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VD3调控乳酸代谢影响成肌分化的研究

VD3调控乳酸代谢影响成肌分化的研究

作者：胡媛媛陕西理工大学

学位级别：硕士

维生素D（Vitamin D,VD）的活性形式为1,25-二羟基-维生素D(1,25（OH）D)。研究证实,VD在肌肉生长以及运动后肌肉恢复等过程中发挥着重要作用。乳酸是运动过程中骨骼肌细胞糖酵解的代谢产物,可作为信号分子,协调不同细胞、组织和器官之... 详细信息

维生素D（Vitamin D,VD）的活性形式为1,25-二羟基-维生素D(1,25（OH）D)。研究证实,VD在肌肉生长以及运动后肌肉恢复等过程中发挥着重要作用。乳酸是运动过程中骨骼肌细胞糖酵解的代谢产物,可作为信号分子,协调不同细胞、组织和器官之间的信号传导,其对骨骼肌生长发育的影响有待进一步研究。有研究发现,剧烈运动后补充VD能够减少骨骼肌中乳酸堆积,缓解肌肉疲劳。但是,在骨骼肌中VD与乳酸代谢的关系及其对成肌分化的影响机制尚不清楚。因此,本研究首先通过构建运动小鼠模型,探究VD对运动小鼠骨骼肌中乳酸代谢的影响;然后,以小鼠成肌细胞C2C12为研究对象,进一步探究VD调控乳酸代谢的分子机制以及乳酸在成肌分化过程中的作用。主要取得以下研究结果:1.基于构建的运动小鼠模型,分析了运动6周后,VD处理对小鼠体重、耐力、乳酸代谢和骨骼肌生成的影响。研究发现,VD能够提升运动造成的体重减少,进一步提高运动小鼠的耐力,降低运动小鼠血清和肌肉中乳酸的含量以及蛋白质乳酸化修饰水平。另外,VD抑制了运动小鼠骨骼肌中ldha的表达,上调运动小鼠肌肉中成肌因子MyoD、MyoG、MYH3和MYH7的表达,促进骨骼肌生成。2.通过JASPR软件预测发现ldha启动子区存在一个VDR结合位点,双荧光素酶报告实验发现VDR可能对ldha具有负调控作用。C2C12细胞中ldha的时序表达分析发现,ldha在增殖和分化期均稳定表达,在分化中后期表达量呈上升趋势。VD能够抑制C2C12细胞ldha的表达,进而减少成肌细胞中的乳酸含量,使细胞培养基中的乳酸水平低于正常值（3 mmol/L）。乳酸化修饰分析实验也发现VD降低了细胞的蛋白质乳酸化修饰水平。3.乳酸钠添加实验发现,乳酸钠可使C2C12细胞培养基中乳酸含量高于正常水平（3 mmol/L）,上调成肌因子MyoD、MyoG、MYH3、MYH7的表达,说明适量提升细胞中乳酸含量,可促进C2C12细胞成肌分化。本研究同时也分析了VD处理对C2C12细胞成肌分化的影响,发现成肌因子MyoD表达上调,MyoG和MYH7表达下调,表明VD可促进C2C12细胞早期成肌分化的发生,但对于肌纤维的成熟发育有一定的抑制作用。综上所述,本研究证实VD可通过抑制ldha的表达减少组织和细胞中的乳酸合成,从而影响成肌分化和肌肉生成。同时也发现,乳酸对成肌分化的影响,会因细胞或者组织中的乳酸水平存在较大的差异。

关键词： VD3 ldha 乳酸骨骼肌成肌分化

Targeting lactate dehydrogenase A (ldha) exerts antileukemic effects on T-cell acute lymphoblastic leukemia

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Cancer Communications 2020年第10期40卷 501-517页

