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lag-3与间质肿瘤浸润淋巴细胞在进展期胃腺癌中的预后价值

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LAG-3与间质肿瘤浸润淋巴细胞在进展期胃腺癌中的预后价值

作者：吴志达福建医科大学

学位级别：硕士

研究目的:本研究通过对进展期胃腺癌中间质肿瘤浸润淋巴细胞浸润情况(stromal tumor-infiltrating lymphocytes,sTIL)及lag-3蛋白的表达情况进行分析,旨在探究其与进展期胃腺癌预后的相关性。材料与方法:收集260例进展期胃腺癌患者的临... 详细信息

研究目的:本研究通过对进展期胃腺癌中间质肿瘤浸润淋巴细胞浸润情况(stromal tumor-infiltrating lymphocytes,sTIL)及lag-3蛋白的表达情况进行分析,旨在探究其与进展期胃腺癌预后的相关性。材料与方法:收集260例进展期胃腺癌患者的临床病理特征及随访资料,使用半定量的方法对胃癌切片中sTIL的百分比进行计算,并用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)对lag-3蛋白进行检测,本研究根据爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus,EBV)、错配修复(mismatch repair deficient,MMR)蛋白、P53、E-Ca的表达情况对进展期胃腺癌进行蛋白分型,探究间质TILs浸润情况、lag-3蛋白表达与进展期胃腺癌患者预后的相关性。研究结果:1.临床病理特征:本组260例进展期胃腺癌患者发病年龄17-87岁,中位年龄60岁。其中男性患者176例,女性患者84例。肿瘤大小1-17cm;88例发生于食管胃交界,85例发生于胃底体,80例发生于胃窦,7例发生于全胃;本组病例中有156例行术后辅助化疗。根据Lauren分型,本组病例中69例为肠型,136例为弥漫型,55例为混合型。本组病例中214例患者伴有淋巴结转移;187例脉管内见癌栓;144例伴神经侵犯;30例发生远处转移。根据EB病毒、错配修复蛋白、E-Ca、P53的表达情况,运用五层分类法将本组胃癌病例进行蛋白分型:EBV阳性组20例(7.7%),dMMR组8例(3.1%),E-Ca异常表达组43例(16.5%),P53异常表达组72例(27.7%),P53正常表达组117例(45%)。2.进展期胃腺癌患者sTIL浸润情况及lag-3的表达情况:260例病例中,sTIL高浸润组173例(66.5%),lag-3高表达组160例(61.5%)。同时,本研究根据sTIL浸润情况与lag-3的表达情况将本组病例分成四组:Ⅰ组:lag-3/sTIL48例(18.5%);Ⅱ组:lag-3/sTIL52例(20%);Ⅲ组:lag-3/sTIL39例(15%);Ⅳ组:lag-3/sTIL121例(46.5%)。3.预后分析:Kaplan-Meier单因素结果显示胃腺癌患者的预后与年龄、肿物大小、肿瘤位置、Lauren分型、神经侵犯、脉管癌栓、T分期、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、术后辅助化疗、蛋白分型存在相关性(Plag-3高表达患者预后较好。多因素COX分析结果显示年龄(P=0.002)、肿物大小(P36)是进展期胃腺癌患者的独立预后因素,lag-3/sTIL进展期胃腺癌患者预后较差。结论:***-3高表达或sTIL高浸润进展期胃腺癌患者预后较好。2.年龄、肿物大小、Lauren分型、术后辅助化疗、蛋白分型是进展期胃腺癌患者的独立预后因素。***-3/sTIL进展期胃腺癌患者预后较差。***-3与sTIL有助于筛查预后不良的进展期胃腺癌患者。

关键词：进展期胃腺癌临床病理预后 sTIL lag-3

lag-3在膀胱尿路上皮癌中的表达和临床意义

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LAG-3在膀胱尿路上皮癌中的表达和临床意义

作者：罗辉亿宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨淋巴细胞活化基因-3(Lymphocyte Activation Gene-3 lag 3/CD233)在膀胱尿路上皮癌(Urothelial carcinoma UC)中的表达和临床意义。方法:从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas TCGA)公共数据库中下载膀胱肿瘤的转录表达... 详细信息

