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贵阳市家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性现状与kdr（l1014f）等位基因频率分析

寄生虫与医学昆虫学报 2016年第4期23卷 218-223页

作者：杨茜张亮杨迅程金芝吴渊明刘鉴吴家红贵州医科大学人体寄生虫学教研室贵阳550025 湖北医药学院湖北十堰442000

探讨贵阳市区家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性水平与kdr等位基因上的l1014f点突变频率相关性，为贵阳市科学合理使用卫生杀虫剂控制家蝇提供科学依据。本研究采用WHO推荐的微量点滴法进行抗性测定。结果显示贵阳市4城区家蝇对氯菊酯和... 详细信息

探讨贵阳市区家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性水平与kdr等位基因上的l1014f点突变频率相关性，为贵阳市科学合理使用卫生杀虫剂控制家蝇提供科学依据。本研究采用WHO推荐的微量点滴法进行抗性测定。结果显示贵阳市4城区家蝇对氯菊酯和高效氯氰菊酯的lD50分别为0．00620～0．013339μg／雌蝇、0．02298～0．03614μg／雌蝇，抗性系数分别为3．35～7．56、7．38—11．62。采用特异性等位基因PCR法测定基因频率，结果显示4城区家蝇种群的l1014f点突变频率在29％～37％。相关性分析显示l1014f点突变等位基因频率与高效氯氰菊酯lD50值之间存在直线相关。研究结果表明贵阳市家蝇对氯菊酯、高效氯氰菊酯已经产生了抗药性，击倒抗性是其抗性机理之一。

关键词：家蝇抗性 kdr l1014f PASA 拟除虫菊酯

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寡核苷酸探针法(PCR-ASO)检测家蝇kdr抗性相关的l1014f点突变

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寄生虫与医学昆虫学报 2006年第4期13卷 217-220页

作者：曹晓梅赵彤言董言德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为检测家蝇对拟除虫菊酯击倒抗性kdr等位基因上的l1014f点突变,采用了寡核苷酸探针法(PCR-AlleleSpecificOligonucleotideprobe,PCR-ASO),用于检测该点突变。对l1014位的上下游DNA进行PCR扩增,并将纯化产物平行点样在带正电荷的尼龙膜上... 详细信息

为检测家蝇对拟除虫菊酯击倒抗性kdr等位基因上的l1014f点突变,采用了寡核苷酸探针法(PCR-AlleleSpecificOligonucleotideprobe,PCR-ASO),用于检测该点突变。对l1014位的上下游DNA进行PCR扩增,并将纯化产物平行点样在带正电荷的尼龙膜上,用2条地高辛标记的特异性寡核苷酸探针,1条为敏感型,1条为突变型,与之杂交,根据显影的阳性信号判断待检样品的kdr等位基因型。该方法能区分敏感纯合子、抗性纯合子及杂合子,是检测家蝇kdr抗性的有用工具。

关键词： PCR-ASO 家蝇 l1014f kdr

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淡色库蚊kdr等位基因的突变与溴氰菊酯抗药关联性研究

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中国病原生物学杂志 2012年第12期7卷 920-923页

作者：刘宏美程鹏王海防刘丽娟代玉华赵玉强王怀位公茂庆山东省医学科学院山东省寄生虫病防治研究所山东济宁272033

目的了解山东省不同地区淡色库蚊成蚊对溴氰菊酯的抗药性水平及其kdr等位基因的突变与抗药性水平间的关联情况。方法采用PCR技术,使用特异性引物克隆不同地区野生淡色库蚊成蚊kdr基因序列,并进行基因测序。利用线性回归分析判断其突变... 详细信息

目的了解山东省不同地区淡色库蚊成蚊对溴氰菊酯的抗药性水平及其kdr等位基因的突变与抗药性水平间的关联情况。方法采用PCR技术,使用特异性引物克隆不同地区野生淡色库蚊成蚊kdr基因序列,并进行基因测序。利用线性回归分析判断其突变情况与抗药性的关联情况。结果成功克隆出kdr等位基因,通过基因序列分析发现在淡色库蚊钠通道第II结构域S6节段1014位点上存在2种突变,即l1014f:TTA突变为TTT,相应的亮氨酸(l)被苯丙氨酸(f)取代;l1014S:TTA突变为TCA,相应的亮氨酸(l)被丝氨酸(S)取代。以kdr基因l1014f和l1014S等位基因频率x与成蚊接触筒的存活率y建立的回归方程分别为y=1.130566x+0.34394(r2=0.811684,P<0.05)和y=2.919579x+1.06308(r2=0.997039,P<0.05)。结论淡色库蚊溴氰菊酯抗药性与kdr基因突变呈正相关,具体的抗药性机理亟待进一步研究。

关键词：淡色库蚊抗药性 l1014f l1014S 溴氰菊酯

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山东甜菜夜蛾抗药性监测及应用cPASA技术检测高效氯氰菊酯的抗性