作者： Haizhi Yu Yafei Yin Yifang Yi Zhao Cheng Wenyong Kuang Ruijuan Li Haiying Zhong Yajuan Cui Lingli Yuan Fanjie Gong Zhihua Wang Heng Li Hongling Peng Guangsen Zhang Department of Hematology the Second Xiangya HospitalCentral South UniversityChangshaHunan 410011P.R.China Institute of Hematology Central South UniversityChangshaHunan 410011P.R.China Department of Respiratory and Critical Medicine NHC Key Laboratory of Pulmonary Immune-related DiseasesPeople’s Hospital of Guizhou UniversityGuizhou Provincial People’s HospitalGuiyangGuizhou 550002P.R.China Department of Hematology Xiangtan Central HospitalXiangtanHunan 411100P.R.China Department of Hematology Hunan Provincial People’s Hospitalthe First Affiliated Hospital of Hunan Normal UniversityChangshaHunan 410005P.R.China Department of Hematology Hunan Children’s HospitalChangshaHunan 410005P.R.China Hunan Key Laboratory of Tumor Models and Individualized Medicine ChangshaHunan 410011P.R.China

Background:T-cell acute lymphoblastic leukemia(T-ALL)is an uncommon and aggressive subtype of acute lymphoblastic leukemia(ALL).In the serum of T-ALL patients,the activity of lactate dehydrogenase A(ldha)is increased.We proposed that targeting ldha may be a potential strategy to improve T-ALL outcomes.The current study was conducted to investigate the antileukemic effect of ldha gene-targeting treatment on T-ALL and the underlying molecular mechanism.Methods:Primary T-ALL cell lines Jurkat and DU528 were treated with the LDH inhibitor oxamate.MTT,colony formation,apoptosis,and cell cycle assays were performed to investigate the effects of oxamate on T-ALL cells.Quantitative real-time PCR(qPCR)and Western blotting analyses were applied to determine the related signaling pathways.A mitochondrial reactive oxygen species(ROS)assay was performed to evaluate ROS production after T-ALL cells were treated with oxamate.A T-ALL transgenic zebrafish model with ldha gene knockdown was established using CRISPR/Cas9 gene-editing technology,and then TUNEL,Western blotting,and T-ALL tumor progression analyses were conducted to investigate the effects of ldha gene knockdown on T-ALL transgenic zebrafish.Results:Oxamate significantly inhibited proliferation and induced apoptosis of Jurkat and DU528 cells.It also arrested Jurkat and DU528 cells in G0/G1 phase and stimulated ROS production(all Pldha significantly decreased the gene and protein expression of c-Myc,as well as the levels of phosphorylated serine/threonine kinase(AKT)and glycogen synthase kinase 3 beta(GSK-3β)in the phosphatidylinositol 3′-kinase(PI3K)signaling pathway.ldha gene knockdown delayed disease progression and down-regulated c-Myc mRNA and protein expression in T-ALL transgenic zebrafish.Conclusion:Targeting ldha exerted an antileukemic effect on T-ALL,representing a potential strategy for T-ALL treatment.

关键词： CRISPR/Cas9 gene-editing ldha oxamate T-cell lymphoblastic leukemia transgenic zebrafish model

ldha对乳腺癌演变的影响及SUMO化修饰

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临床与实验病理学杂志 2022年第4期38卷 427-431页

作者：赵雪可李威刘文黄泽翎曹鸽梁伟华曹玉文石河子大学医学院病理系石河子832000 山东省第二人民医院(山东省耳鼻喉医院)病理科济南250022 石河子大学医学院第一附属医院超声科石河子832000 石河子大学医学院第一附属医院病理科石河子832000

目的探讨ldha在乳腺癌中的表达、临床意义及与SUMO1修饰的关系。方法采用免疫组化和Western blot法检测乳腺癌组织中ldha蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系。应用数据库预测ldha表达与患者预后的关系。Co-IP鉴定ldha分子SUMO化水平... 详细信息

