检索结果-南通市图书馆

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

lama5在小鼠腭发育中的生物学功能研究

LAMA5在小鼠腭发育中的生物学功能研究

作者：付真真青岛大学

学位级别：硕士

目的:本研究采用前期实验筛选出的层粘连蛋白-α5(Laminin-α5,lama5)最佳干扰序列靶向干扰小鼠腭突中lama5的表达,观察lama5表达下调对腭发育的影响,研究lama5是否通过增殖、凋亡以及上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transforma... 详细信息

目的:本研究采用前期实验筛选出的层粘连蛋白-α5(Laminin-α5,lama5)最佳干扰序列靶向干扰小鼠腭突中lama5的表达,观察lama5表达下调对腭发育的影响,研究lama5是否通过增殖、凋亡以及上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)相关生物学行为和SHH信号通路干扰腭突发育。方法:1.用断颈脱位法处死妊娠第13.5天(E13.5)的C57BL/6J孕鼠,解剖胎鼠腭突,建立体外腭器官培养模型。构建lama5-sh RNA腺病毒载体,将其转染至E13.5的腭突中。体外培养48h后,荧光显微镜下观察病毒的转染及腭突融合情况,分别采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-q PCR)和Western blotting检测lama5在m RNA和蛋白质水平上的表达变化。免疫组织化学(Immunohistochemical,IHC)染色对lama5进行定位和半定量检测。苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察病毒转染后小鼠腭突的组织学形态。2.分别检测空白对照组,阴性对照组,lama5干扰组中增殖、凋亡及EMT相关标志因子的表达。采用RT-q PCR和Western blotting检测病毒转染后ki67、cyclin D1、caspase 3、cleaved caspase 3、E-cadherin、vimentin在m RNA和蛋白质水平上的表达变化。IHC染色对其进行定位和半定量检测。3.分别检测空白对照组,阴性对照组,lama5干扰组中SHH信号通路相关信号因子的表达。分别采用RT-q PCR和Western blotting检测病毒转染后Shh、ptch1、gli1在m RNA和蛋白质水平上的表达变化。IHC染色对其进行定位和半定量检测。结果:1.病毒转染48h后荧光显微镜下观察,阴性对照组和lama5干扰组两组腭突均显示绿色荧光;阴性对照组中可见两侧的腭突组织向中间靠近并融合,lama5干扰组中两侧腭突未能接触融合,仍存在较大间隙。PCR结果显示,与空白对照组相比,阴性对照组lama5 m RNA表达量无明显变化(P>0.05),lama5干扰组中lama5m RNA表达减少了74.48%(P5)。Western blotting检测与PCR检测结果趋势一致。IHC染色显示lama5主要定位在上皮基底膜上,空白对照组和阴性对照组lama5阳性率无明显差别(P>0.05),而lama5干扰组中lama5 m RNA表达减少(P5)。HE染色结果显示空白对照组和阴性对照组中的腭突组织发育正常,两侧的腭突相互接触融合,形成完整的继发腭;而lama5干扰组中,腭突发育不足,两侧腭突组织未能正常接触融合,表现为腭裂。2.PCR结果表示,与空白对照组相比,阴性对照组中增殖标志物ki67和cyclin D1、凋亡标志物caspase 3、EMT标志物E-cadherin和vimentin的m RNA表达量均无明显变化(P>0.05);lama5干扰组中,ki67和cyclin D1的m RNA表达量分别减少了56.88%和83.63%(P5),caspase 3的m RNA表达量增加了157.47%(P5),而E-cadherin和vimentin在m RNA水平的表达未显示出明显的变化(P>0.05)。Western blotting结果与PCR结果趋势一致。且cleaved caspase 3在蛋白质水平上升高(P5)。IHC染色显示,空白对照组和阴性对照组腭突中ki67、cyclin D1以及caspase 3阳性率无明显统计学差异(P>0.05);lama5干扰组与空白对照组相比,ki67和cyclin D1明显减少,caspase 3明显增多(P5)。3.PCR结果表示,与空白对照组相比,阴性对照组中Shh、ptch1、gli1 m RNA表达量均无明显变化(P>0.05);lama5干扰组中Shh、ptch1表达无明显变化(P>0.05),但gli1 m RNA表达量减少了67.73%(P5)。Western blotting的检测结果和PCR趋势一致。IHC染色结果表明,空白对照组与阴性对照组相比gli1阳性率未出现明显变化(P>0.05);lama5干扰组与空白对照组相比gli1阳性率明显减少(P5)。结论:1.lama5在腭发育中具有重要作用,干扰其表达导致小鼠腭裂。2.lama5基因沉默通过抑制小鼠腭突细胞增殖,促进细胞凋亡导致腭裂,在此过程中可能未涉及到EMT。3.lama5基因沉默通过干扰正常的SHH信号通路导致腭裂,并且可能存在相关的信号通路交叉作用。

