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探讨lc-ms技术在快速发现和鉴定药物有关物质及代谢产物中的应用

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药学进展 2007年第8期31卷 358-363页

作者：王雷娜景士云宋敏杭太俊姜红文红梅张正行中国药科大学药物分析教研室江苏南京210009 哈药集团制药总厂黑龙江哈尔滨150046 南京中医药大学中医药研究院江苏南京210029

探讨lc-ms技术在快速发现和鉴定药物的微量有关物质及代谢产物中的应用,简述lc-ms技术应用原理,介绍lc-ms技术用于药物有关物质和代谢产物快速发现与鉴定的典型实例。

关键词： lc-ms技术药物有关物质代谢产物发现鉴定

基于lc-ms技术的定量代谢组学分析方法研究

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基于LC-MS技术的定量代谢组学分析方法研究

木兰科8种植物和菊科23种植物叶片中小白菊内酯含量比较

中国化学会第22届全国色谱学术报告会及仪器展览会

作者：陈艳华周帜高杨蒲倩伦贺玖明张瑞萍再帕尔·阿不力孜中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室中央民族大学生物成像与系统生物学研究中心

＜正＞由于代谢组中的代谢物覆盖范围广、丰度差异大、结构类型和化学性质各异,因此建立其定量分析方法是实现代谢组学标准化亟需解决的难点问题。目前,常用的定量代谢组学分析方法包括同位素标记的衍生化方式或者代谢方式,以及非标记... 详细信息

＜正＞由于代谢组中的代谢物覆盖范围广、丰度差异大、结构类型和化学性质各异,因此建立其定量分析方法是实现代谢组学标准化亟需解决的难点问题。目前,常用的定量代谢组学分析方法包括同位素标记的衍生化方式或者代谢方式,以及非标记的分析方法。而同位素标记的分析方法难以实现对整体代谢组的定量分析。本课题组针对上述难点问题,

关键词：代谢组学定量分析 lc-ms技术

来源： cnki会议评论

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植物资源与环境学报 2022年第2期31卷 85-87页

作者：周倩乔思薇印敏田梅王奇志佟海英徐曙冯煦江苏省中国科学院植物研究所(南京中山植物园):江苏省植物资源研究与利用重点实验室江苏南京210014 江苏省中国科学院植物研究所(南京中山植物园)江苏省中药材生态种植与高值化利用工程研究中心江苏南京210014

采用液质联用(lc-ms)技术对木兰科(Magnoliaceae)8种植物和菊科(Asteraceae)23种植物叶片中小白菊内酯含量进行了测定。结果显示:木兰科8种植物叶片中小白菊内酯含量为20.90~3498.31μg·g^(-1),其中,荷花木兰(Magnolia grandiflora Lin... 详细信息

采用液质联用(lc-ms)技术对木兰科(Magnoliaceae)8种植物和菊科(Asteraceae)23种植物叶片中小白菊内酯含量进行了测定。结果显示:木兰科8种植物叶片中小白菊内酯含量为20.90~3498.31μg·g^(-1),其中,荷花木兰(Magnolia grandiflora Linn.)叶片中小白菊内酯含量最高,厚朴〔Houpoea officinalis(Rehd.et E.H.Wils.)N.H.Xia et C.Y.Wu〕次之(715.00μg·g^(-1))。在供试的23种菊科植物中,仅14种的叶片中可检测出小白菊内酯,含量为1.23~236.03μg·g^(-1);其中,泥胡菜〔Hemisteptia lyrata(Bunge)Fisch.et C.A.Mey.〕和奇蒿(Artemisia anomala S.Moore)叶片中小白菊内酯含量显著高于其他种类。考虑到小白菊内酯含量及资源量,将厚朴作为小白菊内酯的原料植物较为适宜。

关键词：木兰科菊科小白菊内酯 lc-ms技术

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一株甲基营养型芽孢杆菌抑菌活性物质鉴定

中国调味品 2020年第9期45卷 5-10页

作者：王蕊胡辉帆陈文兰张强刘变芳西北农林科技大学食品科学与工程学院陕西咸阳712100

为研究一株甲基营养型芽孢杆菌拮抗特性及其抑菌活性物质,试验采用牛津杯法和平板对峙培养法,研究甲基营养型芽孢杆菌BFWR11对真菌的生物拮抗作用,分别采用酸沉淀、正丁醇萃取、硫酸铵沉淀从发酵上清液中提取脂肽、有机酸和粗蛋白,并基... 详细信息