目的探讨ldha在乳腺癌中的表达、临床意义及与SUMO1修饰的关系。方法采用免疫组化和Western blot法检测乳腺癌组织中ldha蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系。应用数据库预测ldha表达与患者预后的关系。Co-IP鉴定ldha分子SUMO化水平,软件筛选SUMO化位点。结果ldha在癌旁正常乳腺组织、普通型导管增生、导管不典型增生、导管原位癌和浸润性导管癌组织中的阳性率分别为26.0%、26.8%、31.4%、54.2%、64.3%。ldha表达与乳腺癌组织学高分级、淋巴结转移、TNM III+IV期、ER阴性相关(P均ldha与SUMO1相互作用,致使乳腺癌中的SUMO化修饰水平降低。ldha的SUMO化位点可信度最高的是K284、K59及K14。结论ldha高表达提示乳腺癌变、恶性进展及预后不良,同时ldha蛋白发生SUMO化修饰。

关键词：乳腺肿瘤 ldha SUMO 免疫组织化学

ldha、MCT4和B7-H3在三阴性乳腺癌新辅助化疗疗效评价中的临床意义

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LDHA、MCT4和B7-H3在三阴性乳腺癌新辅助化疗疗效评价中的临床意义

作者：丁振罗南昌大学

学位级别：硕士

目的:验证三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)新辅助化疗病理完全缓解(pathologic complete response,p CR)与临床病理特征和无病生存期(disease-free survival,DFS)的关系,探究ldha、MCT4、B7-H3在新辅助化疗中对疗效评价和评估预后的价值,明确TNBC中ldha、MCT4和B7-H3在新辅助化疗前后表达的差异,初步探索乳酸代谢分子ldha、MCT4与免疫检查点B7-H3之间的潜在关联。方法:收集来自于2015年12月-2022年2月赣州市人民医院收治的TNBC患者病理标本51例,同时获取患者临床病理特征和随访信息,通过免疫组织化学染色检测新辅助化疗前后ldha、MCT4和B7-H3的表达,分析三者在疗效评价和评估预后中的价值,以及它们之间的潜在关联。结果:Ki67指数(P0.05)。ldha(42.9%)、MCT4(40.8%)和B7-H3(46.9%)均高表达于TNBC,但与p CR和DFS均无统计学意义相关(P(29)0.05),这可能与样本量少和随访时间较短有关。在28例新辅助治疗后存在残留病灶TNBC中ldha(P(27)0.05)、MCT4(P(27)0.05)和B7-H3(P(27)0.01)的阳性表达均较术前上调,差异有统计学意义。其中,MCT4与B7-H3在TNBC术前标本中高表达并呈正相关,差异有显著统计学意义(r=0.384,P=0.006)。结论:Ki67指数是TNBC获得p CR的独立预测因子;ldha、MCT4、B7-H3可能与TNBC对新辅助化疗耐药相关;其中MCT4和B7-H3在TNBC中共表达并呈正相关,有希望成为沟通乳酸代谢和肿瘤免疫研究的桥梁。

关键词： ldha MCT4 B7-H3 三阴性乳腺癌新辅助化疗预后

ldha和LDHB介导MYCT1调控的乳酸代谢与喉癌中免疫细胞浸润相关性的初步研究

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LDHA和LDHB介导MYCT1调控的乳酸代谢与喉癌中免疫细胞浸润相关性...

作者：高源中国医科大学

学位级别：硕士

前言喉癌是头颈部常见恶性肿瘤之一,在我国华北和东北地区发病率较高。近年来,喉癌的治疗采用包括手术切除、放射治疗或同步放化疗等综合性治疗策略,但是,喉癌的预后仍不理想,复发耐药和侵袭转移仍是喉癌研究的重点和难点。因此,寻找喉... 详细信息

