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Stereoselective High-Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry Method for Determination of R- and S-Acenocoumarol in Human Plasma and Its Application in a Pharmacokinetics Study

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American Journal of Analytical Chemistry 2015年第3期6卷 216-227页

作者： Isam I. Salem Mahmoud Abdullah Naji Najib International Pharmaceutical Research Center (IPRC) Amman Jordan

A stereoselective, sensitive and rapid liquid chromatography-tandem mass spectrometry (lc-msms) method for the determination of R-acenocoumarol and S-acenocoumarol in human plasma was developed and validated at IPRC bioanalytical labs. The procedure involved solid phase extraction of both enantiomers and their corresponding internal standard. The chromatographic separation was accomplished employing a chiral column and proper mobile phase. Detection was carried out using Waters Micromass®Quattro Premier mass spectrometer in multiple reaction monitoring (MRM) mode using turbo ion spray with negative ionization. The method was validated over a linear range of 0.40 - 40.00 ng/ml for R-acenocoumarol and 0.20 - 20.00 ng/ml for the S-acenocoumarol. Method validation covered different parameters such as linearity, accuracy, precision and stability. The method was successfully applied for the determination of R and S-acenocoumarol in plasma samples of 28 healthy subjects who participated in a pharmacokinetics study.

关键词： Stereoselective Chromatography Mass Spectrometry lc-msms Acenocoumarol Pharmacokinetics

rhIL-12二硫键、N-糖基化位点及C端氨基酸序列分析

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中国生物工程杂志 2014年第5期34卷 39-53页

作者：赵峰张宜俊冉艳红王兴勇叶倩君李弘剑暨南大学生命科学技术学院广州510632 广州市恺泰生物科技有限公司广州510663

重组人白细胞介素12(rhIL-12)是一种已经用于治疗肿瘤,寄生虫、病毒性感染及造血障碍等疾病研究的异二聚体糖蛋白。结构确证是质量控制的重要内容,此研究对CHO细胞表达的rhIL-12二硫键配对方式、N-糖基化位点以及C端氨基酸序列进行了分... 详细信息

重组人白细胞介素12(rhIL-12)是一种已经用于治疗肿瘤,寄生虫、病毒性感染及造血障碍等疾病研究的异二聚体糖蛋白。结构确证是质量控制的重要内容,此研究对CHO细胞表达的rhIL-12二硫键配对方式、N-糖基化位点以及C端氨基酸序列进行了分析,使用Trypsin、Chymotrypsin和Glu-C三种酶分别对rhIL-12进行非还原酶解,尽可能地在其所有半胱氨酸残基之间断裂而形成二硫键相连的肽段,然后使用lc-MS/MS对酶解后的肽段样品进行分析,确定了rhIL-12样品中存在和理论配对方式相符的7对二硫键。将rhIL-12二硫键还原后并烷基化修饰保护,分别采用Trypsin,Chymotrypsin和GluC进行酶解,并用lc-MS/MS对酶解后肽段进行了质谱肽图及C端氨基酸序列分析,确定了rhIL-12 p35亚基C端氨基酸序列的8个氨基酸、p40亚基C端氨基酸序列的15个氨基酸。对rhIL-12样品还原及烷基化后用Trypsin变性酶解,所得肽段在H2O及H218O水中分别用PNGase F糖苷酶处理酶切产物。并通过二级质谱分析脱糖后糖肽段分子量变化,从而确定了rhIL-12的3个N糖基化修饰位点,分别为p35亚基的71位和85位以及p40亚基的200位。通过建立酶解结合二级质谱鉴定的方法,证明了新药rhIL-12的二硫键位点、C端氨基酸序列和糖基化位点与理论一致。

关键词： rhIL-12 二硫键 N-糖基化位点 C端氨基酸序列 lc-msms

N端焦谷氨酸环化封闭类单克隆抗体药物的N端测序方法

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中国生物工程杂志 2013年第8期33卷 73-80页

作者：李明珠韩伟东邢光慧滕珍林薛国梅侯辰瑞阮宏强陈薇中国科学院上海生命科学研究院蛋白质组学分析研究中心上海中科新生命生物科技有限公司上海200233

目的:对于直接用N端测序仪无法进行测序的N端焦谷氨酸环化封闭的抗体类药物,去除焦谷氨酸后实现对其N端序列的从头测序。方法:对抗体的重轻链分别进行N端测序无果,再通过lc-msms对其重轻链N端的焦谷氨酸进行确认,证明其为焦谷氨酸封闭... 详细信息

