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基于线粒体自噬探讨血府逐瘀汤抗心肌缺血损伤的作用机制

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时珍国医国药 2022年第8期33卷 1797-1801页

作者：李蕾钟声苏畅张秋雁杨漾谭精培黄舒淳湖南中医药大学湖南长沙410208

目的基于线粒体自噬探讨血府逐瘀汤抗心肌缺血损伤的作用机制。方法大鼠随机分为7组:正常组,假手术组,模型组,阿托伐他汀组,血府逐瘀汤低剂量组,中剂量组,高剂量组。建立急性心肌缺血大鼠模型。造模24h后灌胃,于灌胃第7天后取材。HE染... 详细信息

目的基于线粒体自噬探讨血府逐瘀汤抗心肌缺血损伤的作用机制。方法大鼠随机分为7组:正常组,假手术组,模型组,阿托伐他汀组,血府逐瘀汤低剂量组,中剂量组,高剂量组。建立急性心肌缺血大鼠模型。造模24h后灌胃,于灌胃第7天后取材。HE染色观察心肌组织病理学改变,电镜观察心肌细胞线粒体超微结构,免疫组化检测心肌组织P62、LC3-Ⅱ、VDAC1、Miro1、NBR1的表达。结果血府逐瘀汤可以改善心肌组织病理状态,减轻心肌细胞线粒体损伤,改善心肌细胞线粒体超微结构,下调P62、LC3-Ⅱ、VDAC1、Miro1、NBR1的表达,与模型组比较,差异具有统计学意义(PLC3-Ⅱ、VDAC1、Miro1、NBR1的表达有关,在低、中、高剂量组中,以高剂量组效果最佳。

关键词：冠心病线粒体自噬血府逐瘀汤 P62 LC3-Ⅱ VDAC1 Miro1 NBR1

柔肝降酶方含药血清抑制人肝星状细胞的活化及自噬

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中国组织工程研究 2023年第33期27卷 5334-5341页

作者：陶柏楠王咏兰江露张宗星刘道忠万星黄德斌袁林湖北民族大学风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室湖北省恩施州445000 四川大学华西基础医学与法医学院四川省成都市610064

背景:自噬在肝纤维化中发挥重要作用,可以通过诱导肝星状细胞活化促进肝纤维化的进程。前期研究表明,柔肝降酶方具有保护肝功能、抗炎、抗氧化应激反应等作用,其是否通过自噬抗肝纤维化的作用机制尚未阐明。目的:探讨柔肝降酶方含药血... 详细信息

背景:自噬在肝纤维化中发挥重要作用,可以通过诱导肝星状细胞活化促进肝纤维化的进程。前期研究表明,柔肝降酶方具有保护肝功能、抗炎、抗氧化应激反应等作用,其是否通过自噬抗肝纤维化的作用机制尚未阐明。目的:探讨柔肝降酶方含药血清对脂多糖诱导的人肝星状细胞活化及自噬的影响及其潜在的作用机制。方法:用脂多糖建立人肝星状细胞活化模型,分成不同的处理组:(1)空白组:人肝星状细胞+空白血清;(2)模型组:人肝星状细胞+空白血清+脂多糖;(3)柔肝降酶方低、中、高剂量含药血清组:人肝星状细胞+低、中、高剂量柔肝降酶方含药血清+脂多糖;(4)柔肝降酶方高剂量含药血清联合雷帕霉素组:高剂量组基础上+雷帕霉素;(5)柔肝降酶方高剂量含药血清联合PI3K抑制剂组:高剂量组基础上+LY294002。CCK-8法观察细胞增殖情况;采用单丹磺酰尸胺染色法观察细胞自噬情况;WesternBlot检测细胞通路蛋白(PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、mTOR、P-mTOR)、自噬相关蛋白(P62、Beclin-1、lc3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)、人肝星状细胞活化标志蛋白(α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原纤维)表达水平的影响。结果与结论:(1)柔肝降酶方含药血清能够降低人肝星状细胞的增殖活性,下调Ⅰ型胶原纤维、α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达,上调自噬P62蛋白的表达,降低LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白的表达,且呈现剂量依赖性;(2)MDC荧光染色结果显示,柔肝降酶方含药血清可使细胞绿色斑点荧光强度降低;(3)加入自噬激动剂雷帕霉素后,P62蛋白表达降低,LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达升高;(4)经过柔肝降酶方含药血清处理后,PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平升高,呈剂量依赖性,这种作用能被PI3K抑制剂LY294002减弱;(5)提示柔肝降酶方含药血清可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制自噬,减少脂多糖诱导的人肝星状细胞活化。