前言喉癌是头颈部常见恶性肿瘤之一,在我国华北和东北地区发病率较高。近年来,喉癌的治疗采用包括手术切除、放射治疗或同步放化疗等综合性治疗策略,但是,喉癌的预后仍不理想,复发耐药和侵袭转移仍是喉癌研究的重点和难点。因此,寻找喉癌早期诊治、复发耐药和侵袭转移的分子靶点是喉癌研究的重要内容。MYCT1（MYC target 1）是本课题组首次发现并持续关注的潜在抑癌基因。在前期工作中,我们发现MYCT1基因能够抑制喉癌细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞的凋亡,然而,具体机制仍不明确。为了深入研究MYCT1在喉癌中的分子作用机制,我们还利用CRISPR-Cas9技术成功构建了Myct1基因敲除小鼠,经研究发现Myct1基因敲除组小鼠存在肝损伤,且出现糖原代谢和脂质代谢异常;免疫沉淀结合蛋白质谱检测结果显示,野生型小鼠肝脏组织和喉癌细胞中存在MYCT1与ldha、LDHB相互作用,且MYCT1富集ldha、LDHB的能力显著高于对照组,提示MYCT1通过与ldha、LDHB结合在喉癌中发挥重要作用。前期,我们的免疫沉淀结合蛋白质谱技术检测结果显示,在野生型小鼠组和人喉癌细胞中均发现高丰度的ldha和LDHB的富集,而在Myct1基因敲除小鼠中中未发现此现象,提示MYCT1分别与ldha和LDHB存在相互作用。乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）基因A和B分别编码乳酸脱氢酶的两个重要亚基ldha和LDHB,后者可形成5种不同的四聚体,介导丙酮酸和乳酸的相互转化。研究表明,ldha的过表达与癌症的不良预后和对放射治疗的抵抗密切相关。此外,靶向LDHB可减少肿瘤细胞增殖、自噬和侵袭。肿瘤来源的高水平乳酸与头颈部鳞状细胞癌的转移扩散风险相关,而且,产生乳酸的乳酸脱氢酶表达水平和活性均与肿瘤大小及临床严重程度呈正相关。因此,对ldha、LDHB以及乳酸代谢的研究有助于进一步探索喉癌发生发展的分子机制,发现肿瘤治疗的潜在靶点。目前,代谢抑制剂与免疫检查点阻断治疗、化疗、放疗和饮食的联合治疗为肿瘤治疗提供了新的治疗方案。但是,肿瘤细胞代谢改变会影响肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）,限制免疫应答,从而增加了肿瘤治疗的难度。肿瘤微环境中的乳酸能够发挥免疫抑制功能,通过诱导和募集免疫抑制相关细胞和因子进而促进肿瘤发展。例如,乳酸抑制单核细胞活化和树突状细胞分化;促进巨噬细胞向M2型极化;抑制自然杀伤细胞功能。因此,靶向乳酸代谢可能为肿瘤提供一种新的治疗方法。此外,乳酸可以通过抑制效应T细胞增殖和产生IFN-γ从而抑制效应T细胞功能并降低肿瘤微环境的酸碱度,进一步增强免疫抑制。综上所述,我们推测MYCT1可能通过ldha和LDHB导致喉癌乳酸代谢异常从而影响喉癌的进展。本研究中,我们通过检测Myct1基因敲除小鼠的肝脏、心脏、脑组织及过表达MYCT1的喉癌细胞中乳酸代谢相关指标的变化,以探究MYCT1对乳酸代谢的影响。同时,通过检测MYCT1、ldha和LDHB在喉癌细胞中的表达水平和相互作用关系,以明确MYCT1通过ldha和LDHB调控乳酸代谢的作用机制。此外,通过生物信息学分析MYCT1与头颈部鳞状细胞癌免疫浸润的关系,以探索靶向代谢途径对肿瘤微环境的影响,为进一步研究MYCT1在喉癌代谢中分子作用机制提供重要线索。材料和方法：1、分别采用乳酸含量测定试剂盒（微量法）、丙酮酸含量测定试剂盒（微量法）、辅酶I NAD（H）含量检测试剂盒（微量法）检测Myct1基因敲除小鼠肝脏、心脏、脑组织乳酸含量、丙酮酸含量和NAD+及NADH含量,并计算[NAD+]∕[NADH]和乳酸脱氢酶反应商Q;2、分别采用乳酸含量测定试剂盒（微量法）、丙酮酸含量测定试剂盒（微量法）、辅酶I NAD（H）含量检测试剂盒（微量法）检测过表达和敲减MYCT1后喉癌细胞乳酸含量、丙酮酸含量和NAD+及NADH含量,并计算[NAD+]∕[NADH]和乳酸脱氢酶反应商Q;3、从癌症基因组图谱（the Cancer Genome Atlas,TCGA）下载头颈部鳞状细胞癌（包括肿瘤组织500例和正常样本44例）的RNA-seq和临床信息,计算ldha和LDHB的表达情况和生存分析;4、Real-time PCR和Western blot检测10对喉癌患者肿瘤和正常组织中ldha和LDHB m RNA和蛋白差异表达情况;5、Real-time PCR和Western blot检测转染过表达和敲减MYCT1后ldha和LDHB的m RNA和蛋白表达情况;采用乳酸含量测定试剂盒（微量法）分别检测MYCT1敲减组、MYCT1和ldha敲减组、MYCT1和LDHB敲减组喉癌细胞乳酸含量的变化;6、免疫共沉淀检测MYCT1分别与ldha、LDHB结合情况;7、应用肿瘤免疫浸润数据库（tumor immune estimation resour

