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lamp法在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

河南农业科学 2005年第8期34卷 91-94页

作者：淮亚红辛晓玲昝林森施巧婷茹彩霞徐照学西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 河南省农业科学院生物技术研究所河南郑州450002

对lamp试剂盒的准确性、特异性和灵敏度进行鉴定,同时对11枚体外胚胎和38枚体内胚胎进行性别鉴定。结果表明:血样DNA的鉴定结果与实际性别吻合;lamp试剂盒的灵敏度很高,且只对牛有特异性;对胚胎样品的鉴定结果与实际性别吻合。

关键词：牛早期胚胎性别鉴定 lamp法

湖南省奶牛乳房炎主要病原菌分离与lamp法快速检测的建立

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湖南省奶牛乳房炎主要病原菌分离与LAMP法快速检测的建立

作者：田唯嘉湖南农业大学

学位级别：硕士

奶牛乳房炎是奶牛养殖中一种发病率和感染率较高的疾病,其中病原微生物感染是其主要致病原因。湖南省地处中南,湿热气候限制了其奶牛的规模养殖,对于相关奶牛疫病防控的资料相对较少。为探明湖南省规模化奶牛场中乳房炎主要病原菌的种类... 详细信息

奶牛乳房炎是奶牛养殖中一种发病率和感染率较高的疾病,其中病原微生物感染是其主要致病原因。湖南省地处中南,湿热气候限制了其奶牛的规模养殖,对于相关奶牛疫病防控的资料相对较少。为探明湖南省规模化奶牛场中乳房炎主要病原菌的种类,本论文基于湖南省畜牧兽医研究所奶牛生产性能测定中心(DHI)提供的数据,从湖南省4个规模化养殖场中采集乳房炎奶样开展病原菌的分离与鉴定,并对主要优势菌进行了耐药性检测;为了使基层单位及时、快速并准确地监控奶牛乳房炎的发生,本论文进一步结合小型动物疫病检测仪的配套使用,针对分离的主要病原菌建立了相应的环介导等温扩增技术(lamp)检测方法,旨在为湖南省奶牛乳房炎的防控提供科学依据。通过对DHI数据分析,从4个奶牛场共获得77份体细胞超过50万个/m L的奶样,经过病原菌的分离培养、革兰氏染色、PCR扩增及16S r DNA的测序,共鉴定获得37种162株病原菌,其中A、B、C和D奶牛场中分别分离出24、29、48和61株病原菌;测序结果发现,分离的主要病原菌为金黄色葡萄球菌(25.31%,41株)、松鼠葡萄球菌(20.37%,33株)、地衣芽孢杆菌(5.56%,9株)、大肠杆菌(5.56%,9株)和肺炎克雷伯菌(4.32%,7株);此外,日勾维多细菌源菌、蜡状芽孢杆菌、腐生葡萄球菌、短小芽孢杆菌、棒状杆菌和溶血葡萄球菌也各有4株(2.47%)。分析各养殖场感染情况发现4个奶牛场中均有金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的感染,而松鼠葡萄球菌和肺炎克雷伯菌只在D奶牛场的乳房炎奶样中检出;其他病原菌在各牛场的感染情况存在一定差异。同时,本研究采用药敏纸片法对感染率较高的3种病原菌(包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌)进行了药物敏感性检测,结果显示3种主要病原菌均对阿莫西林有较强耐药性,对庆大霉素和环丙沙星较敏感。针对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌所建立的lamp快速检测方法显示,与普通PCR检测法比,可视化的lamp技术灵敏性高,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌的最低核酸检测量分别是5×10ng、5×10ng和5×10ng,比普通PCR低3-4个数量级;且30 min内通过观察扩增曲线即可判定结果,该方法操作简便,适于临床实践中大批量样品的快速检测。本研究表明,湖南省规模化奶牛场乳房炎奶样中主要病原菌为金黄色葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、地衣芽孢杆菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌;配套使用小型动物疫病检测仪初步建立的lamp检测法可实现奶牛乳房炎主要病原菌的快速诊断。

关键词：奶牛乳房炎病原菌分离与鉴定 lamp法湖南省

银川地区宠物源MRSA外排泵分子特征分析及可视化lamp法的建立

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银川地区宠物源MRSA外排泵分子特征分析及可视化LAMP法的建立

作者：马靓宁夏大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌是常见的人畜共患病病原体,存在于各种环境中,极具传播性。在过去的数十年中,随着青霉素的广泛使用,出现了由染色体介导或质粒介导的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),可产生青霉素酶,能水解β-内酰胺环,表现为对青霉素类... 详细信息