关键词：腭裂 lama5 RNA干扰 SHH 增殖

GSTO1、lama5和ITGA6在EOC组织中的表达与患者临床病理预后及免疫细胞浸润的关系

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

GSTO1、LAMA5和ITGA6在EOC组织中的表达与患者临床病理预后及免疫...

作者：侯纪帅石河子大学

学位级别：硕士

目的:探讨上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer,EOC)患者肿瘤组织中谷胱甘肽S-转移酶1(Glutathione-S-transferaseΩ-1,GSTO1)、层粘连蛋白亚基α5(Lamininα5,lama5)、整合素α6(Integrinα6,ITGA6)表达水平与患者临床病理特征、预后和免疫细胞浸润的关系。方法:1、卵巢癌(Ovarian Cancer,OC)高转移细胞和亲本细胞N-糖基化定量分析:课题组将OC高转移性细胞和亲本细胞各三对(由华中科技大学同济医学院附属协和医院王泽华教授团队馈赠)送至华大基因进行蛋白质N-糖基化检测分析(检测序号:F19FTSNWWLJ7959＿J200109064),结果显示,在肿瘤通路中GSTO1、lama5、ITGA6存在N-糖基化修饰的显著差异,课题组基于此,对GSTO1、lama5、ITGA6三个蛋白进行了深入研究。2、生物信息学方法探究GSTO1、lama5、ITGA6在OC中的表达以及与患者临床病理特征、预后和免疫细胞的浸润的关系:(1)c Bioprotal数据库探究GSTO1、lama5、ITGA6基因在OC中的基因突变情况。(2)GEPIA2和GEO数据库分析GSTO1、lama5、ITGA6在OC组织及对照组中的表达。(3)TCGA数据库分析GSTO1、lama5和ITGA6基因表达与患者临床病理特征的相关性。(4)Kaplan-Meier plotter数据库分析GSTO1、lama5和ITGA6基因表达与患者预后的关系。(5)STRING数据库分析GSTO1、lama5、ITGA6三个蛋白间的相互作用。(6)GSEA功能富集分析GSTO1、lama5、ITGA6基因在OC中发挥作用可能的机制。(7)GEPIA2数据库分析GSTO1、lama5、ITGA6表达与PD-1、PD-L1、CTLA4的相关性;TIMER数据库和Cibersort算法分析三个基因表达与免疫细胞浸润的关系;Kaplan-Meier plotter数据库分析不同免疫细胞浸润状态下三个基因表达与患者预后的关系。3、选取2010年01月至2022年05月石河子大学医学院第一附属医院收治的110例EOC患者的肿瘤组织为实验组,获得病理蜡块并制作组织芯片,选取30例正常输卵管伞端上皮组织作为对照。4、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色检测GSTO1、lama5、ITGA6在110例EOC组织和30例正常对照中的表达,根据IHC染色结果划分为高表达组和低表达组,≥4分定义为高表达,5、收集110例EOC患者的年龄、FIGO分期、肿瘤组织学类型(Type)、肿瘤级别(Grade)、淋巴结转移(Lymph node metastasis,LNM)、淋巴脉管间隙浸润(Lymphovascular space invasion,LVSI)、CA125、HE4等临床病理资料,分析EOC组织中GSTO1、lama5、ITGA6的表达与患者临床病理特征的关系。6、对110例EOC患者进行随访,随访方式为电话询问或门诊/住院病历系统查询,获得患者复发和生存信息,计算患者无进展生存期(Progression free survival,PFS)和总生存期(Overall sur vival,OS),分析GSTO1、lama5、ITGA6的表达与患者预后的关系。采用单因素和多因素CO X风险评估模型分析影响患者预后的相关因素。7、将本课题纳入的110例EOC患者的临床病理资料和GSTO1、lama5、ITGA6三个基因IH C染色评分结果作为研究指标,通过绘制诺莫图对患者1、3、5年的复发或生存情况进行预测;运用机器学习模型的4种算法建立OC恶性风险预测模型。结果:1、蛋白质N-糖基化定量分析结果:OC高转细胞和亲本细胞在肿瘤通路中存在N-糖基化修饰,其中GSTO1、lama5和ITGA6三个蛋白存在N-糖基化修饰的显著差异。2、生物信息学数据库结果:(1)通过检索c Bioprotal数据库发现lama5在OC中的基因突变频率为15%,GSTO1、ITG A6分别为1.9%和6%。(2)GEPIA2数据库中lama5在OC组织中的表达高于对照组,差异具有统计学意义(P5)。GSTO1、ITGA6差异无统计学意义(P均>0.05);GEO数据集分析显示lama5与ITGA6在OC中的表达较正常对照组高,差异具有统计学意义(P均5表达水平与肿瘤分化程度有相关性,(P均5)。(4)检索Kaplan-Meier plotter数据库结果提示,GSTO1、lama5基因高表达与患者较短的O S相关(P均5),

