能抑制卵巢癌Ovcar3细胞增殖,还有诱导其凋亡的作用,并能使其细胞内药物浓度上调。

关键词：靶向超声造影剂卵巢癌 lhrh 超声靶向超声造影剂紫杉醇卵巢癌 OVCAR3 细胞凋亡细胞内药物浓度

Stx1A-lhrh融合毒素基因的构建及表达

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Stx1A-LHRH融合毒素基因的构建及表达

作者：庄永菊吉林大学

学位级别：硕士

利用PCR 的方法设计两条引物从肠出血性大肠杆菌O157:H7 的基因组DNA 中扩增出编码Stx1A-lhrh 的重组融合基因片段,定向克隆到表达质粒pET28a 中,构建重组表达质粒pET28a::Stx1A-lhrh,将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中。对该重组菌株... 详细信息

利用PCR 的方法设计两条引物从肠出血性大肠杆菌O157:H7 的基因组DNA 中扩增出编码Stx1A-lhrh 的重组融合基因片段,定向克隆到表达质粒pET28a 中,构建重组表达质粒pET28a::Stx1A-lhrh,将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中。对该重组菌株用IPTG 进行诱导表达,并利用超声波裂解细菌对表达蛋白进行初步定位。SDS-PAGE 电泳检测结果表明重组菌株表达出了23.7kDa 的目的融合蛋白Stx1A-lhrh,目的蛋白为包涵体表达,经薄层扫描分析表明表达量约占菌体总蛋白的37.6%,约占细菌超声波处理后沉淀的63.4%。不同诱导时间的结果表明,在3-7h 的诱导时间内,目的蛋白的表达量没有明显变化。利用PCR的方法设计两条引物扩增出融合基因Stx1A-lhrh,定向克隆到质粒pMAL-p2x 中。将重组质粒pMAL-p2x:: Stx1A-lhrh 转化到宿主菌TB1 中,对该重组菌株用IPTG 进行诱导表达,并利用超声波裂解处理细菌。SDS-PAGE 电泳检测结果表明重组菌株表达出了66kDa 的目的融合蛋白MBP-Stx1A-lhrh,且大部分呈可溶性表达。对表达出的可溶性蛋白进行亲和层析纯化,纯化后的蛋白用factorⅩa 酶切后获得融合蛋白Stx1A-lhrh。

关键词：志贺毒素 lhrh 融合毒素高效表达可溶性表达

P2X受体在小鼠下丘脑lhrh神经元的表达

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P2X受体在小鼠下丘脑LHRH神经元的表达

作者：傅吉强第二军医大学

学位级别：硕士

在细胞、分子和系统水平有可靠的证据证实胞外ATP通过活化嘌呤能受体在生理和病理过程中发挥重要作用。P2X受体是ATP门控离子通道,它介导了快速(10ms以内)选择性通透阳离子(Na+,K+和Ca2+)的过程。到目前为止已经从哺乳动物中克隆出7种... 详细信息