关键词：柔肝降酶方细胞自噬 Akt mTOR LC3-Ⅱ 人肝星状细胞

雷公藤甲素调节佐剂关节炎大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织细胞自噬的实验研究

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四川大学学报（医学版） 2017年第4期48卷 520-525页

作者：万磊刘健黄传兵张晓军王亚黎章平衡孙玥刘磊安徽中医药大学第一附属医院风湿免疫科合肥230031 安徽中医药大学中医临床学院合肥230038 安徽医科大学第四附属医院中医科合肥230022 安徽中医药大学研究生院合肥230038

目的观察雷公藤甲素(TP)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜脾脏胸腺自噬相关基因(Atg)/自噬标记蛋白(LC3-Ⅱ)、Beclin1表达和血清细胞因子水平的影响。方法将大鼠随机分为4组:正常对照(NC)组,模型对照(MC)组,来氟米特(LEF)组,雷公藤甲素(TP)组,... 详细信息

目的观察雷公藤甲素(TP)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜脾脏胸腺自噬相关基因(Atg)/自噬标记蛋白(LC3-Ⅱ)、Beclin1表达和血清细胞因子水平的影响。方法将大鼠随机分为4组:正常对照(NC)组,模型对照(MC)组,来氟米特(LEF)组,雷公藤甲素(TP)组,每组12只,后3组复制成AA大鼠模型。致炎后第13d开始给药。NC组、MC组给予生理盐水灌胃,每天1次;LEF组按5mg/kg的剂量灌胃,每天1次;TP组按50μg/kg的剂量,每天1次。连续给药30d。观察大鼠关节及其病理形态学变化,ELISA法检测血清细胞因子B淋巴细胞刺激因子(BAFF)、白介素(IL)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-15、IL-10表达,RT-PCR法检测大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织Atg5、Atg7、Atg12mRNA,Western blot法检测大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达。结果治疗后,TP组和LEP组大鼠足跖肿胀度(E)和关节炎指数较MC组降低。与NC组比较,MC组大鼠血清BAFF、IL-1、TNF-α升高,IL-15、IL-10降低,滑膜Atg5、Atg12 mRNA降低,脾脏Atg5 mRNA降低,脾脏Atg7、Atg12mRNA及胸腺Atg12mRNA升高,滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin1下降(PLC3-Ⅱ、Beclin 1升高(P<0.05)。与LEF组比较,TP组TNF-α、BAFF降低,E、IL-15升高(P<0.05或0.01)。TP组滑膜Atg7 mRNA及胸腺Atg5、Atg7 mRNA表达降低,胸腺Atg12mRNA及脾脏Atg5、Atg7、Atg12mRNA表达升高。结论 TP通过调节滑膜、胸腺、脾脏组织细胞自噬,改善关节滑膜炎症反应。

关键词：佐剂关节炎细胞自噬 Atg LC3-Ⅱ Beclin 1 滑膜炎症雷公藤甲素

耳聋左慈丸对H_(2)O_(2)损伤小鼠耳蜗基底膜miR-34a的作用及机制

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中国药理学通报 2021年第12期37卷 1757-1762页

作者：楚敏阎希芮龚永昌刘晴施建蓉董杨上海中医药大学教学实验中心上海201203 上海中医药大学基础医学院上海201203

目的探讨耳聋左慈丸对H_(2)O_(2)致小鼠耳蜗基底膜损伤模型miR-34a的作用及其机制。方法采用C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜的离体培养,实验分为对照组、H_(2)O_(2)模型组(0.3 mmol·L^(-1))、耳聋左慈丸组(5 mg·L^(-1)、10 mg·L^(-1)和50 mg... 详细信息

目的探讨耳聋左慈丸对H_(2)O_(2)致小鼠耳蜗基底膜损伤模型miR-34a的作用及其机制。方法采用C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜的离体培养,实验分为对照组、H_(2)O_(2)模型组(0.3 mmol·L^(-1))、耳聋左慈丸组(5 mg·L^(-1)、10 mg·L^(-1)和50 mg·L^(-1))。q-RTPCR检测miR-34a表达,免疫荧光法检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、微管相关轻链蛋白3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,lc3)和选择性自噬接头蛋白(p62/sequestosome 1,SQSTM1)在耳蜗基底膜毛细胞的表达;TUNEL法检测基底膜毛细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,模型组小鼠耳蜗基底膜miR-34a表达明显升高(P34a表达下降(PLC3-Ⅱ和p62蛋白表达明显增加(PLC3-Ⅱ和p62蛋白表达降低(P34a,调节SIRT1蛋白,进而影响耳蜗毛细胞的自噬和凋亡,达到抑制H_(2)O_(2)致毛细胞氧化损伤的作用。