关键词：喉癌 MYCT1 乳酸代谢 ldha LDHB 免疫细胞浸润

ldha及HIF-1α在乳腺癌中的表达及临床意义

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LDHA及HIF-1α在乳腺癌中的表达及临床意义

作者：刘世佳山西医科大学

学位级别：硕士

目的:癌症的特征之一是癌细胞的代谢重编程。靶向细胞代谢是当今癌症的治疗热点。乳腺癌是一种高度异质性和复杂性的代谢疾病,主要通过Warburg效应进行细胞代谢重编程。乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,ldha)和缺氧诱导因子1α(Hyp... 详细信息

目的:癌症的特征之一是癌细胞的代谢重编程。靶向细胞代谢是当今癌症的治疗热点。乳腺癌是一种高度异质性和复杂性的代谢疾病,主要通过Warburg效应进行细胞代谢重编程。乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,ldha)和缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是乳腺癌代谢重编程的重要驱动因素,在乳腺癌增殖、迁移、酸性微环境形成、免疫逃逸等方面发挥着关键作用。靶向乳腺癌细胞的代谢可能是一种很有前途的癌症治疗策略。本研究旨在通过免疫组化方法检测乳腺癌及癌旁组织中ldha及HIF-1α蛋白的表达情况,探索性分析ldha、HIF-1α参与乳腺癌发生、发展的重要性和意义,验证ldha、HIF-1α是否可成为乳腺癌临床诊断、治疗、预后的新靶点。方法:本研究选取2015年6月-2015年12月于山西省人民医院乳腺科手术,术后病理诊断为浸润性乳腺癌的患者。严格按照纳入排除标准选取浸润性乳腺癌患者96例为实验组,配对的96例癌旁组织为对照组。采用免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)检测乳腺癌中ldha及HIF-1α的蛋白表达水平,采用电话、门诊随访的方法统计患者的DFS、OS,同时用统计学分析ldha及HIF-1α的表达和临床病理特征及生存预后的关系。采用SPSS 28.0进行数据统计分析。卡方检验或Fisher检验进行组间差异分析,以(p﹤0.05)为差异有统计学意义。用Spearman相关性检验分析两基因表达的相关性。使用Kaplan-Meier绘制生存曲线,分析预后,Log-rank检验进行组间比较。结果:1.ldha表达情况:ldha在胞质或胞核中表达,在乳腺癌中的阳性表达率为67.7%(65/96),显著高于癌旁对照组织中的阳性表达率18.8%(18/96),差异有统计学意义(pldha、HIF-1α表达相关性:用Spearman相关性检验分析得出,ldha、HIF-1α表达正相关(r=0.456,pldha及HIF-1α与乳腺癌患者不同临床病理因素关系:ldha、HIF-1α在乳腺癌中的表达均与病理分期、组织学分级、Ki-67表达、腋窝淋巴结转移个数有关(pldha在乳腺癌各分子分型中表达差异无统计学意义(p>0.05),但ldha在三阴性乳腺癌中的阳性表达率最高。5.ldha及HIF-1α与乳腺癌患者的预后分析:ldha表达与OS呈负相关(p=0.028),与DFS呈负相关(p=0.023)。HIF-1α表达与患者的OS和DFS也呈负相关(OS p=0.003,DFS pldha、HIF-1α在乳腺癌中均表达上调,同时参与乳腺癌的发生发展,在表达上呈正相关,提示ldha、HIF-1α在乳腺癌中存在协同作用,共同促进乳腺癌的增殖、侵袭。2.ldha、HIF-1α参与乳腺癌的进展,与乳腺癌病理分期、Ki-67表达状态、组织学分级以及腋窝淋巴结转移个数均有一定的关系,能预测乳腺癌的恶性程度;同ldha相比,HIF-1α在三阴性和HER-2阳性乳腺癌中具有更重要的临床意义,可能在未来成为乳腺癌新的治疗靶点。3.HIF-1α和ldha高表达与乳腺癌不良预后有关,为乳腺癌患者的预后判断提供参考。