目的:探讨淋巴细胞活化基因-3(Lymphocyte Activation Gene-3 lag 3/CD233)在膀胱尿路上皮癌(Urothelial carcinoma UC)中的表达和临床意义。方法:从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas TCGA)公共数据库中下载膀胱肿瘤的转录表达数据和临床数据,分析在膀胱肿瘤中lag-3的表达水平;肿瘤微环境中lag-3与CD8+T效应器、免疫检查点、抗原呈递物等差异性表达分析;在肿瘤中lag-3与免疫细胞浸润、免疫基因的相关性分析;收集2014年7月-2022年7月在宁夏医科大学总医院行膀胱肿瘤根治术,且术后病理确诊为尿路上皮癌的患者,符合纳入和排除标准的病例共71例,其中肌层浸润性膀胱肿瘤患者44例、非肌层浸润性膀胱肿瘤患者27例,对膀胱肿瘤患者的蜡块组织行免疫组化染色,分析lag-3阳性表达和一般临床资料和临床预后的相关性,采用Kaplan-Meier方法并绘制生存曲线。结果:***公共数据库分析:lag-3在膀胱肿瘤中明显表达,且与肿瘤的病理分级相关,分级越高,差异表达越明显(Plag-3高低表达与CD8-T效应器、抗原加工机制、错配修复、核苷酸切除修复、DNA损伤反应等具有显著差异性(Plag-3高低表达对树突状细胞、调节T细胞、巨噬细胞、粘膜相关恒定T细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞等免疫细胞差异表达有统计学意义(Plag-3与免疫检查点PD-L1(Programmed cell death1 Ligand细胞程序性死亡-配体1)、PDCD-1(Programmed cell death 1细胞程序性死亡蛋白1)、CTLA-4(Cytotoxic T Lymphocyte-associated Antigen-4细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4)、TIGIT(T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白)具有明显的正相关关系。2.免疫组化实验中,lag-3在膀胱尿路上皮癌和癌旁差异表达分析有统计学意义(P32%。***-3表达和一般临床资料相关分析中,lag-3的表达与临床分期差异有统计学意义(Plag-3在不同病理分级表达有明显统计学差异(Plag-3膀胱肿瘤的独立危险因素,lag-3Kaplan-Meier生存曲线分析发现lag-3表达阳性患者的生存预后较差(P3可能是膀胱癌进展和侵袭的危险因素。lag-3表达、临床分期是膀胱肿瘤的预后的独立危险因素,lag-3可以作为标志物用于膀胱癌的诊断和预后。

关键词：膀胱肿瘤尿路上皮癌免疫检查点 lag-3

淋巴细胞活化基因-3敲除(lag-3-/-)小鼠构建及初步表型分析

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中国实验动物学报 2020年第1期28卷 49-57页

作者：万颖寒慈磊王珏龚慧万志鹏奚骏何敏珠孙瑞林费俭沈如凌上海实验动物研究中心上海201203 模式生物技术联合实验室上海实验动物研究中心上海201203 同济大学生命科学与技术学院上海200092 上海南方模式生物科技股份有限公司上海201318

目的构建淋巴细胞活化基因-3(lag-3)基因敲除小鼠,初步分析lag-3基因敲除对小鼠表型影响,为后续lag-3体内功能研究提供动物模型。方法利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用RT-PCR... 详细信息