关键词： EOC GSTO1 lama5 ITGA6 临床病理特征及预后免疫

lama5在腭发育关键期表达变化及基因沉默体外干扰腭发育的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

LAMA5在腭发育关键期表达变化及基因沉默体外干扰腭发育的研究

作者：于果青岛大学

学位级别：硕士

目的:前期抽取30名非综合型唇腭裂的患儿血样,通过全外显子测序等生物信息技术寻找非综合型唇腭裂可能候选致病基因,筛选出突变率最高lama5基因rs145192286位点。本研究依靠前期的实验基础,探究其lama5基因与非综合型唇腭裂之间的关系... 详细信息

目的:前期抽取30名非综合型唇腭裂的患儿血样,通过全外显子测序等生物信息技术寻找非综合型唇腭裂可能候选致病基因,筛选出突变率最高lama5基因rs145192286位点。本研究依靠前期的实验基础,探究其lama5基因与非综合型唇腭裂之间的关系。观察层粘连蛋白-5（lama5）在小鼠胚胎腭器官发育融合过程中的时空表达变化,利用RNAi技术靶向干扰lama5基因,观察腭突融合情况,了解特异性抑制靶基因下对于胚胎腭突发育融合的影响。方法:1.用断颈脱位法在C57BL/6J孕鼠妊娠第12.5天（E12.5）、E13.5、E14.5、E15.0、E15.5处死,保留小鼠胎头,应用免疫组织化学染色和Western Blotting法定位、半定量检测lama5蛋白在不同胚胎发育时期在腭突中的表达。2.建立体外腭器官培养模型,设计抑制lama5基因表达尾部带有绿色荧光标记物的shRNA腺病毒载体,将其导入E13.5体外培养腭突组织中,培养48h后倒置荧光显微镜下观察腭突融合情况,运用实时荧光定量PCR和Western blotting技术从mRNA水平和蛋白质水平分别检测干扰后的基因lama5表达量变化。结果:1.免疫组织化学显示lama5主要定位在基底膜上,基底膜属于特殊的细胞外基质。胚胎E12.5和E13.5时表达在腭中嵴上皮的基底膜上,表达量高,呈连续高强度染色;E14.5表达量较E13.5时明显减少,仅在腭突及邻近口腔和鼻腔面的细胞外基质有表达;E15.0仅仅在接触的腭中缝表达,随着腭突融合E15.5未见lama5表达。结合半定量吸光度值测定免疫组织化学染色结果,吸光度值随着腭突逐渐发育至成熟期间,数值逐渐降低,表达量也降低,且每组与前一组相比均有显著表达统计学差异（P＜0.05）。Western Blotting显示lama5在E12.5时表达最多,E15.5时表达最少。在E14.5时表达明显比E13.5时减少,有差别统计学意义（P＜0.05）。Western blot检测和免疫组化检测结果趋势一致。2.经过48h后lama5-shRNA3转染组和EGFP-NC对照组两侧腭突向中间聚拢并逐渐融合。lama5-shRNA1组和lama5-shRNA2组经过病毒转染后两侧腭突未融合,两侧腭突间仍有间隙。