目的:对于直接用N端测序仪无法进行测序的N端焦谷氨酸环化封闭的抗体类药物,去除焦谷氨酸后实现对其N端序列的从头测序。方法:对抗体的重轻链分别进行N端测序无果,再通过lc-msms对其重轻链N端的焦谷氨酸进行确认,证明其为焦谷氨酸封闭。对抗体蛋白进行焦谷氨酸氨肽酶酶解后,再通过N端测序仪进行Edman降解法N端测序,获得抗体药物重轻链的N端氨基酸序列。结论:抗体药物的重轻链N端经过N端测序仪测序和lc-msms分析,确定均为焦谷氨酸封闭。再经过焦谷氨酸氨肽酶处理后进行N端测序仪从头测序证实抗体药物的N端序列与理论序列一致。

关键词：单克隆抗体焦谷氨酸环化 Edman降解 N端测序 lc-msms

盐酸头孢卡品酯片在中国健康受试者体内的药动学

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医药导报 2014年第3期33卷 299-303页

作者：周文佳张全英黄明华雯妍王蒙宗顺麟俞蕴莉苏州大学附属第二医院临床药理实验室苏州215004

目的研究中国健康受试者单/多次口服盐酸头孢卡品酯片的药动学.方法将30例受试者随机分为3组,每组10例,男女各半,一组进行盐酸头孢卡品酯片低剂量（100 mg）的单/多次给药人体药动学试验,受试者每天服药3次,每次100 mg,一共服药12次;... 详细信息

目的研究中国健康受试者单/多次口服盐酸头孢卡品酯片的药动学.方法将30例受试者随机分为3组,每组10例,男女各半,一组进行盐酸头孢卡品酯片低剂量（100 mg）的单/多次给药人体药动学试验,受试者每天服药3次,每次100 mg,一共服药12次;一组进行盐酸头孢卡品酯片中剂量（200 mg）的单次给药人体药动学试验;一组进行盐酸头孢卡品酯片高剂量（300 mg）的单次给药人体药动学试验.采用高效液相色谱-串联质谱（HPlc-MS/MS）法测定活性代谢产物头孢卡品的血浓度,采用DAS 2.0版软件计算其主要药动学参数,采用SPSS 17.0版软件对主要参数进行统计分析.结果单次空腹口服盐酸头孢卡品酯片100,200和300 mg后主要药动学参数：tmax分别为（1.42±0.54）,（1.80±0.59）和（2.10±0.81） h;t1/2分别为（1.45±0.17）,（1.60±0.22）和（1.44±0.18） h;MRT0-12 h分别为（2.75±0.42）,（2.99±0.33）和（3.31±0.57） h;Cmax分别为（1 419±384）,（2 128±366）和（2 438±655） μg·L-1;AUC0-12 h分别为（4 369±1 078）,（7 477±1 616）和（9 091±3 735） μg·h·L-1;AUC0-∞分别为（4 389±1 080）,（7 528±1 640）和（9 146±3 749） μg·h·L-1;V/F分别为（52.13±21.81）,（63.60±14.78）和（76.06±23.29） L;CL/F分别为（24.27±7.06）,（27.61±5.42）和（36.49±10.31） L·h-1.多次口服盐酸头孢卡品酯片100 mg后主要药动学参数：tmax为（1.90±0.70） h;t1/2为（1.63±0.16） h;MRT0-12 h为（2.87±0.52） h;Cssmax为（1 133±200） μg·L-1;AUCss为（3 607±730） μg·h·L-1;AUC0-12 h为（3 731±775） μg·h·L-1;AUC0-∞为（3 757±785） μg·h·L-1;V/F为（66.15±20.29） L;CL/F为（27.85±6.66） L·h-1,Cssmin为（105.4±57.17） μg·L-1;Cav为（450.9±91.2） μg·L-1;DF为（2.33±0.47）;观察蓄积比Ro为（0.870±0.131）.结论盐酸头孢卡品酯片在剂量为100～300 mg范围内呈线性药动学特征,口服盐酸头孢卡品酯片,每日3次,每次100 mg,未发现蓄积现象.