关键词：耳聋左慈丸老年性聋 miR-34a SIRT1 LC3-Ⅱ p62 自噬凋亡

萝卜硫素干预纳米细菌诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白的表达

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中国组织工程研究 2019年第34期23卷 5503-5507页

作者：蒲道静郑府徐先顺丁文娟陈艳邹照银恩施土家族苗族自治州中心医院感染管理科湖北省恩施市445000 恩施土家族苗族自治州中心医院泌尿外科湖北省恩施市445000

背景:萝卜硫素能改善肾小管上皮细胞氧化应激损伤,抑制细胞凋亡,对肾小管上皮细胞损伤作用具有保护作用,但萝卜硫素对肾小管上皮细胞线粒体自噬的影响还有待研究。目的:验证萝卜硫素对纳米细菌诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡及线粒体... 详细信息

背景:萝卜硫素能改善肾小管上皮细胞氧化应激损伤,抑制细胞凋亡,对肾小管上皮细胞损伤作用具有保护作用,但萝卜硫素对肾小管上皮细胞线粒体自噬的影响还有待研究。目的:验证萝卜硫素对纳米细菌诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响。方法:研究方案的实施符合恩施土家族苗族自治州中心医院对研究的相关伦理要求。纳米细菌取自恩施土家族苗族自治州中心医院泌尿外科临床确诊肾结石且未服药或手术患者的尿液,患者对实验方案完全知情同意。将人肾小管上皮细胞HK-2分为3组:对照组、纳米细菌组及萝卜硫素干预组(给予纳米细菌刺激同时加30μmol/L萝卜硫素)。采用CCK-8法检测HK-2细胞相对存活率,流式细胞仪检测HK-2细胞凋亡率,Western Blot方法检测凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)及同源性磷酸酶张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)介导的线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、lc3-Ⅰ的表达。结果与结论:①萝卜硫素能有效改善纳米细菌对HK-2细胞增殖的抑制作用(PLC3-Ⅱ/lc3-Ⅰ比值上升(PLC3-Ⅱ/lc3-Ⅰ比值(P<0.05);③结果说明,萝卜硫素可抑制纳米细菌诱导的肾小管上皮细胞HK-2的凋亡,缓解其由PINK1/Parkin介导的线粒体自噬。

关键词：萝卜硫素肾小管上皮细胞纳米细菌线粒体自噬细胞凋亡 Bax Bcl-2 LC3-Ⅱ lc3-Ⅰ

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中药新药与临床药理 2019年第6期30卷 639-646页

作者：安祯祥何远利王敏安仕刚陈昱江贵州中医药大学第一附属医院

目的探讨扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为正常组,模型组,FRF高、中、低剂量组(17.08、8.54、4.27g·kg^-1),秋水仙碱组(0.2mg·kg^-1),扶正化瘀组(0.415g·kg^-1... 详细信息

目的探讨扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为正常组,模型组,FRF高、中、低剂量组(17.08、8.54、4.27g·kg^-1),秋水仙碱组(0.2mg·kg^-1),扶正化瘀组(0.415g·kg^-1)。采用大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液(1.5mL·kg^-1)联合灌胃30%乙醇(10mL·kg^-1)制备肝纤维化模型,连续造模8周;其后灌胃相应药物(10mL·kg^-1),每日1次,连续4周,正常组、模型组给予等体积生理盐水。检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GGT)及总胆红素(TBIL)水平;Masson染色法观察大鼠肝纤维化程度;透射电镜观察大鼠肝组织超微结构;免疫组化法检测肝组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;qRT-PCR以及WesternBlot法检测大鼠肝组织Beclin-1、LC3-ⅡmRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、γ-GGT、TBIL含量显著增高(PLC3-ⅡmRNA、蛋白表达上调(PLC3-ⅡmRNA、蛋白表达显著下调(PLC3-Ⅱ蛋白的表达,抑制细胞自噬功能相关。

关键词：扶脾柔肝方肝纤维化自噬 Beclin-1 LC3-Ⅱ

电针对脑缺血再灌注大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响

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南京中医药大学学报 2021年第2期37卷 270-274页

作者：徐疏影李文倩洪浩蔡云吴旭朱冰梅彭拥军南京中医药大学附属医院江苏南京210029 四川大学华西医院四川成都610041 南京中医药大学针灸推拿学院·养生康复学院江苏南京210023

目的观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的改善程度及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响。方法根据随机数字表法,将72只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组24只。采用Longa线栓法建立改良的急性局灶性脑缺血再灌... 详细信息