PCR结果表示,lama5-shRNA1组和lama5-shRNA2组的与HBAD-EGFP-NC对照组相比分别减少了63.7%和48.1%,有明显统计学意义（P＜0.05）。而lama5-shRNA3实验组并未有明显的下降,表达量没有区别性差异（P＞0.05）。Western blot检测和PCR检测结果趋势一致。结论:lama5在腭发育的关键阶段有表达变化趋势。构建腺病毒载体沉默抑制lama5引起腭裂发生,证明lama5与腭裂发生有关。因此我们推测lama5可能是NSCL/P新的候选致病基因,同时也为后续作用机制及信号通路等的研究奠定基础。

关键词：腭突发育 lama5 RNA干扰细胞外基质

焦磷酸测序技术检测lama5 rs944895基因多态性方法的建立

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国临床药理学与治疗学 2011年第6期16卷 647-651页

作者：贾政军王华彭向京黄定梅王果湖南省妇幼保健院遗传室中南大学临床药理研究所

目的:建立lama5 rs944895基因多态性分析的焦磷酸测序方法,并分析该多态性在中国健康人群中的分布频率。方法:制备201例健康人外周血gDNA,应用PyroMark ID焦磷酸测序仪进行lama5 rs944895基因多态位点的焦磷酸测序,并经过重复性试验和... 详细信息

目的:建立lama5 rs944895基因多态性分析的焦磷酸测序方法,并分析该多态性在中国健康人群中的分布频率。方法:制备201例健康人外周血gDNA,应用PyroMark ID焦磷酸测序仪进行lama5 rs944895基因多态位点的焦磷酸测序,并经过重复性试验和毛细管电泳测序验证该方法的准确性。结果:建立了lama5rs944895基因多态性分析的焦磷酸测序新方法,检出率100%,重复性试验和毛细管电泳测序验证准确可靠。201例健康人中A等位基因频率为72.4%,G为27.6%;AA、AG、GG等位基因型频率分别为53.2%、38.3%和8.5%,符合Hardy-Weinberg平衡(P=0.55)。结论:lama5rs944895基因多态性分析的焦磷酸测序新方法具有快速、准确和高通量的优点,适合于在科研和临床应用中推广。

关键词：焦磷酸测序多态性 lama5 序列分析

层粘连蛋白基因家族在猪多能干细胞中的表达谱分析

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2017年第8期33卷 1304-1314页

作者：李焕于童马洋洋王华岩西北农林科技大学动物医学院动物生物技术系陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100

层粘连蛋白(Laminin)是细胞外基质的重要成分,对细胞生长、分化、运动、组织修复和再生等发挥重要调节作用。Laminin包括有A1-5、B1-4和C1-3共12个编码基因,以不同的表达模式发挥功能。其中Laminin A5作为可以支持多能细胞生长的重要基... 详细信息