在细胞、分子和系统水平有可靠的证据证实胞外ATP通过活化嘌呤能受体在生理和病理过程中发挥重要作用。P2X受体是ATP门控离子通道,它介导了快速(10ms以内)选择性通透阳离子(Na+,K+和Ca2+)的过程。到目前为止已经从哺乳动物中克隆出7种不同的P2X亚型,它们可以同或异聚体的形式组装成ATP活化的离子通道。嘌呤能P2X受体在下丘脑各处都有表达,同时lhrh神经元广泛地分布于整个下丘脑,并投射至正中隆起,在那里这些神经元从轴突末梢将lhrh释放至下丘脑门脉系统。但是截至目前还没有P2X受体在lhrh神经元表达的相关报道。本实验我们用免疫荧光组织化学双标技术研究了ATP门控阳离子通道家族成员(P2X1, P2X2, P2X3, P2X4, P2X5和P2X6)在小鼠下丘脑lhrh神经元的表达情况。由于P2X7受体功能比较特异,可以作为非选择性通道,故本实验没有对P2X7受体的表达进行研究。本研究发现lhrh-免疫阳性(-ir)神经元主要定位于终板血管器(OVLT)周围的区域,而lhrh-ir纤维主要定位于OVLT和正中隆起(ME)。我们观察到OVLT周围区域神经元的不同亚群表达P2X2、P2X、P2X5和P2X6受体,而没有观察到P2X1和P2X3受体表达。而在发现大量lhrh-ir纤维的ME区和OVLT区,只看到类似于lhrh-ir纤维的P2X6受体免疫反应阳性纤维。我们用免疫荧光组织化学双标技术观察到所有lhrh-ir神经元分别也被P2X2、P2X4、P2X5和P2X6受体抗体染色,但它们的免疫染色强度有所不同,用不同抗体进行免疫染色发现它们的强度顺序是P2X6>P2X4>P2X2>P2X5.所有lhrh-ir纤维也有高强度的P2X6抗体标记,只有一些lhrh-ir纤维,尤其是胞体附近的被P2X2抗体标记,但是ME区和OVLT区的lhrh-ir纤维并没被P2X2受体抗体标记,几乎没有lhrh-ir纤维标记有P2X4或P2X5受体抗体。我们又用免疫荧光组织化学双标技术研究了小鼠前脑中P2X受体蛋白和lhrh-ir神经元的共定位。这项研究首次证实了P2X2、P2X4、P2X5和P2X6表达于lhrh神经元,从而为小鼠前脑水平嘌呤能系统和lhrh系统之间可能的功能性相互作用奠定了坚实的神经解剖学基础。简而言之,本研究发现在lhrh神经元胞体和轴突末梢有不同P2X受体亚单位的表达。首次发现P2X2、P2X4、P2X5和P2X6表达于lhrh神经元胞体,而P2X2和P2X6也表达于lhrh神经元的轴突末梢。这些结果提示在突触前或突触后不同的同或异聚P2X受体被ATP激活以后能够对前脑水平lhrh的分泌起调节作用。

关键词： ATP P2X受体 lhrh 共定位下丘脑小鼠

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99mTc-lhrh肿瘤受体显像的研究

99mTc-LHRH肿瘤受体显像的研究

作者：郝大为蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的探讨Tc标记促性腺激素释放激素受体(gonadotropin-releasing hormone，lhrh-R)配体lhrh作为肿瘤显像剂的应用价值;探索具有较高放化纯度和良好稳定性的Tc直接标记lhrh的方法，筛选最佳标记条件，建立一种简便可靠的Tc-lhrh制备方法... 详细信息