关键词：头孢卡品酯,盐酸头孢卡品药动学 lc-msms

青虾源维氏气单胞菌胞外产物生物学特性及蛋白成分分析

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中国兽医杂志 2017年第4期53卷 105-107,I0004页

作者：单晓枫张海月孙武文康元环陈龙张冬星安鼎杰田佳鑫钱爱东吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为了研究维氏气单胞菌胞外产物在青虾感染中的致病作用以及维氏气单胞菌的致病机理,本试验以青虾源维氏气单胞菌QXF0711B为研究对象,提取其胞外产物,采用打孔法测定其胞外产物的酶活性,并对溶血活性进行溶血谱分析,同时分析其致病性。... 详细信息

为了研究维氏气单胞菌胞外产物在青虾感染中的致病作用以及维氏气单胞菌的致病机理,本试验以青虾源维氏气单胞菌QXF0711B为研究对象,提取其胞外产物,采用打孔法测定其胞外产物的酶活性,并对溶血活性进行溶血谱分析,同时分析其致病性。应用液相质谱与串联质谱相结合方法(lc-msms)对其胞外产物蛋白成分进行鉴定,利用Gene Ontology(GO)对已鉴定蛋白进行生物学过程、分子功能和细胞组分的分类分析。结果表明:QXF0711B菌株胞外产物具有淀粉酶活性、脂肪酶活性、蛋白酶活性和溶血活性,不具有明胶酶活性;其可溶解多种动物红细胞,尤以对鱼类红细胞溶血性更强,但对鸡、鸭红细胞无溶血活性。通过对菌株胞外产物蛋白成分分析显示有90种蛋白:共参与45种生物学过程,主要涉及碳水化合物代谢过程、运输等;共有46种分子功能,主要涉及DNA结合、ATP结合、金属离子结合等;为12种细胞组分,主要包括膜的有机组成、细胞质、细胞外膜等。

关键词：维氏气单胞菌胞外产物酶活 lc-msms GO分类分析

喂食槲皮素对Ⅰ型糖尿病大鼠的生化及血浆代谢组学研究

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现代生物医学进展 2024年第8期24卷 1418-1427页

作者：宋晨萌饶小平陈程陈洁舒心姚政源福建医科大学公共卫生学院福建福州350122 厦门医学院机能与临床转化福建省高校重点实验室福建厦门361023 厦门医学院基础医学部福建厦门361023 厦门医学院药学系福建厦门361023

目的:探究喂食槲皮素对链脲佐菌素诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠的治疗效果及引起的代谢通路变化。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg建立Ⅰ型糖尿病大鼠模型,随机分为模型(T1DM)组、槲皮素低剂量(T1DM+QUE(25))组、槲皮素高剂量(T1DM+QUE(5... 详细信息

目的:探究喂食槲皮素对链脲佐菌素诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠的治疗效果及引起的代谢通路变化。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg建立Ⅰ型糖尿病大鼠模型,随机分为模型(T1DM)组、槲皮素低剂量(T1DM+QUE(25))组、槲皮素高剂量(T1DM+QUE(50))组。治疗组给予相应浓度的槲皮素(mg/kg),正常对照组(Normal)与T1DM组给予与治疗组相应体积的空白溶剂,持续喂养8周后收集血样进行乙酰乙酸、糖化血红蛋白、丙氨酸氨基转移酶、血脂等检测,收集肌肉组织样品检测糖原合成酶水平。并以lc-msms进行血浆代谢组学分析。结果:与T1DM组相比,T1DM+QUE(50)组血浆中的乙酰乙酸、天门冬氨酸氨基转移酶水平显著降低(P<0.05),脂蛋白脂酶、总抗氧化能力水平显著上升(P<0.05),其水平相较T1DM组更接近Normal组,而糖化血红蛋白、丙氨酸氨基转移酶、低密度脂蛋白、总胆固醇水平也有一定改善,但不显著;肌肉中的糖原合成酶蛋白表达亦有显著改善(P<0.05)。代谢组学分析结果显示槲皮素喂食主要干预鞘脂的代谢与合成、类固醇激素生物合成、视黄醇代谢、花生四烯酸代谢等代谢通路。结论:槲皮素喂食可改善Ⅰ型糖尿病大鼠脂质及胆固醇代谢,缓解肝损伤,通过影响脂质代谢及调节炎症相关通路而达到一定的治疗效果。