金黄色葡萄球菌是常见的人畜共患病病原体,存在于各种环境中,极具传播性。在过去的数十年中,随着青霉素的广泛使用,出现了由染色体介导或质粒介导的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),可产生青霉素酶,能水解β-内酰胺环,表现为对青霉素类药物的耐药。现已成为能够引起严重疾病的病原体。因此,研究银川地区宠物源MRSA的耐药情况及其耐药机制,对预防和治疗金黄色葡萄球菌引起的感染和临床合理使用抗菌药物具有重要意义。1.采集2019-2020年间宁夏银川地区部分宠物医院宠物犬猫鼻腔拭子,通过金黄色葡萄球菌显色培养基、三重PCR扩增金黄色葡萄球菌和MRSA特异性基因的方法进行金黄色葡萄球菌和MRSA的鉴定。结果共鉴定出239株金黄色葡萄球菌,其中51株为MRSA,检出率为21.34%。2.根据美国临床实验室标准委员会(CLSI,2019)推荐的药敏纸片琼脂扩散法(K-B法)对51株MRSA进行16种抗菌药物的药敏试验。结果显示,MRSA对磺胺异噁唑的耐药率最高,达到了 94.12%;其次是红霉素,为86.27%;对四环素、多西环素、克林霉素及β-内酰胺类药物的耐药率均在60%以上。对万古霉素、利奈唑胺全部敏感。MRSA多药耐药现象极为严重,多药耐药率为96.07%,分离菌株最多对14种抗菌药物产生了耐药性。3.采用PCR法对四环素类药物的耐药基因进行检测,并选取外排泵抑制剂利血平进行外排泵抑制试验;结合生物信息学及分子模拟技术对外排泵蛋白进行分析。结果显示,外排泵基因tetK检出率达到了 54.90%,且该基因的存在与耐药表型呈现一定正相关;进化分析可知,检出的tetK基因与Staphylococcus aureus UP03,JY22及Staphylococcus sciuri wo19-3携带基因的亲缘关系最近;分子对接发现,四环素,多西环素和利血平均能与TetK蛋白结合成稳定复合物。利血平具有最低的结合自由能,可抑制外排蛋白对于四环素和多西环素的摄取外排。4.通过lamp预试验确定重要反应条件,对其进行优化,并验证其特异性与灵敏度。在此基础上通过添加HNB染料来达到可视化以省去凝胶电泳的目的。优化后的lamp反应体系为:FIP、BIP 16 μM,F3、B3 2 μM,LF,LB 4 μM,共 2.5 μL,Warmstart lamp 2×Master Mix12.5 μL,HNB 染料 1.0μL,待检细菌 DNA1.0 μL,补充 ddH20 至 25μL。65℃反应 30分钟。使用可视化lamp法对生物被膜形成相关基因进行检测,结果发现icaA基因的检出率为26.14%,fnbB基因的检出率为62.35%。该方法应用于金黄色葡萄球菌及生物被膜形成相关基因的检验中,可以提高现有检测方法的速度、准确性和敏感性。综上所述,本研究通过对银川地区部分宠物源MRSA进行分离鉴定、耐药性分析及耐药基因的检测,结合生物信息学技术分析外排泵蛋白特征与耐药性的关系;构建可视化lamp法快速检测金黄色葡萄球菌及生物被膜形成相关基因。为阐明金黄色葡萄球菌耐药机制与金黄色葡萄球菌的防控奠定了基础。

关键词：金黄色葡萄球菌耐药基因外排泵分子特征 lamp法

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lamp法鉴定奶牛早期胚胎性别的效果研究

家畜生态学报 2005年第1期26卷 20-22页

作者：黄金明熊杰柳尧波游伟山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东济南250100

　本试验利用lamp法对28枚鲜胚进行了性别鉴定,将其中13枚雌性胚和3枚雄性胚胎给受体牛移植,妊娠率达45.5%,性别鉴定的准确率为100%。说明lamp法用于奶牛早期胚胎性别鉴定是切实可行的。

关键词： lamp法奶牛性别鉴定胚胎移植早期鉴定

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lamp法鉴定胚胎性别在生产中的应用

养殖与饲料 2004年第8期3卷 12-14页

作者：黄河李鑫山东青岛六和牧业发展有限公司青岛266225

家畜的性别控制(Sex Control)目前主要从两方面进行研究,一方面是分离X与Y精子,以此决定受精时后代的性别;另一方面是通过鉴定胚胎的性别,以控制出生后代的性别比.性别控制一直是生物科学研究领域一项重要课题,对畜牧业生产有着非常重... 详细信息

家畜的性别控制(Sex Control)目前主要从两方面进行研究,一方面是分离X与Y精子,以此决定受精时后代的性别;另一方面是通过鉴定胚胎的性别,以控制出生后代的性别比.性别控制一直是生物科学研究领域一项重要课题,对畜牧业生产有着非常重要的意义,它可以按照生产需求控制家畜性别,以提高畜牧业生产的经济效益.