目的探讨Tc标记促性腺激素释放激素受体(gonadotropin-releasing hormone，lhrh-R)配体lhrh作为肿瘤显像剂的应用价值;探索具有较高放化纯度和良好稳定性的Tc直接标记lhrh的方法，筛选最佳标记条件，建立一种简便可靠的Tc-lhrh制备方法;检测lhrh-R在相关肿瘤组织中的表达水平;研究lhrh的体内药代规律，为研究肿瘤lhrh受体显像及治疗提供理论和实验依据。方法①运用免疫组织化学方法(Elivision法)检测在23例肝癌、20例乳腺癌、10例前列腺癌、20例肺癌、20例子宫内膜癌的肿瘤细胞和正常组织中lhrh-R的表达水平;②选用预锡化法直接标记lhrh，标记完成后分别加入生理盐水或人血清室温下放置，以纸层析法于不同时间点测定并计算标记产物的标记率及放化纯度，观测其体内外稳定性，并通过比较分析筛选出最佳标记条件;③制备大鼠垂体细胞膜蛋白，对标记产物进行体外放射受体分析，通过饱和抑制实验，检验其受体结合活性;④Ch-T法标记I-lhrh，取正常小鼠尾静脉注射，于不同时间点处死，取血液及主要脏器，测定并计算其每克组织百分注射剂量率(%ID/g);结果①免疫组织化学法检测在23例肝癌组织中lhrh阳性率为82.61%，相应正常组织的阳性率为15%;20例乳腺癌组织中阳性率为95%，相应正常组织的阳性率为20%;10例前列腺癌组织中阳性率为70%，相应正常组织的阳性率为40%;20例肺癌组织中阳性率为85%，相应正常组织的阳性率为15.79%;20例子宫内膜癌组织中阳性率为80%，相应正常组织的阳性率为16.67%。②Tc-lhrh标记率为97.9%～100.0%，放化纯度达93.9%-96.4%，标记反应中胶体含量小于5%;③受体分析显示大结果显示：Tc-lhrh具有可饱和及可抑制的受体结合特性，且亲和力较高，RT=23.2174pmol，KD=0.4348nmol;④静脉注射131I-lhrh后72h内，小鼠血液放射性清除迅速，页：1 lhrh主要由肝脏和肾脏代谢并排出体外，其他组织脏器清除。结论①人肝脏、肺、乳腺、前列腺、子宫内膜肿瘤中lhrh-R的表达阳性率明显高于癌旁正常组织;②Tc-lhrh制备简便快速，所得标记产物放化纯度较高，稳定性较好，无需进一步纯化;③lhrh经Tc标记后，仍具有很高的受体结合能力，有生物活性;④标记产物具有较为理想的动物体内动力学表现，有希望作为具有临床实用价值的促性腺激素释放激素受体显像剂。

关键词：靶向肿瘤受体显像 lhrh

仔猪OB-Rb mRNA与lhrh在前脑内共存及orexin A的分布定位

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仔猪OB-Rb mRNA与LHRH在前脑内共存及orexin A的分布定位

作者：李庆梅南京农业大学

学位级别：硕士

1 Leptin长形受体mRNA与lhrh在猪前脑内共存本实验用原位杂交和免疫组织化学相结合的方法，研究了5头三元杂交仔猪前脑内leptin长形受体(OB-Rb)mRNA和黄体生成素释放激素(lhrh)免疫反应阳性物质的共存关系。实验结果表明，OB-Rb mRNA和... 详细信息

1 Leptin长形受体mRNA与lhrh在猪前脑内共存本实验用原位杂交和免疫组织化学相结合的方法，研究了5头三元杂交仔猪前脑内leptin长形受体(OB-Rb)mRNA和黄体生成素释放激素(lhrh)免疫反应阳性物质的共存关系。实验结果表明，OB-Rb mRNA和lhrh免疫反应阳性神经元分布于下丘脑、海马结构、大脑皮层和杏仁核内共存，即上述结构内一些表达leptin长形受体mRNA的神经元也含有lhrh免疫反应阳性物质。在下丘脑，双阳性神经元主要在室旁核、室周核、腹内侧核、外侧区、弓状核;在大脑皮层内，双阳性神经元主要位于Ⅲ—Ⅴ层;在海马结构内，双阳性神经元主要位于齿状回的多形层和颗粒层和海马的锥体细胞层。实验结果提示，leptin可能通过直接作用于下丘脑的lhrh神经元调节动物的生殖和内分泌活动。 2 OrexinA在猪中枢神经系统和外周器官的分布定位本实验用免疫组织化学方法研究了5头苏钟猪脑和外周器官内orexin A的分布定位。研究结果表明，在猪下丘脑、睾丸、肾上腺、胰腺、小肠、甲状腺和胸腺等部位都有orexin A免疫阳性细胞分布，在心未见orexin A免疫阳性细胞分布。在脑内，orexin A免疫阳性神经元主要分布于下丘脑的视前内侧区、室周核、室旁核、视上核、背内侧核、穹隆周核、乳头体核、前区、外侧区和后区等部位，以下丘脑外侧区、乳头体核和视上核出现的免疫阳性神经元最多，以室周核的最少。在外周器官，orexin A免疫阳性细胞大量存在于睾丸间质、胰岛和小肠的粘膜固有层，而在肾上腺皮质、甲状腺和胸腺等部位仅有少量免疫阳性细胞分布。本文结果与在羊上获得的结果基本相似，但也有差异。这些结果的异同，既说明orexin在种系发生上的保守性，也反映存在种间差异。