关键词：槲皮素 Ⅰ型糖尿病代谢组学 lc-msms

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超临界流体色谱在油脂样品检测中的应用

超临界流体色谱在油脂样品检测中的应用

2018年中国质谱学术大会（CMSC2018）

作者：郭彦丽滨田尚树张琳八卷聪端裕树冀峰李月琪李海芳林金明岛津企业管理(中国)有限公司质谱中心岛津企业管理(中国)有限公司分析中心清华大学化学系

针对油脂的分析,对于基质相对简单,杂质较少的样品,通常使用正相色谱进行直接分析1。然而,针对基质较复杂,或者杂质较多的油脂样品的分析,需要先在正相色谱下进行净化制备,再使用反相色谱进行分析1-2。无论是哪种分析手段,都需要使用大... 详细信息

针对油脂的分析,对于基质相对简单,杂质较少的样品,通常使用正相色谱进行直接分析1。然而,针对基质较复杂,或者杂质较多的油脂样品的分析,需要先在正相色谱下进行净化制备,再使用反相色谱进行分析1-2。无论是哪种分析手段,都需要使用大量有机溶剂,并且,复杂样品分析时,前处理过程繁琐,耗时,且回收率不稳定。针对以上问题,利用超临界二氧化碳流体色谱的分离保留行为接近于正相色谱这一性质,本实验室开发了超临界流体色谱(SFC)与反相液相(L)/液质质(lcmsms)联用的多维柱切换系统3。首先,通过方法文件控制高压六通阀的切换位置,可以实现SFC与SFC-lc两种工作模式的自动转换,在SFC工作模式下,可以实现基质简单,杂质较少油脂样品的分析。而在SFC-lc模式下,先利用SFC对油脂样品进行在线净化,在初步去除了油脂之后,将待测目标化合物导入第二维的反相液相或者液质质系统,实现进一步的分离和检测。使用该系统,我们分别进行了植物油当中的维生素D3和苯并芘的测定,检测器分别使用了质谱检测器、二极管阵列检测器以及荧光检测器。并且,通过对维生素D3滴剂的测定,我们对该系统和方法进行了验证,得到了良好的重复性和回收率的结果,并且实现了准确的定量。综上所述,使用该系统大大简化了油脂类样品的前处理过程,实现了油脂样品的快速自动化分析。并且,通过超临界二氧化碳流体的使用,大大减少有机溶剂的使用,为油脂样品的检测提供了一种安全环保的解决方案。

关键词：油脂样品超临界流体色谱柱切换系统 lc-msms

来源： cnki会议评论

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啶酰菌胺在番茄和土壤中残留分析方法研究

农药科学与管理 2015年第8期36卷 37-41页

作者：黄兰淇占绣萍马琳上海市农业技术推广服务中心上海201103

建立了番茄和土壤中啶酰菌胺残留量的高效液相色谱一串联质谱检测方法。样品中加入乙腈,分别采用匀浆和机械振荡2种提取方式。无需净化直接过膜上机。以甲醇和水(含0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI^+)模式电离,多反应监测(M... 详细信息

建立了番茄和土壤中啶酰菌胺残留量的高效液相色谱一串联质谱检测方法。样品中加入乙腈,分别采用匀浆和机械振荡2种提取方式。无需净化直接过膜上机。以甲醇和水(含0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI^+)模式电离,多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。啶酰茵胺在0.005~1.5mg/L范围内线性关系良好,相关系数(r)≥0.999 0;番茄中啶酰茵胺回收率为95.16%~117.68%,变异系数为2.74%~4.11%:土壤中啶酰茵胺回收率为97.65%~108.67%,变异系数为2.70%~4.52%。最小检出量为2×10^(-11)g,最小检出浓度为0.01mg/L。该方法操作简单,快速准确,满足农药残留分析要求。

关键词：啶酰菌胺番茄土壤残留 lc-msms