层粘连蛋白(Laminin)是细胞外基质的重要成分,对细胞生长、分化、运动、组织修复和再生等发挥重要调节作用。Laminin包括有A1-5、B1-4和C1-3共12个编码基因,以不同的表达模式发挥功能。其中Laminin A5作为可以支持多能细胞生长的重要基因,得到广泛研究。但是,在所有猪相关数据库中,均未能查到Laminin A5的信息。文中通过生物信息学分析,首次确认了猪Laminin A5的存在,并进行了克隆和测序验证。为揭示Laminin基因家族在猪诱导多能干细胞(i PSCs)中的表达特性,检测了Laminin在猪各组织、体细胞和i PS细胞中的不同表达模式。发现Laminin B1基因在猪多能干细胞中存在特异性可变剪接体(LAMB1-a),且该可变剪切体的表达量与猪多能干细胞的重编程程度呈正相关。为进一步揭示和利用Laminin作为细胞外基质,用于猪多能干细胞的获取和培养优化奠定了基础。

关键词：猪多能干细胞层粘连蛋白 lama5 表达模式分析

层粘连蛋白α5在浆液性卵巢癌中的表达及功能研究

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

层粘连蛋白α5在浆液性卵巢癌中的表达及功能研究

作者：李少婧锦州医科大学

学位级别：硕士

目的卵巢癌是当前女性生殖系统肿瘤中导致死亡的主要原因之一,最新癌症统计显示其卵巢癌死亡率位居世界第五。流行病学及遗传学分析发现卵巢癌的发生发展与基因突变密切相关,其高死亡率由多因素作用,但转移及复发是主要原因。因此,寻找... 详细信息

目的卵巢癌是当前女性生殖系统肿瘤中导致死亡的主要原因之一,最新癌症统计显示其卵巢癌死亡率位居世界第五。流行病学及遗传学分析发现卵巢癌的发生发展与基因突变密切相关,其高死亡率由多因素作用,但转移及复发是主要原因。因此,寻找卵巢癌不良预后的分子标志物及转移机制的研究,抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭等特性,对改善卵巢癌患者的生活质量,延长其生存期,改善其预后至关重要。通过分析与卵巢癌相关的数据库,我们发现层粘连蛋白亚基α5（lama5）在卵巢癌组织中呈现出高表达,且lama5的表达量与卵巢癌的生存预后有相关性。本文通过对lama5在浆液性卵巢癌细胞中的表达及功能研究,探讨其临床意义。方法1、将lama5在TCGA、GEO等数据库中进行分析,结合免疫组化试验验证lama5在浆液性卵巢癌组织中的表达情况、临床病理特征及相关预后,评估lama5在卵巢癌中的临床意义;2、通过应用细胞CCK8以及Transwell等实验方法,探讨lama5在浆液性卵巢癌细胞中的对其细胞功能如增殖、迁徙,以及侵袭等特性的影响;3、通过基因富集分析讨论lama5在卵巢癌发生发展过程中可能的分子机制通路。结果1、根据数据库以及免疫组化的结果分析可见,lama5在浆液性卵巢癌中的表达水平要显著高于正常卵巢组织及浆液性囊腺瘤,而且对高表达患者而言,预后更差;2、CCK8及Transwell结果显示,在高级别浆液性卵巢癌细胞中特异性敲除lama5后,其增殖、迁移以及侵袭能力均被显著抑制;3、GSEA生信分析lama5在卵巢癌中可能与MITOTIC＿SPINDLE、Hh信号通路有关。结论1、lama5在浆液性卵巢癌组织中呈高表达,且高表达患者预后差;2、lama5可以促进高级别浆液性卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,具备成为卵巢癌不良预后的标志物的潜能。

关键词：卵巢癌 lama5 小干扰siRNA 细胞迁移细胞侵袭

猪多能干细胞中LAMININ基因表达谱的分析及其可变剪切体的分子克隆

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

猪多能干细胞中LAMININ基因表达谱的分析及其可变剪切体的分子克隆

作者：李焕西北农林科技大学

学位级别：硕士

层粘连蛋白(Laminin,LN)是细胞膜的重要成分,采用LN作为细胞基质培养多能干细胞,可以维持干细胞的自我更新和多能性。LN家族中有15种不同的亚型,每一种亚型由三条肽链(α、β、γ)组成,形成十字架结构的异源三聚体。其中Laminin A5(LAM... 详细信息