关键词：猪 OB-Rb lhrh orexin A 原位杂交免疫组织化学

贵州省地方性克汀病垂体-性腺系统功能对 lhrh 兴奋试验的反应

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中国地方病学杂志 1992年第2期11卷 85-89页

作者：时钟孚孔德明马启玲谭生荣吴艺捷朱臣凯吴常安曾定国贵阳医学院附属医院内分泌科黔南州安顺专区镇宁县卫生防疫站

在已经加碘得到控制的碘缺乏性疾病病区,观察了地方性克汀病垂体--性腺系统对促黄体激素释放因子(lhrh)试验的反应。结果:男性克汀病病人组血清黄体生成激素(LH)和卵泡刺激素(FSH)基础值显著高于对照组,但其血清睾酮(T)值则显著低于对... 详细信息

在已经加碘得到控制的碘缺乏性疾病病区,观察了地方性克汀病垂体--性腺系统对促黄体激素释放因子(lhrh)试验的反应。结果:男性克汀病病人组血清黄体生成激素(LH)和卵泡刺激素(FSH)基础值显著高于对照组,但其血清睾酮(T)值则显著低于对照组。静脉注射 lhrh100μg15分钟后,克汀病病人组血清 FSH 反应高于正常人组,LH 反应与正常对照组相似。两组血清 T 值于试验后无显著变化。静脉注射接着静脉滴注 lhrh,克汀病病人组 FSH 反应高于正常人,其 LH 最大增值和反应倍数均低于对照组,正常人组 LH、FSH 呈双相反应,克汀病病人组则无此反应。血清 T,正常人组试验后2-3小时显著升高,克汀病病人组无则显著变化。结果表明克汀病病人不仅有原发性 Leydig 和 Sertoli 细胞功能低下,而且还有垂体促性腺激素储备和再合成功能的减低。

关键词：克汀病 lhrh

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类阿片肽对山羊生殖内分泌的调节Ⅰ．吗啡和纳洛酮对山羊lhrh分泌的影响

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中国兽医学报 1995年第1期15卷 22-26页

作者：章孝荣王建辰王强华安徽合肥农业大学畜牧水产学院西北农业大学动物医学系

将１６只发情周期正常的母山羊随机分成３组：吗啡（Ｍｏｒ）组、纳洛酮（Ｎａｌ）组和对照（Ｃｏｎ）组，分别注射阿片受体兴奋剂Ｍｏｒ、阿片受体拮抗剂Ｎａｌ和等量生理盐水。通过收集垂体门脉血样，监测注射前后促黄体激素释放激素... 详细信息

将１６只发情周期正常的母山羊随机分成３组：吗啡（Ｍｏｒ）组、纳洛酮（Ｎａｌ）组和对照（Ｃｏｎ）组，分别注射阿片受体兴奋剂Ｍｏｒ、阿片受体拮抗剂Ｎａｌ和等量生理盐水。通过收集垂体门脉血样，监测注射前后促黄体激素释放激素（ＬＨＲＨ）的变化。结果表明，在山羊中黄体期和早卵泡期注射Ｍｏｒ均能显著抑制丘脑下部ＬＨＲＨ的分泌（Ｐ＜０．０５），而注射Ｎａｌ则促进其分泌（Ｐ＜０．０５），在中黄体期注射比在早卵泡期注射效果更为明显。因而认为，在山羊，体内类阿片肽参与生殖内分泌的调节，它们可能参与丘脑下部—垂体—卵巢轴，通过卵巢类固醇的负反馈机理抑制丘脑下部ＬＨＲＨ的分泌。

关键词：类阿片肽 lhrh 山羊吗啡纳洛酮

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不同lhrh激动剂治疗转移性激素敏感性前列腺癌中PSA和睾酮水平的差异对照研究

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不同LHRH激动剂治疗转移性激素敏感性前列腺癌中PSA和睾酮水平的...