关键词： lamp法鉴定技术胚胎性别家畜性别畜牧业生产经济效益

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lamp法在水产动物病原快速检测中的应用

南方水产 2007年第2期3卷 71-75页

作者：赵飞邹为民中国水产科学研究院珠江水产研究所广东广州510380

近年来，一种新的恒温核酸扩增方法lamp法（loop-mediated isothermal amplification），即环介导等温扩增法已经被开发利用。它采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶（Bst DNA polymerase），在恒... 详细信息

近年来，一种新的恒温核酸扩增方法lamp法（loop-mediated isothermal amplification），即环介导等温扩增法已经被开发利用。它采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶（Bst DNA polymerase），在恒温条件（60～65℃），不到1h的时间里进行核酸扩增，其扩增效率可达到10^9～10^10个数量级，具有特异性强、等温灵敏、操作简单、产物易检测等优点。lamp法已经被用来快速检测水产动物病原（细菌、病毒、寄生虫）。文章就lamp法的反应原理、引物设计及其在水产动物病原快速检测中的应用等做简要的综述。

关键词： lamp法反应原理病原快速检测

lamp法、ADA法在结核性胸膜炎诊断中的应用比较

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中国医学创新 2021年第18期18卷 146-150页

作者：陈沃庆广东省江门市中心医院广东江门529000

目的:为了更好地了解结核性胸膜炎在患者机体中的情况,本研究中使用lamp法、ADA法对患者进行诊断,探讨其诊断价值。方法:选取2019年5月-2020年4月本院疑似结核性胸膜炎的患者80例,所有患者均实施lamp法、ADA法检测。将临床诊断标准作为... 详细信息

目的:为了更好地了解结核性胸膜炎在患者机体中的情况,本研究中使用lamp法、ADA法对患者进行诊断,探讨其诊断价值。方法:选取2019年5月-2020年4月本院疑似结核性胸膜炎的患者80例,所有患者均实施lamp法、ADA法检测。将临床诊断标准作为金标准,分析ADA法、lamp法对结核性胸膜炎诊断情况,比较ADA法和lamp法对结核性胸膜炎的诊断效能。结果:ADA法诊断结核性胸膜炎的准确率为81.25%,lamp法诊断结核性胸膜炎的准确率为51.25%。ADA法诊断结核性胸膜炎的灵敏度为91.2%,高于lamp法的44.1%(P法诊断结核性胸膜炎的特异度为25.0%,低于lamp法的91.7%(Plamp法和ADA法的灵敏度和特异度之间具有一定的差异性,lamp法可以有效地提高特异度,这种诊断方式可以有效地帮助医生提高对患者疾病的判断能力,制定准确并且有效的治疗方法,改善患者目前的状态,临床上应当进一步推广应用。

关键词： lamp法 ADA法结核性胸膜炎

lamp法与流式细胞精子分离法在奶牛上应用前景之比较

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上海畜牧兽医通讯 2007年第1期 47-49页

作者：王定发李邦佑周木清陈橙夏瑜童伟文武汉市畜牧兽医科学研究所武汉430065

家畜性别控制是指在动物出生之前通过人为地干预或操作控制其性别,以改变家畜后代的自然性比,进而按照人们的意愿进行特定性别的畜禽生产的一门生物学技术[1].从1902年McClung提出性别决定理论之后,对于性别决定有了划时代的突破,1990... 详细信息

家畜性别控制是指在动物出生之前通过人为地干预或操作控制其性别,以改变家畜后代的自然性比,进而按照人们的意愿进行特定性别的畜禽生产的一门生物学技术[1].从1902年McClung提出性别决定理论之后,对于性别决定有了划时代的突破,1990年英国学者Sinclair和Gubby发现哺乳动物(包括人类)Y染色体短臂上靠近常染色体区的35K区域存在的性别决定区(SRY)[2].同时伴随着人工授精和胚胎移植技术的发展和应用,性别控制研究出现了高潮.

关键词： lamp法应用分离法性别控制奶牛精子细胞胚胎移植技术

用lamp法快速鉴别熟制牦牛肉饼中的猪肉和鸡肉成分

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西南民族大学学报（自然科学版） 2018年第3期44卷 237-242页

作者：唐善虎李雪王柳西南民族大学生命科学与技术学院四川成都610041

旨在建立一套lamp体系对牦牛肉饼中掺杂的鸡肉和猪肉进行鉴定和检测.以牦牛、鸡和猪为研究对象,分别对牦牛的16S rRNA、鸡的12S rRNA和猪的12S rRNA-tRNA Val设计3组引物.通过模拟制作牦牛肉饼加工条件后,从肉饼中提取的DNA,进行lamp扩... 详细信息

旨在建立一套lamp体系对牦牛肉饼中掺杂的鸡肉和猪肉进行鉴定和检测.以牦牛、鸡和猪为研究对象,分别对牦牛的16S rRNA、鸡的12S rRNA和猪的12S rRNA-tRNA Val设计3组引物.通过模拟制作牦牛肉饼加工条件后,从肉饼中提取的DNA,进行lamp扩增和电泳.结果表明,所设计的引物只能在对应的肉制品中扩增出目的条带,该法具有较高的特异性,可用于混合的生鲜牦牛肉或牦牛肉品中的动物源性成分的鉴定.将鸡肉和猪肉分别按一定的比例混合到牦牛肉中制成牦牛肉饼,采用建立的lamp体系对其进行掺杂检测,鸡肉的检出限为0.25%,猪肉的检出限为0.125%.该方法在肉品的鉴别上具有简单、快速和特异性强的特点,在为熟肉制品种类来源的检测提供了新方法.

关键词： lamp法牦牛肉饼鸡肉猪肉