目的构建淋巴细胞活化基因-3(lag-3)基因敲除小鼠,初步分析lag-3基因敲除对小鼠表型影响,为后续lag-3体内功能研究提供动物模型。方法利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用RT-PCR和流式检测方法进一步验证lag-3基因敲除小鼠体内lag-3基因敲除效果;通过建立Con A诱导的肝损伤模型研究lag-3基因在体内的功能。结果PCR和产物测序结果显示,获得了exon 2缺失的lag-3基因敲除小鼠;该基因敲除纯合子小鼠(lag-3-/-)经刀豆蛋白(Con A)刺激后,小鼠心脏、脾、肺、巨噬细胞和淋巴结中仅能检测到lag-3 mRNA本底表达信号,小鼠巨噬细胞、脾细胞和淋巴结中仅能检测到非常低数量的lag-3阳性细胞。表型分析发现,lag-3基因的缺失显著减少了Con A诱导的小鼠外周血、骨髓和脾CD3+T细胞的数量,减轻了Con A诱发的急性肝损伤情况。结论成功构建lag-3基因敲除小鼠模型,肝损伤过程中的体内功能研究显示,lag-3缺失可以显著缓解Con A引发的肝损伤的发生。

关键词： lag-3 CRISPR/Cas9 基因敲除刀豆蛋白

ITP病人外周血中T细胞免疫抑制性受体Tim-3、lag-3和BTLA的表达特点

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中国免疫学杂志 2016年第7期32卷 1028-1030页

作者：钟隽陈少华张涛郁志卢育洪杨力建赖菁李扬秋暨南大学附属一院血液科广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广州510632

免疫性血小板减少症（Immune thrombocyt-openia,ITP）是一种自身免疫性出血性疾病,T细胞免疫调控在ITP的发生发展中起重要作用。我们前期研究发现了ITP中存在异常的TCR亚家族克隆增殖和TCR信号通路。近几年系列研究发现ITP的T细胞免疫... 详细信息

免疫性血小板减少症（Immune thrombocyt-openia,ITP）是一种自身免疫性出血性疾病,T细胞免疫调控在ITP的发生发展中起重要作用。我们前期研究发现了ITP中存在异常的TCR亚家族克隆增殖和TCR信号通路。近几年系列研究发现ITP的T细胞免疫异常与一些介导免疫耐受的分子表达异常相关。

关键词：免疫抑制性受体 T细胞免疫 ITP lag-3 Tim-3 BTLA 免疫异常介导免疫表达特点出血性疾病

lag-3抗体与免疫调节剂cGAMP联合用于肿瘤治疗的研究

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LAG-3抗体与免疫调节剂cGAMP联合用于肿瘤治疗的研究

作者：黄保婷福建师范大学

学位级别：硕士

免疫检查点分子是调节免疫应答激活与抑制平衡的关键分子。在正常生理状态下,抑制性免疫检查点在自身耐受和自身免疫防御中发挥重要作用,免疫检查点疗法就是通过共抑制或共刺激信号等一系列途径以调节T细胞活性来杀伤肿瘤细胞的治疗方... 详细信息