为研究一株甲基营养型芽孢杆菌拮抗特性及其抑菌活性物质,试验采用牛津杯法和平板对峙培养法,研究甲基营养型芽孢杆菌BFWR11对真菌的生物拮抗作用,分别采用酸沉淀、正丁醇萃取、硫酸铵沉淀从发酵上清液中提取脂肽、有机酸和粗蛋白,并基于代谢组学技术对其抑菌活性代谢产物进行了分析鉴定。甲基营养型芽孢杆菌BFWR11对赤霉菌、灰霉菌、黑曲霉菌均有明显的拮抗作用,发酵液及其不同提取物也表现出一定的抑制作用。正丁醇萃取物中分离鉴定到棕榈酸、阿扎胞苷、3-羟基苯甲酸、肉豆蔻酸、水杨酸等主要抑菌相关物质,粗蛋白提取物中分离鉴定出表面活性素合成酶亚基、聚酮合成酶、鞭毛相关蛋白等抑菌蛋白相关物质。甲基营养型芽孢杆菌BFWR11繁殖活力强,对真菌有显著的抑制作用。BFWR11菌株在LB肉汤中可产生多种抑菌活性物质进行协同抑菌,在食品加工及生物防治领域具有一定的应用价值。

关键词：甲基营养型芽孢杆菌抑菌活性物质鉴定 lc-ms技术食品加工

基于菌群-宿主共代谢的慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证代谢组学研究

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基于菌群-宿主共代谢的慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证代谢组学研究

作者：朱春梅上海中医药大学

学位级别：硕士

目的:慢性萎缩性胃炎（CAG）是消化系统常见的疑难病症,被世界卫生组织（WHO）列为胃癌的癌前状态,脾胃湿热证是临床最常见的实证。代谢组学的出现从人体代谢物的角度对中医证候的客观化研究带来了新的曙光。本研究运用液相色谱-质谱联... 详细信息

目的:慢性萎缩性胃炎（CAG）是消化系统常见的疑难病症,被世界卫生组织（WHO）列为胃癌的癌前状态,脾胃湿热证是临床最常见的实证。代谢组学的出现从人体代谢物的角度对中医证候的客观化研究带来了新的曙光。本研究运用液相色谱-质谱联用技术（lc-ms）及多种统计学方法,寻找CAG脾胃湿热证证候的差异代谢物,并与课题组前期脾胃湿热证肠道菌群特征进行关联,为CAG脾胃湿热证的生物学基础阐释提供参考,为脾胃湿热证的微观诊断提供依据。方法:基于lc-ms技术对CAG脾胃湿热证和脾胃虚寒证及健康对照组的粪便样本进行检测,然后运用主成分分析（PCA）、偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）、正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）和置换检验等统计学分析方法筛选出差异代谢物。最后使用KEGG数据库等进行代谢通路分析。结果:本研究运用lc-ms技术检测111例粪便样本,寻找CAG脾胃湿热证证候的差异代谢物,得到结果如下:（1）CAG脾胃湿热证组与健康对照组比较,CAG脾胃湿热证组水平下调的差异代谢物有14个,分别是3-甲基-2-氧代戊酸、α-酮异戊酸、吲哚丙烯酸等。CAG脾胃湿热证组水平上调的差异代谢物有15个,分别是棕榈油酸、十五烷酸、丙酸等。（2）CAG脾胃湿热证组与CAG脾胃虚寒证组比较,CAG脾胃湿热证组水平下调的差异代谢物有11个,分别为3-甲基-2-氧代戊酸、α-酮异戊酸、苯甲酸等。CAG脾胃湿热证组水平上调的差异代谢物有11个,分别为肌氨酸、γ-氨基丁酸、丙酸等。结论:（1）发现L-苹果酸、α-酮异戊酸等31个差异代谢物参与了CAG的发生、发展,有可能成为CAG早期诊断的生物学标志物。（2）CAG脾胃湿热证患者发生了氨基酸代谢、糖脂代谢的异常,在一定程度上揭示了CAG脾胃湿热证的形成机制。其中糖脂代谢的异常与肌氨酸含量的升高可能与CAG脾胃湿热证腻苔、黄苔的形成有关。（3）丙酸可能为判别CAG脾胃湿热证的潜在重要生物标记物。

关键词：慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证 lc-ms技术代谢组学

基于lc-ms急性发作期儿童支气管哮喘血浆生物标记物研究

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基于LC-MS急性发作期儿童支气管哮喘血浆生物标记物研究