关键词：乳腺癌 ldha HIF-1α

ldha介导上皮间质转化促进宫颈癌细胞增殖和迁移的作用机制研究

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LDHA介导上皮间质转化促进宫颈癌细胞增殖和迁移的作用机制研究

作者：彭婷华中科技大学

学位级别：硕士

目的:宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,放化疗是目前临床上治疗晚期和复发宫颈癌的主要手段,但治疗效果有限;因而寻找有效的靶标对于改善宫颈癌患者的预后具有重要意义。既往研究表明乳酸脱氢酶A(ldha)参与多种肿瘤细胞的恶性进展,是... 详细信息

目的:宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,放化疗是目前临床上治疗晚期和复发宫颈癌的主要手段,但治疗效果有限;因而寻找有效的靶标对于改善宫颈癌患者的预后具有重要意义。既往研究表明乳酸脱氢酶A(ldha)参与多种肿瘤细胞的恶性进展,是肿瘤精准治疗的潜在靶点;本研究旨在探索ldha在宫颈癌发生发展中的潜在作用,并探索靶向ldha逆转宫颈癌恶性表型的作用机制。方法:利用GEPIA2、Kaplan-Meier plotter、c-Bio Portal、COSMIC、GSCA等数据库探究ldha在宫颈癌中的表达、预后影响、基因突变及作用机制;利用si RNA和ldha小分子抑制剂(FX-11)在体外(细胞增殖、克隆、划痕、迁移、免疫印迹、三维培养)和体内(细胞系移植瘤模型)中,验证ldha在宫颈癌细胞系(SIHA、HELA)中介导上皮间质转化(EMT)促进宫颈癌增殖迁移的作用及机制。结果:生物信息学分析表明ldha在宫颈癌中高表达,且其表达水平与基因拷贝数变异呈正相关;预后分析结果发现高表达ldha的宫颈癌患者总体预后较差;之后体内外实验结果证实了ldha在宫颈癌中的恶性作用,敲低ldha表达或ldha抑制剂(FX-11)均可以明显抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移能力;进一步功能富集分析及EMT评分揭示了ldha在宫颈癌中介导EMT的过程,随后体外实验证实了敲低ldha表达或FX-11可调节宫颈癌细胞EMT通路关键分子(E-cadherin、N-cadherin、Snail1等)的表达,EMT通路发生逆转。结论:ldha在宫颈癌中高表达,抑制ldha可以通过逆转EMT降低宫颈癌细胞的增殖及迁移能力,ldha有望作为潜在的分子靶点应用到宫颈癌的精准医疗中。