山东甜菜夜蛾抗药性监测及应用cPASA技术检测高效氯氰菊酯的抗性

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作者：高明山东农业大学

学位级别：硕士

甜菜夜蛾（Spodoptera exigua (Hübner)是一种世界性农业害虫，近年来在山东地区频繁发生、危害严重，尤其是对蔬菜、棉花等经济作物。目前甜菜夜蛾的防治以化学防治为主，而长期单一的化学防治使甜菜夜蛾对许多杀虫剂产生了抗药性。... 详细信息

甜菜夜蛾（Spodoptera exigua (Hübner)是一种世界性农业害虫，近年来在山东地区频繁发生、危害严重，尤其是对蔬菜、棉花等经济作物。目前甜菜夜蛾的防治以化学防治为主，而长期单一的化学防治使甜菜夜蛾对许多杀虫剂产生了抗药性。本研究采用了浸叶法监测了山东的泰安、章丘、安丘、滕州和滨州五地区甜菜夜蛾种群对11种防治药剂的抗性。在监测中发现，传统的生物测定检测法存在着工作量大、不适于早期抗性检测等缺点，因此在明确甜菜夜蛾对菊酯抗性是与钠离子通道基因IIS6上亮氨酸到苯并氨酸突变（l1014f）紧密有关的基础上，设计了相应的竞争性等位基因PCR方案（cPASA），用于田间甜菜夜蛾对高效氯氰菊酯的抗性检测，并与浸叶法进行了相关性分析。主要结果如下：1、甜菜夜蛾的抗药性监测采用浸叶法测定了2011、2012年山东泰安、章丘、安丘、滕州和滨州五地区甜菜夜蛾种群对11种杀虫剂（氯虫苯甲酰胺、氟虫双酰胺、甲维盐、溴虫腈、多杀菌素、茚虫威、虫酰肼、甲氧虫酰肼、氟啶脲、高效氯氰菊酯和毒死蜱）的敏感性。结果表明：2011、2012年田间甜菜夜蛾各地种群对不同种类杀虫剂表现出不同抗性水平。氯虫苯甲酰胺和氟虫双酰胺是近年在甜菜夜蛾上使用的高效杀虫剂，对甜菜夜蛾有较高的毒力，lC50值均l。对氯虫苯甲酰胺安丘种群没有检测到抗性，其他四地区发现非常低到中等水平抗性，其中2012年滨州种群抗性最高，抗性倍数也仅为28.77倍。氟虫双酰胺抗性规律类似于氯虫苯甲酰胺，相比于2011年，甜菜夜蛾对这两种药剂抗性均有所上升。虽然在五地区均监测到甜菜夜蛾对甲维盐产生了非常低到中等水平抗药性，但甜菜夜蛾对甲维盐仍保持非常高的敏感性，lC50l。对溴虫腈两年均没有监测到抗性存在，抗性倍数RR200，这表明甜菜夜蛾对氟啶脲变得非常不敏感，不适于田间继续使用。对虫酰肼抗性倍数RR介于52.03-125.87，对甲氧虫酰肼抗性倍数RR介于131.25-675.00。对拟除虫菊酯高效氯氰菊酯的抗性，2011年抗性倍数为54.88-183.77，2012年抗性倍数为62.23-146.82，其中滕州、泰安、章丘和安丘表现出缓慢下降趋势，这可能与菊酯药剂的使用减少有关。甜菜夜蛾对毒死蜱的抗性在监测五地区均表现出非常高水平的抗性，抗性倍数为106.29-349.51，虽然毒死蜱的抗性在监测药剂中不是最高的，但对甜菜夜蛾的敏感性最低，大部分地区的lC50>1000mg/l。监测地区杀虫剂选择压的不同和甜菜夜蛾的迁飞习性可能是造成甜菜夜蛾对不同药剂抗性水平差异的主要原因，此外不同地区的耕作制度和药剂之间的交互抗药性可能也是抗性产生原因。2、竞争性等位基因PCR检测高效氯氰菊酯的抗性以甜菜夜蛾的敏感种群和高效氯氰菊酯抗性种群为材料，通过对钠离子通道基因片段的序列分析，发现了与击倒抗性相关的亮氨酸到苯丙氨酸（l1014f）的突变，并建立（l1014f）突变的竞争性特异等位基因PCR检测技术（cPASA）。结果表明：敏感种群个体均没有发现突变等位基因，田间章丘种群92%个体具有l1014f突变（64%个体为l1014f突变纯合子，28%个体为l1014f突变杂合子），章丘种群经高效氯氰菊酯汰选5代后的抗性种群，25个体中均没有发现敏感型纯合子，这表明l1014f突变与甜菜夜蛾对拟除虫菊酯的抗性紧密相关。通过对5个田间种群150个个体基因型检测，发现l1014f等位基因频率与高效氯氰菊酯lC50呈正相关线性关系（Y=1.106X+0.079, R2=0.930,P=0.0080）。

关键词：甜菜夜蛾杀虫剂抗性监测 cPASA l1014f

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