目的观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的改善程度及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响。方法根据随机数字表法,将72只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组24只。采用Longa线栓法建立改良的急性局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,并在缺血1 h后进行再灌注。参照改良的Zea Longa 8级神经功能缺损评分法对3组大鼠脑神经功能损伤程度进行评估。电针组于造模成功后5 min和16 h进行电针干预。于再灌注后24 h取材。TTC染色法观察各组大鼠脑梗死体积;HE染色法观察大鼠脑组织病理学变化;Western blot检测大鼠右侧纹状体脑组织中LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达,qPCR检测Beclin1 mRNA表达。结果对照组无行为学改变,模型组神经功能缺损评分显著高于对照组(PLC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达明显增加(PLC3-Ⅱ、Beclin1的表达,调控自噬的发生,减小大鼠脑梗死体积,改善神经功能缺损,实现对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护效应。

关键词：电针脑缺血再灌注自噬 LC3-Ⅱ Beclin1

白藜芦醇通过TFEB调节细胞自噬的机制研究

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营养学报 2019年第4期41卷 374-378页

作者：陆晶韩莎莎何蒙娇陈良亮金家列连福治杭州师范大学医学院

目的研究白藜芦醇对HeLa细胞自噬的影响,探讨白藜芦醇通过转录因子TFEB调节自噬的可能机制。方法用0、12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇处理HeLa细胞后,CCK-8法检测细胞活性;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白lc3-... 详细信息

目的研究白藜芦醇对HeLa细胞自噬的影响,探讨白藜芦醇通过转录因子TFEB调节自噬的可能机制。方法用0、12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇处理HeLa细胞后,CCK-8法检测细胞活性;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和TFEB总蛋白水平以及TFEB在核提取液中的水平;荧光显微镜观察GFP-lc3融合蛋白在细胞内分布;荧光定量PCR检测TFEB及其靶基因mRNA水平。结果白藜芦醇处理24 h后HeLa细胞活性降低,激活型Caspase-3蛋白水平增加。白藜芦醇处理增加细胞LC3-Ⅱ蛋白水平,在12h达到高峰,且呈剂量依赖性变化,同时GFP-lc3荧光在细胞内呈点状聚集。白藜芦醇处理增加总细胞和核提取液中TFEB蛋白水平,并增加TFEB自身mRNA及其靶基因mRNA水平。结论白藜芦醇可能通过TFEB在转录水平调节细胞自噬。

关键词：白藜芦醇 LC3-Ⅱ 自噬 TFEB

子宫内膜异位症患者与健康女性的经血源间充质干细胞自噬功能比较研究

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药物评价研究 2023年第7期46卷 1417-1423页

作者：张悦健林陶秀何甜甜杨思晨李长香睢丛璐郭亚楠马小娜北京中医药大学第三临床医学院北京100029 北京中医药大学中医学院北京100029 北京中医药大学第三附属医院北京100029

目的比较子宫内膜异位症(EMT)患者与健康女性的经血源间充质干细胞(MenSCs)的自噬功能。方法分别从EMT患者及健康女性的月经血中提取EMT MenSCs(E-MenSCs)和正常MenSCs(H-MenSCs),并借助成脂、成骨诱导分化鉴定其干细胞属性。通过CCK-8... 详细信息

目的比较子宫内膜异位症(EMT)患者与健康女性的经血源间充质干细胞(MenSCs)的自噬功能。方法分别从EMT患者及健康女性的月经血中提取EMT MenSCs(E-MenSCs)和正常MenSCs(H-MenSCs),并借助成脂、成骨诱导分化鉴定其干细胞属性。通过CCK-8法比较E-MenSCs和H-MenSCs在12、24、48、72、96、120 h时刻于波长450 nm的吸光度(A)值,并绘制细胞增殖曲线,比较2组细胞的细胞活力;运用透射电镜观察E-MenSCs与H-MenSCs的细胞形态,检测比较其中自噬体和自噬溶酶体的数量;采用Western blotting法检测E-MenSCs和H-MenSCs中自噬标志物微管相关蛋白轻链3-II(lc3-II)和Beclin1的蛋白表达。结果E-MenSCs和H-MenSCs均为长梭形,呈辐射状扩散,且经成脂、成骨诱导分化后均有脂滴、钙结节形成。与H-MenSCs比较,E-MenSCs在72、96、120 h的细胞活力均显著升高(PLC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达量也显著降低(P<0.05)。结论与H-MenSCs比较,E-MenSCs的自噬功能减弱,这可能是EMT发病进展的潜在机制。

关键词：子宫内膜异位症经血源间充质干细胞自噬自噬体自噬溶酶体 Beclin1 LC3-Ⅱ