作者：孙益遵义医学院

学位级别：硕士

目的:利用代谢组学lc-ms技术分析儿童支气管哮喘急性发作期血浆中生物标记物变化,从代谢通路角度探讨支气管哮喘发病机制;分析儿童支气管哮喘急性发作期寒哮与热哮患儿血浆中生物标记物变化,从代谢通路变化的角度探讨急性发作期儿童支... 详细信息

目的:利用代谢组学lc-ms技术分析儿童支气管哮喘急性发作期血浆中生物标记物变化,从代谢通路角度探讨支气管哮喘发病机制;分析儿童支气管哮喘急性发作期寒哮与热哮患儿血浆中生物标记物变化,从代谢通路变化的角度探讨急性发作期儿童支气管哮喘生物标记物。方法:本实验分为支气管哮喘组与正常对照组,通过收集支气管哮喘寒哮组患儿48例、热哮组患儿14例、正常组30例儿童血浆样本,采用液相色谱-质谱联用技术(lc-ms)检测血浆样本中的代谢物质,利用主成分分析法及偏最小二乘-判别分析法对产生的矩阵数据进行分析,筛选出支气管哮喘儿童与正常对照组、支气管哮喘寒哮组与热哮组血浆样本差异性代谢物质,并使MetaboAnalyst平台分析可能存在的代谢通路。结果:各组间可良好区分,筛选出差异性代谢物及代谢通路。(1)急性发作期支气管哮喘儿童与正常对照组血浆样本可明显区分,寒哮组与正常对照组相比,正负离子模式下分别有33及17种差异性代谢物,热哮组与正常对照组正负离子模式下分别有34及16种代谢物具有差异。(2)比较实验组与正常组,发现可能存在的代谢通路与支气管哮喘发病机制有关,包括:鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、花生四烯酸代谢通路、视黄醇代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、磷酸肌醇代谢、甘氨酸,丝氨酸和苏氨酸代谢、缬氨酸,亮氨酸,异亮氨酸代谢、牛磺酸代谢。(3)支气管哮喘急性发作期寒哮组与热哮组相比较,可筛选出差异性的18种代谢物质,并得出可能存在相关的2条代谢通路,分别为甘油磷脂代谢通路和花生四烯酸代谢通路。结论:支气管哮喘发作期儿童与正常对照组血浆代谢物具有明显差异,可能与支气管哮喘发病机制有关;支气管哮喘发作期寒哮组与热哮组血浆样本生物标记物及代谢通路的差异性,可揭示儿童支气管哮喘的病证关系。

关键词： lc-ms技术儿童支气管哮喘生物标记物中医学

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复方柴归方提取工艺及质量标准研究

复方柴归方提取工艺及质量标准研究

作者：沈小丽山西大学

学位级别：硕士

选题依据:抑郁症是一种精神障碍性疾病,其病因复杂并且涉及到人体的多个系统,有时会危及生命。目前临床治疗药物以化药为主,主要包括三环类抗抑郁药(阿米替林)、选择性的5-HT再摄取抑制剂(盐酸氟西汀)、5-HT和NE双重再摄取抑制剂(文拉法... 详细信息