免疫检查点分子是调节免疫应答激活与抑制平衡的关键分子。在正常生理状态下,抑制性免疫检查点在自身耐受和自身免疫防御中发挥重要作用,免疫检查点疗法就是通过共抑制或共刺激信号等一系列途径以调节T细胞活性来杀伤肿瘤细胞的治疗方法。近年来,靶向肿瘤微环境免疫抑制的免疫疗法已经在癌症治疗上取得显著疗效,其中最具代表性的则属PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂。但是只有25%-30%的肿瘤是采用PD-1/PD-L1通路来实现免疫逃逸的。随着对免疫检查点研究的深入,lag-3被誉为是继PD-1之后又一个具有巨大应用前景的新一代的肿瘤免疫治疗靶点。目前关于c GAS-STING通路的研究主要集中在肿瘤细胞以及天然免疫细胞上,发现其在肿瘤免疫、细胞衰老、炎症疾病以及病毒感染等过程中都发挥着重要的作用。c GAS作为重要的胞质DNA感受器,对于细胞内细菌、病毒以及肿瘤等异源DNA的摄入发挥监督作用,并催化形成第二信使c GAMP的产生。而c GAMP作为STING的天然配体,活化STING接头蛋白形成二聚体,通过招募TBK1激活IRF3形成蛋白复合物来诱导IFN-β的产生。同时免疫检查点lag-3在c GAS-STING先天免疫通路激活过程中如何表达调控的,也是研究重点之一。已有多个免疫相关的临床研究选择与lag-3靶点药物联合治疗,所以对lag-3抑制信号通路的理解显得尤为重要,但迄今为止,c GAS-STING通路与lag-3抗体抗肿瘤作用是否有关联还没有报道,c GAMP与lag-3抗体联用的效果也未知。相信在不久的将来随着人们对免疫检查点的深入研究,目前所面临的难关必能顺利地逐一突破。本研究主要利用Expi293F真核表达系统制备了高纯度人源PD-1抗体和lag-3抗体,通过构建小鼠肿瘤治疗模型,利用免疫检查点lag-3抗体与免疫调节剂c GAMP联合治疗,开展了lag-3抗体抗肿瘤机制研究。结果如下:(1)利用Expi293F真核表达系统成功制备了高纯度人源PD-1抗体和lag-3抗体,在体内实验中通过皮下注射给药发现PD-1抗体和lag-3抗体的联用可以对小鼠肿瘤的生长起到显著的抑制效果。(2)利用原核表达系统表达了c GAS蛋白,通过生物合成法合成c GAMP,利用质谱分析以及刺激BJ细胞验证c GAMP的生物活性,通过联用c GAMP和lag-3抗体在小鼠肿瘤模型中的治疗,我们发现的确c GAMP和lag-3抗体的联合治疗对小鼠肿瘤比单独用药有更好的疗效。由于c GAS-STING先天免疫通路在针对PD-1抗肿瘤免疫中起着关键作用,因此,本研究证明了c GAS-STING通路的激活可对促进lag-3抗体的抗肿瘤作用。(3)利用HT-DNA,POLY(I:C),c GAMP,IFN-β刺激细胞,发现激活c GAS-STING通路可提高lag-3的表达量;而用L929,MC38细胞系构建了c GAS,STING,IRF3等基因敲除的单克隆细胞株,相应敲除的细胞系lag-3的表达量降低或者无表达,说明c GAS-STING通路的激活,对lag-3抗体的抗肿瘤免疫相关治疗尤为重要,这也解释了lag-3抗体与c GAMP联用为什么会有一个较好的疗效。本实验的研究结果为c GAMP和lag-3抗体联用用于实体肿瘤的治疗提供了重要的理论和实验依据,为其临床应用奠定基础。也为后期lag-3免疫信号调节通路提供研究基础。但c GAS-STING通路提高lag-3表达的具体机制,还需要进一步研究。

关键词：免疫检查点 lag-3 肿瘤免疫治疗 cGAS-STING通路肿瘤联合治疗

TIM-3、BTLA、lag-3在弥漫大B细胞淋巴瘤中的研究进展

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白血病．淋巴瘤 2020年第9期29卷 570-573页

作者：刘笑吟朱尊民郑州大学人民医院(河南省人民医院)血液科河南省人民医院血液病研究所450003

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的侵袭性非霍奇金淋巴瘤,对R-CHOP方案免疫化疗反应良好,但30%~40%的患者最终发展为复发难治DLBCL。因此,发现新的预后标志物,对提高DLBCL的诊疗水平至关重要。免疫逃逸是DLBCL发生发展的重要机制,研... 详细信息

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的侵袭性非霍奇金淋巴瘤,对R-CHOP方案免疫化疗反应良好,但30%~40%的患者最终发展为复发难治DLBCL。因此,发现新的预后标志物,对提高DLBCL的诊疗水平至关重要。免疫逃逸是DLBCL发生发展的重要机制,研究表明TIM-3、BTLA、lag-3在DLBCL中均高表达,抑制肿瘤微环境中免疫细胞的效应功能,促进淋巴瘤细胞的免疫逃逸,从而促进DLBCL发生发展,影响常规化疗的效果。积极探索上述3个抑制性分子对DLBCL的影响,有望成为治疗DLBCL的新靶点。