作者：麦伍拉尼·马木提新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨不同黄体生成激素释放激素(lhrh)激动剂治疗转移性激素敏感性前列腺癌(metastatic hormone-sensitive prostate cancer,m HSPC)中前列腺特异性抗原(PSA)和睾酮水平的差异。方法:回顾性分析新疆维吾尔自治区人民医院2017年1月至... 详细信息

目的:探讨不同黄体生成激素释放激素(lhrh)激动剂治疗转移性激素敏感性前列腺癌(metastatic hormone-sensitive prostate cancer,m HSPC)中前列腺特异性抗原(PSA)和睾酮水平的差异。方法:回顾性分析新疆维吾尔自治区人民医院2017年1月至2020年1月收治的335例转移性激素敏感性前列腺癌患者的临床资料。均行雄激素剥夺(ADT)+辅助治疗(抗雄,抗骨质破坏等),其中83例接受醋酸亮丙瑞林治疗(A组)、154例接受醋酸戈舍瑞林治疗(B组)、98例接受醋酸曲普瑞林治疗(C组)。对患者临床资料(发病年龄,远处转移分期,风险分层,肿瘤负荷,病理分级等)以及治疗后1年内PSA(治疗前、治疗后PSA 50%降幅率、90%降幅率、降到4ng/ml、降到0.2ng/ml的各组百分比)和睾酮水平(治疗前、治疗后睾酮降低水平以及不同组1月内达到去势水平百分比的差异)进行对照分析。结果:本研究纳入了335例m HSPC患者都完成随访12月,研究中不同治疗组患者年龄、远处转移分期、风险分层、肿瘤负荷、前列腺病理分级等基线水平差异无统计学意义(P>0.05),患者基线特征具有可比性。不同治疗组之间,治疗后1月、3月、6月、9月、12月的PSA平均水平差异均有统计学意义(P0.05)。结论:不同lhrh激动剂治疗转移性激素敏感性前列腺癌中1年内PSA和睾酮水平变化有差异,曲普瑞林降低PSA水平的疗效优于戈舍瑞林,戈舍瑞林和曲普瑞林降低睾酮水平的疗效优于亮丙瑞林(6月至12月期间)。1月内曲普瑞林组睾酮水平达到趋势水平的比例略高于其他两组。

关键词：转移性激素敏感性前列腺癌 lhrh PSA 睾酮

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lhrh对隐睾丸的治疗作用

国外医学情报 1986年第22期 383-384页

作者：杨哲

正常睾九解剖学上降入阴囊依靠睾酮。睾酮促使引带(翠丸系于其上)通过腹股沟管。睾丸下降开始在胎龄第8个月时,一般在足月时已完成,少数婴儿持续到生后数周,此时期是青春期前垂体-睾丸轴功能最活跃期。出生后一年尚未降入阴囊的睾丸仅占... 详细信息

正常睾九解剖学上降入阴囊依靠睾酮。睾酮促使引带(翠丸系于其上)通过腹股沟管。睾丸下降开始在胎龄第8个月时,一般在足月时已完成,少数婴儿持续到生后数周,此时期是青春期前垂体-睾丸轴功能最活跃期。出生后一年尚未降入阴囊的睾丸仅占0.8％,与青春期百分比相似。隐睾症发病机制显然是因激素缺乏,因为单侧或双侧睾丸未降的男孩,其血清促性腺激素和血浆睾酮的浓度均低于正常男孩。但解剖学上的异常,特别是副睾,也是睾丸下降不全的一个重要原因,已发现2/3经手术治疗的病例属于这种原因。某些睾丸呈单纯型异位,通常位于腹股沟皮下环的外侧。大

关键词： lhrh 男孩疗法阴囊睾丸囊男生殖器生殖细胞性细胞