层粘连蛋白(Laminin,LN)是细胞膜的重要成分,采用LN作为细胞基质培养多能干细胞,可以维持干细胞的自我更新和多能性。LN家族中有15种不同的亚型,每一种亚型由三条肽链(α、β、γ)组成,形成十字架结构的异源三聚体。其中Laminin A5(lama5)对于维持多能干细胞的生长有重要作用。本研究旨在检测猪不同组织和细胞中LAMININ的表达情况,研究LN在多能干细胞分化过程中的时空表达特性;通过生物信息学分析和分子克隆,确认猪lama5基因的存在和表达变化;发现并分子克隆了与猪多能干细胞特性相关的Laminin B1-a(LAMB1-a)可变剪接体。本研究丰富了对猪多能干细胞培养基质研究的信息,为研究猪干细胞多能性的维持提供了理论依据。本研究获得的主要结果如下:1.LAMININ在猪组织和细胞中的表达谱分析用RT-PCR检测猪不同组织(肝脏、心脏、肺、胃、脑、睾丸、脂肪、颗粒细胞组织)、体细胞(肝细胞、脂肪细胞、猪胎儿成纤维细胞)和多能干细胞(DOX-iPS、PS11、PS23)中LAMININ不同亚型的表达情况。结果表明,不同组织和细胞中LAMININ的表达存在明显差异。通过比对组织来源和细胞来源的样品发现,在细胞中LAMININ的表达特异性更加突出,其中在PEF细胞中LAMININ的表达特征为:lama4/5-LAMB1/2-LAMC1/2(即LN-411、LN-421、LN-511和LN-521);在猪iPS细胞中LAMININ的表达特征为:lama1/5-LAMB1-a/2-LAMC1(即LN-11a1、LN-121、LN-51a1和LN-521)。2.猪lama5的生物学分析和克隆未注释有猪lama5基因的序列信息和相关报道。为此我们运用NCBI和UCSC等数据库,分析人、牛和山羊的lama5基因序列,预测猪lama5基因,以RPS21和CABLES2基因对猪基因组数据库(Sscrofa11.1)中lama5的可能序列区域进行定位。通过DNAMAN(V6)软件进行比对,确认了猪lama5的序列,并设计特异性引物,从猪肺组织样c DNA中克隆了长度为731 bp的猪lama5基因序列。测序结果与人和牛lama5序列高度一致,序列上传至GENBANK,获得登录号:KY622023。3.猪多能干细胞中LAMININ的表达特性和LAMB1-a可变剪接体的发现通过检测,发现猪iPS细胞中,LAMB1出现了两条特异性条带,为了进一步研究LAMB1的性质,对克隆的两条特异性条带(LAMB1 505bp、LAMB1-a 639bp)进行测序,结果显示与NCBI中已有的LAMB1-X1和LAMB1-X2序列不一样,发现LAMB1-a是一个新的可变剪接体。为了进一步探讨LAMB1与多能干细胞的相关性,选取猪PEF和猪多能干细胞DOX-iPS及分化的iPS细胞进行了检测。结果显示,随着多能干细胞形态的改变,细胞团形态逐渐消失,LAMB1-a的表达逐渐下降,当再次运用DOX-iPS培养基培养后,当细胞团形态再次恢复的时候,LAMB1-a的表达逐渐恢复。在检测中还发现,在iPS重编程过程中lama4的表达随着细胞的分化程度,其表达量明显升高,相反在细胞分化的过程中lama1的表达量逐渐降低。总之,本研究确定了猪多能干细胞中LAMININ的表达特征,即LN11a1/LN121和LN51a1/LN521;确认了猪lama5基因的存在,并分析和克隆了该基因;发现了LAMB1-a可变剪接体,并验证了该基因与多能干细胞的对应关系。

关键词：猪层粘连蛋白 lama5 LAMB1-a 可变剪接体