关键词：淋巴瘤大B-细胞弥漫性 TIM-3 BTLA lag-3 预后

恶性实体肿瘤患者外周血T细胞中PD-1、lag-3、TIM-3的表达情况

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安徽医科大学学报 2020年第10期55卷 1597-1605页

作者：袁园陈继中朱亦林张盛韩兴华潘跃银安徽医科大学附属省立医院肿瘤科合肥230022 铜陵市人民医院输血科铜陵244000

目的探究恶性实体肿瘤患者淋巴细胞亚群及CD4^+T细胞、CD8^+T细胞上免疫检查点分子PD-1、lag-3、TIM-3的表达情况。方法使用流式细胞术(FCM)对30例恶性实体肿瘤患者和15例健康对照者外周血CD3^-细胞、CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T细... 详细信息

目的探究恶性实体肿瘤患者淋巴细胞亚群及CD4^+T细胞、CD8^+T细胞上免疫检查点分子PD-1、lag-3、TIM-3的表达情况。方法使用流式细胞术(FCM)对30例恶性实体肿瘤患者和15例健康对照者外周血CD3^-细胞、CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、CD4/CD8比值、B细胞、NK细胞及其免疫检查点PD-1、lag-3、TIM-3的表达比例进行检测;同时对肿瘤患者淋巴细胞亚群及免疫检查点表达比例进行相关性分析。结果与健康对照者相比,肿瘤患者外周血CD3^-细胞比例升高,CD3^+T细胞比例降低,但差异无统计学意义;肿瘤患者与健康对照相比,CD4^+T细胞比例(57.64%±15.52%)vs(54.69%±11.33%)、CD8^+T细胞比例(34.03%±14.27%)vs(31.13%±9.97%)、CD4/CD8比值1.94(0.96,2.68)vs 1.85(1.30,2.67)、B细胞比例5.90%(3.09%,10.69%)vs 7.63%(6.67%,10.85%),差异均无统计学意义,但NK细胞比例8.61%(5.58%,16.15%)vs 21.96%(12.84%,36.47%)降低;肿瘤患者CD4^+T细胞、CD8^+T细胞上免疫检查点分子PD-1、lag-3、TIM-3的表达比例高于健康对照者,双阳耗竭CD4^+T比例增加,双阳耗竭CD8^+T比例差异无统计学意义;肿瘤患者CD4^+T细胞比例与PD-1^+CD4^+T细胞、双阳耗竭CD4^+T细胞比例均呈负相关性。结论恶性实体肿瘤患者外周血部分淋巴细胞比例紊乱,负性免疫检查点分子高表达、共表达,耗竭T细胞比例升高,对细胞免疫进行负性调控。免疫检查点分子的协同作用可能参与了肿瘤的发生发展。肿瘤患者免疫检查点抑制剂单药治疗无效的患者,多靶点联合治疗可能会取得更好的效果。

关键词：肿瘤免疫治疗耗竭T细胞 PD-1 lag-3 TIM-3

lag-3在非小细胞肺癌细胞中的异位表达及其临床意义

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LAG-3在非小细胞肺癌细胞中的异位表达及其临床意义

作者：马成龙南京医科大学

学位级别：硕士

背景:肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤,并且是癌症相关死亡的首要原因,超过85%的肺癌患者为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其5年生存率低至15.9%,在过去几十年中仅仅略有改善。随着新一代的测序技术(nextgeneration seq... 详细信息