关键词：妇科肿瘤宫颈癌 ldha 上皮间质转化 FX-11

ldha与M2型肿瘤相关巨噬细胞在胃腺癌中的表达、相关性及临床意义

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LDHA与M2型肿瘤相关巨噬细胞在胃腺癌中的表达、相关性及临床意义

作者：石玉香甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的:1.通过检测ldha、CD163和CD68在胃腺癌组织和癌旁组织中蛋白的表达,将CD163/CD68比值定义为M2型极化巨噬细胞,分析ldha与M2型巨噬细胞在胃腺癌中表达的临床病理意义,并分析两者的相关性及与胃癌患者的预后关系,为基于胃癌酸性微环... 详细信息

目的:1.通过检测ldha、CD163和CD68在胃腺癌组织和癌旁组织中蛋白的表达,将CD163/CD68比值定义为M2型极化巨噬细胞,分析ldha与M2型巨噬细胞在胃腺癌中表达的临床病理意义,并分析两者的相关性及与胃癌患者的预后关系,为基于胃癌酸性微环境和M2型巨噬细胞治疗胃癌提供临床依据。2.已有研究表明乳腺癌细胞来源的乳酸激活GPR132促进巨噬细胞的M2极化,促进癌细胞粘附、迁移和侵袭,故我们基于胃腺癌组织中GPR132蛋白表达探讨胃癌组织中乳酸对巨噬细胞的调控机制。方法:1.运用生物信息学方法分析胃癌组织和正常组织中ldha、CD163和CD68 m RNA的差异表达,并分析在胃癌组织中ldha m RNA分别在M2型巨噬细胞高表达组和低表达组中的差异表达情况。2.收集2011年10月至2022年4月就诊于甘肃中医药大学附属医院、兰州大学第一医院和联勤保障部队第九四〇医院的141例胃腺癌组织标本和75例癌旁组织标本及相应的临床病理资料。制作组织芯片,通过免疫组化法检测胃腺癌组织中和癌旁组织中ldha、CD163、CD68和GPR132蛋白表达情况。应用SPSS 25.0对数据进行统计分析,Pldha、CD163和CD68 m RNA在胃癌组织中的表达水平高于正常组织(Pldha m RNA在M2型巨噬细胞高表达组的表达水平高于低表达组(Pldha蛋白表达率高于癌旁组织(Pldha的高表达主要与较晚的临床分期、较深肿瘤浸润程度和错配修复功能相关(Pldha蛋白高表达与M2型巨噬细胞高浸润呈正相关(r=0.204,Pldha高表达和M2型巨噬细胞高浸润与患者较差预后有关(Pldha表达和M2型巨噬细胞浸润并无相关性(P>0.05)。结论:1.胃腺癌组织中ldha蛋白表达和M2型巨噬细胞浸润均高于癌旁组织,ldha高表达和M2型巨噬细胞高浸润与患者的较差的预后相关,提示胃癌微环境内有氧糖酵解产生的乳酸及肿瘤相关巨噬细胞可能参与胃癌的恶性进展;2.ldha蛋白表达与M2型巨噬细胞浸润呈正相关,提示胃癌微环境内有氧糖酵解产生的乳酸可能重新编码肿瘤相关巨噬细胞;3.胃腺癌组织中GPR132蛋白表达水平低于癌旁组织,但与ldha、M2型巨噬细胞并无相关性,这与乳腺癌中乳酸-GPR132轴调控巨噬细胞M2型极化不一致,提示胃癌组织中GPR132蛋白可能不参与乳酸调控肿瘤相关巨噬细胞机制。

关键词：胃癌乳酸肿瘤相关巨噬细胞 ldha GPR132

ldha在脑胶质瘤细胞替莫唑胺耐药中的作用和相关机制研究

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LDHA在脑胶质瘤细胞替莫唑胺耐药中的作用和相关机制研究