选题依据:抑郁症是一种精神障碍性疾病,其病因复杂并且涉及到人体的多个系统,有时会危及生命。目前临床治疗药物以化药为主,主要包括三环类抗抑郁药(阿米替林)、选择性的5-HT再摄取抑制剂(盐酸氟西汀)、5-HT和NE双重再摄取抑制剂(文拉法辛)等,这些药物在治疗抑郁症中发挥了重要的作用,但是药物的有效率并不高(不足70%),且起效慢,不良反应较重,复发率较高,药品价格比较昂贵。目前市场上已经有治疗抑郁症的中成药,但效果不如化药,化学物成分类繁多,且活性成分和作用机制模糊不清。综上所述,目前市场上尚无疗效优、副作用小,价格便宜的药。本课题依据有抗抑郁作用的逍遥散通过化学成分分析和临床试验观察以及药效学验证对处方进行筛选,化裁出复方柴归方(由柴胡、当归、炒白术、白芍、薄荷、炙甘草组成),并进行系统而完善的提取工艺、化学成分与质量标准、药效与毒理、药理作用机制等研究,旨在研发出抗抑郁作用更强、机制相对清楚、质量更稳定可控、安全性良好,顺应性佳的现代中药新药。本研究得到复方柴归方提取物的最佳提取工艺;同时进行了中试样本制备,定性鉴别了化学成分,建立了质量标准,进一步探讨了影响提取物稳定性的因素。目的:为得到较纯的活性物质,依据药材和活性成分的理化性质确定了复方柴归方的提取工艺,试制了3批中试样本,定性鉴别了其化学成分,建立了质量标准,初步考察了影响稳定性的因素。方法:采用化学分析与药效学相结合筛选出最佳提取工艺路线,以提取物中柴胡皂苷d、白术内酯Ⅲ和芍药苷为指标优化工艺参数,应用lc-ms技术分析提取物化学成分,按照中药质量标准的要求建立提取物的质量标准;采用影响因素试验进行稳定性影响因素考察。结果:1.筛选出复方柴归方最佳提取工艺路线,即以处方比例的药材全部乙醇提取2次,浓缩干燥乙醇提取液得到醇提物;剩余药渣继续水提取2次,醇沉,浓缩干燥上清液即得水提醇沉物;混合醇提物和水提醇沉物即得。2.得到了复方柴归方的最佳提取工艺:处方比例药材加8倍量的85%乙醇,提取2次,每次2 h,回收乙醇,减压浓缩至干燥;剩余药渣继续加8倍量水提取2次,每次2 h,水提液浓缩到相对密度为1.10 g/mL时,慢慢加入无水乙醇搅拌使醇沉浓度为50%,静置48 h,回收乙醇,减压浓缩至干燥;混合醇提物和水提醇沉物。3.试制了 3批中试样本,并用lc-ms技术指认了提取物的72个化合物。4.建立了当归和甘草的薄层鉴别,建立了 UPlc-PDA指纹图谱方法,并对柴胡皂苷d、芍药苷和白术内酯Ⅲ进行了含量控制。5.考察了复方柴归方提取物的影响因素,为辅料和包材选择等制剂研究奠定了基础,也为制剂稳定性研究提供依据。结论:获得了最佳提取工艺,并试制了中试样本,体现了该工艺稳定和可行。建立了提取物化学成分的系统分析方法。建立了质量标准体系,并初步考察了影响其稳定性的因素,为复方柴归抗抑郁新药的制剂研究开发奠定了基础。

关键词：复方柴归方工艺研究 lc-ms技术质量标准研究初步稳定性研究

柴胡—白芍配伍药对的化学分析及其对逍遥散的贡献研究

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柴胡—白芍配伍药对的化学分析及其对逍遥散的贡献研究

作者：贺晶山西大学

学位级别：硕士

选题依据:本课题组对抗抑郁经典名方逍遥散的药效及机制进行了大量研究。但是逍遥散由8味药材组成,其配伍的科学内涵尚不明确,特别是配伍的化学成分复杂,变化规律更不清楚,而阐明中药复方的配伍内涵是中药现代研究的重要任务。药对作为... 详细信息