背景:肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤,并且是癌症相关死亡的首要原因,超过85%的肺癌患者为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其5年生存率低至15.9%,在过去几十年中仅仅略有改善。随着新一代的测序技术(nextgeneration sequencing,NGS)、多基因肺癌小鼠模型、人类肿瘤数据库的建立等一大批技术的进步,我们对肺癌认识已经从组织病理学改变为对癌细胞精确分子特征和基因类型的解析。目前对NSCLC的主要治疗手段包括手术、放疗、化疗、靶向治疗等,虽然这些常规疗法取得了一定的效果,但NSCLC患者的预后仍未显著改善。随着肿瘤免疫学的发展,肿瘤免疫治疗已经成为一种新的治疗方法,最新的免疫治疗方法旨在通过阻断免疫检查点来靶向这些免疫耐受机制,以逆转功能性抑制的免疫应答,重新激活T细胞并促进抗肿瘤免疫。在过去几年中,针对细胞毒T淋巴细胞抗原4(Cytotoxic T lymphocyte antigen 4,CTLA-4)和程序性死亡受体1(programmed death 1,PD-1)抑制性受体的疗法已经在肺癌患者中显示出临床功效,除了CTLA-4和PD-1外,还有许多其他免疫检查点分子,包括T细胞免疫球蛋白-3(T cell immunoglobulin-3,TIM-3)、淋巴细胞活化基因3(lymphocyte-activation gene3,lag-3)和T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白(T cell immunoglobulin and ITIM domain,TIGIT)等,这就提供了可被利用的其他靶标来诱导抗肿瘤免疫反应的备选方案。lag-3(也称为CD223)是一种由498个氨基酸组成的I型跨膜蛋白,在各种类型的淋巴细胞上表达的免疫检查点分子,主要参与维持免疫稳态,并可与其他免疫检查点分子协同发生作用。lag-3位于与CD4基因相邻的12号染色体(12p13.32)上,其序列有大约20%与CD4同源,主要与抗原呈递细胞(antigen presenting cell,APC)中的主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHCII)分子结合,促进细胞凋亡,减少增殖。已显示lag-3结合4种配体:MHCII、LSECtin、Galectin-3和纤维蛋白原样蛋白1(Fibrinogen-like Protein 1,FGL1),FGL1是其主要抑制性配体,可以通过阻断FGL1-lag-3通路来诱导T细胞抑制功能和逃避免疫反应。lag-3参与抑制T细胞的功能,导致T细胞的衰竭,协同阻断lag-3和PD-1可以恢复T细胞功能。使用抗lag-3抗体和抗PD-1抗体组合免疫疗法可以促进肿瘤特异性应答,增加效应T细胞,比单抗体治疗毒性更低,并且具有更好的预后。因此lag-3不仅仅是一种有价值的评价预后的标志物,而且也是一种有前景的治疗靶点。目的:我们通过检测lag-3在肺癌中的表达情况,并且进一步分析其临床意义。方法:通过实时荧光定量PCR、Western blot、流式细胞术、免疫组化检测肺癌细胞和肺癌组织上lag-3的表达。结果:肺癌细胞株上表达lag-3分子,免疫组化证实肺癌手术标本异位表达lag-3。结论:我们的研究发现NSCLC患者中lag-3不仅仅在肿瘤浸润淋巴细胞上表达,也在肿瘤细胞上异位表达,并与TNM分期相关。

关键词： lag-3 非小细胞肺癌异位表达肿瘤免疫治疗

Th1、Th2细胞标志物-CD30和lag-3检测的意义

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肾脏病与透析肾移植杂志 1998年第1期7卷 50-55页

作者：刘俊铎南京军区南京总医院解放军肾脏病研究所

Ｔｈ１、Ｔｈ２细胞标志物－ＣＤ３０和ＬＡＧ－３检测的意义刘俊铎综述刘志红审校关键词辅助性Ｔ细胞细胞标志物检测免疫性疾病根据产生的细胞因子特性不同，小鼠及人类的ＣＤ４＋细胞［辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ）］，可分为Ｔｈ１、Ｔｈ２... 详细信息

Ｔｈ１、Ｔｈ２细胞标志物－ＣＤ３０和ＬＡＧ－３检测的意义刘俊铎综述刘志红审校关键词辅助性Ｔ细胞细胞标志物检测免疫性疾病根据产生的细胞因子特性不同，小鼠及人类的ＣＤ４＋细胞［辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ）］，可分为Ｔｈ１、Ｔｈ２和Ｔｈ０三种。能分泌白介素（ＩＬ）...

关键词：辅助性T细胞免疫性疾病 CD30 lag-3