作者：史鎏桉吉林大学

学位级别：硕士

研究背景:脑神经胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤,以其极强的增殖能力及高度浸润性生长的特点著称,手术切除往往不能达到预期,术后常常需结合放化疗进行辅助治疗。替莫唑胺是一种亲脂性咪唑四嗪类烷化剂,目前作为胶质瘤术后化疗的一线治... 详细信息

研究背景:脑神经胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤,以其极强的增殖能力及高度浸润性生长的特点著称,手术切除往往不能达到预期,术后常常需结合放化疗进行辅助治疗。替莫唑胺是一种亲脂性咪唑四嗪类烷化剂,目前作为胶质瘤术后化疗的一线治疗药物。然而术后结合放化疗的病人仍然有极高的复发率和死亡率,这和胶质瘤的耐药性有很大联系。糖酵解过程中乳酸脱氢酶A(ldha)可以将丙酮酸变成乳酸,进而可以提高肿瘤细胞对葡萄糖的摄取和乳酸的生成,从而满足了细胞对能量的需要。最近的调查表明,ldha在许多肿瘤的发生进展、预后和细胞死亡中起着重要的职能,而且与替莫唑胺的敏感性有关。因此,探索ldha在脑胶质瘤对替莫唑胺耐药中的相关机制,具有良好的研究前景。研究目的:本实验将不同病理分级的胶质瘤病人样本进行比较,并分析样本内ldha、MGMT以及耐药相关蛋白的表达水平,探讨ldha与糖酵解的关系,并与细胞内活性氧含量的变化进行比较。并进一步探讨ldha对人脑胶质瘤细胞的耐药性及相关机理。研究方法:1.采用Western-Blot法对8例不同病理等级的胶质瘤病人进行ldha表达的比较。2.Western-Blot法测定了不同剂量及不同作用时间的替莫唑胺对脑胶质瘤中ldha含量的影响。3.使用人U87及U251细胞进行实验。分别使用以ldha为靶点的SiRNA、阴性对照的非功能性SiRNA,对实验组和对照组细胞进行转染。4.空白组、对照组、实验组按TMZ是否给药分为给药组和不给药组,TMZ处理的浓度为200μmol/L。Western-Blot检测各组细胞的胞浆内PGP、MRP-1和胞核内MGMT以及细胞内胞浆的PKM2、HKII、PFKP、NOX1、NOX4的含量变化。5.对上述六组细胞分别进行MTT实验、ROS实验、DHE实验检测肿瘤细胞的生存率和细胞中的活性氧含量的改变。实验结果:1.ldha在脑胶质瘤中的表达与肿瘤的恶性程度有关,恶性程度越高,ldha表达量越高。2.ldha在脑胶质瘤组织的表达随TMZ的持续时间及浓度的升高而升高。3.ldha敲除后,相对于对照组及和空白组,实验组中TMZ所诱导的细胞内P-GP、MGMT、MRP-1等耐药蛋白的表达明显降低。4.敲去ldha后,细胞内PKM2、HKII、PFKP等蛋白的表达均有一定程度的降低。5.MTT释放实验结果显示敲除ldha后,TMZ对胶质瘤细胞的杀伤作用明显增强。6.ROS荧光实验和DHE荧光实验结果显示敲低ldha,细胞内的活性氧含量升高。7.敲除ldha后能提高NOX1,NOX4的表达,并能促进活性氧的生成。研究结论:1.ldha的表达量会随着脑胶质瘤的恶化而增加。2.对替莫唑胺耐药的胶质瘤细胞中,ldha的表达较高。3.敲除ldha基因可减弱脑胶质瘤细胞对TMZ的耐药作用。4.敲除ldha可通过抑制糖酵解及增加细胞内活性氧的水平来增强替莫唑胺的杀伤作用。

关键词：胶质瘤替莫唑胺 ldha 耐药相关蛋白糖酵解障碍