选题依据:本课题组对抗抑郁经典名方逍遥散的药效及机制进行了大量研究。但是逍遥散由8味药材组成,其配伍的科学内涵尚不明确,特别是配伍的化学成分复杂,变化规律更不清楚,而阐明中药复方的配伍内涵是中药现代研究的重要任务。药对作为中药配伍基本单元和最为常见形式,可揭示复方配伍的规律。因此,以药对为切入点,探究复方配伍规律,可以揭示方剂配伍的理论依据,以及为探究复方配伍规律提供借鉴和依据。逍遥散中的配伍药对有柴胡-白芍、柴胡-薄荷、当归-白芍、白术-茯苓。而柴胡-白芍作为疏肝养肝最基本的散收配伍药对,为多个抗抑郁作用明确的复方如逍遥散、柴胡舒肝散、四逆散等的核心药物。柴胡疏肝解郁,白芍养血柔肝。二药伍用,相互促进,相互依赖,行疏肝气,补充肝血。目前研究者对柴胡、白芍合用后化学成分的变化也做了一些研究,发现二者共煎后能使白芍中有效成分芍药苷煎出量明显提高及有毒成分苯甲酸煎出量明显降低。然而二者合煎后对整体化学成分煎出量的变化情况尚不明确。柴胡白芍配伍前后化学成分的变化是其配伍协同增效的物质基础,其配伍的化学机制是研究二者配伍药理机制的切入点。因此,本文着重研究柴胡白芍药对配伍的化学机制及其柴胡、白芍对复方逍遥散的贡献。目的:(1)对柴胡-白芍药对配伍前后化学成分的整体变化进行分析,揭示二者配伍协同增效的物质基础。(2)对柴胡-白芍药对和逍遥散复方的化学成分进行比较分析,阐明该药对在复方抗抑郁作用中核心地位的现代科学内涵。方法:(1)采用UPlc-ms/ms法分别分析柴胡、白芍水提物及醇提物的化学成分。(2)采用植物代谢组学思路结合质谱技术中的背景扣除法(BSA)全面分析柴胡(白芍)单提和共提乙醇提取物含量差异较大的化学成分。(3)采用UPlc-ms/ms法分析复方逍遥散水提物的化学成分,并结合柴胡、白芍表征的化学成分对逍遥散化学成分进行归属。结果:(1)采用UPlc-ESI-Q/exactive orbitrap技术,分析柴胡、白芍水提物及醇提物的化学成分。结果柴胡水提物中检测出70个峰,鉴定了31个化合物;柴胡醇提物中检测出42个峰,鉴定了14个化合物。白芍水提物中检测出60个峰,鉴定了43个化合物;白芍醇提物中检测出34个峰,鉴定了20个化合物。(2)采用代谢组学技术结合UPlc-ms/ms背景扣除法,分析柴胡-白芍药对配伍前后乙醇提取物体外化学成分的整体差异情况。结果显示:柴胡-白芍药对配伍后含量升高的成分有柴胡中的峰14、峰20、峰21、峰56,白芍中的芍药苷、没食子酰基芍药苷或其异构体、峰15、峰16;柴胡-白芍药对配伍后含量降低的成分有柴胡中的柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、峰41、2’’-O-乙酰化柴胡皂苷a、3’’-O-乙酰化柴胡皂苷a、4’’-O-乙酰化柴胡皂苷a、峰53、峰54、峰55、峰57,白芍中的峰10。(3)采用UPlc-ESI-Q/exactive orbitrap技术对逍遥散中来源于柴胡、白芍的化学成分进行归属,在正离子模式下,逍遥散样品中的77个色谱峰,30个来自白芍,27个来自柴胡;在负离子模式下,逍遥散样品中的86个色谱峰,35个来自白芍,18个来自柴胡。结论:(1)本论文首次建立了代谢组学技术结合UPlc-ms/ms质谱背景扣除法分析柴胡-白芍药对配伍前后整体化学成分变化的方法,为阐明柴胡-白芍抗抑郁药对的配伍机制奠定基础。(2)采用UPlc-ms/ms分析逍遥散中核心药对柴胡-白芍对复方的化学成分贡献,为阐明逍遥散的抗抑郁物质基础及配伍规律奠定基础。

关键词：柴胡-白芍配伍 lc-ms技术化学成分

基于液相色谱-质谱联用的血清代谢组学在中医上火研究中的应用

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浙江中医药大学学报 2018年第10期42卷 769-774页

作者：吴德鸿周佳李倩倩谭祖教范永升浙江中医药大学附属第二医院杭州310005 浙江中医药大学基础医学院

[目的]利用代谢组学表征上火人群血清代谢组的特异性变化,为进一步探索上火的发病机制提供参考依据。[方法]采集30例上火和24例非上火人群血清样本,采用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,lc-ms)技术对血清中... 详细信息

[目的]利用代谢组学表征上火人群血清代谢组的特异性变化,为进一步探索上火的发病机制提供参考依据。[方法]采集30例上火和24例非上火人群血清样本,采用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,lc-ms)技术对血清中代谢物进行检测,并结合正交信号校正-偏最小二乘法判别分析(orthogonal signal correction-partial least squares discriminant analysis,OSC-PLS DA)和t检验挖掘上火后发生显著变化的血清代谢物,进一步进行结构鉴定,解释上火状态下的人体代谢变化的病理生理机制。[结果]结合单变量和多变量统计分析手段筛选出上火与非上火人群中存在显著差异的代谢物,部分代谢物结构已经确认,主要是脂类物质,包括2种磷脂酰胆碱(34:1和38:7)、2种溶血磷脂酰胆碱(18:1和16:0)、1种磷脂酰乙醇胺(34:2)、1种溶血磷脂酰乙醇胺(18:2)、2种鞘脂(44:2和40:2)、1种甘油三酯(53:3)及胆红素等。[结论]利用lc-ms技术从整体水平上探讨上火人群血清代谢谱的变化,发现多种脂质和胆红素有一定程度地下降,可能与上火人群体内炎性反应和氧化应激的发生有关。

关键词：上火血清 lc-ms技术代谢组学脂质正交信号校正-偏最小二乘法判别分析