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l-鼠李糖抑制乳腺癌细胞增殖的作用机制研究

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L-鼠李糖抑制乳腺癌细胞增殖的作用机制研究

作者：周阳宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的研究l-鼠李糖对乳腺癌细胞增殖的影响及潜在的作用机制。方法1.采用25、50和100mM的l-鼠李糖处理乳腺癌细胞,通过CCK-8法检测处理后乳腺癌细胞的存活率;2.通过细胞克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力的变化;3.蛋白免疫印迹实验检测... 详细信息

目的研究l-鼠李糖对乳腺癌细胞增殖的影响及潜在的作用机制。方法1.采用25、50和100mM的l-鼠李糖处理乳腺癌细胞,通过CCK-8法检测处理后乳腺癌细胞的存活率;2.通过细胞克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力的变化;3.蛋白免疫印迹实验检测GPX4,ACSl4和FTH1等铁死亡相关蛋白以及自噬相关蛋白表达的变化;4.利用流式细胞仪检测l-鼠李糖处理后的乳腺癌细胞脂质过氧化物含量的变化;5.通过蛋白免疫印迹实验检测l-鼠李糖对乳腺癌细胞Nrf2信号通路的影响;6.通过裸鼠体内成瘤实验,验证在体内l-鼠李糖对乳腺癌细胞的增殖是否具有抑制作用。结果1.由CCK-8细胞增殖实验和细胞克隆形成实验得出l-鼠李糖可以抑制乳腺癌细胞增殖;2.l-鼠李糖可以抑制GPX4、FTH1的表达,上调ACSl4表达,铁死亡抑制剂Fer-1和DFO可以逆转l-鼠李糖对FTH1表达的抑制作用;3.l-鼠李糖处理后乳腺癌细胞脂质过氧化物含量升高;4.l-鼠李糖可以诱导乳腺癌细胞发生自噬;5.l-鼠李糖可以抑制乳腺癌细胞Nrf2信号通路的激活;6.在体内实验中l-鼠李糖对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用。结论l-鼠李糖在体外和体内实验中均可以抑制乳腺癌细胞的增殖;l-鼠李糖可以调节乳腺癌细胞铁死亡相关蛋白的表达,诱导脂质过氧化反应的发生,从而导致其发生铁死亡;l-鼠李糖可以诱导乳腺癌细胞发生自噬;l-鼠李糖可以抑制乳腺癌细胞Nrf2信号通路的激活。

关键词： l-鼠李糖乳腺癌细胞增殖铁死亡

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芦丁水解液发酵法制备l-鼠李糖的工艺

食品与生物技术学报 2009年第4期28卷 532-534页

作者：李玉山西安惠丰生化集团股份有限公司陕西西安710075

利用发酵法从芦丁水解液中制备l-鼠李糖,选取酵母用量、发酵时间和发酵温度3个影响因素,采用均匀设计和T型关联度分析法进行了优化。得到最佳发酵工艺为:酵母用量为母液的3%,发酵时间为5 h,发酵温度为35℃,产品质量浓度为9.52 g/l。

关键词： l-鼠李糖发酵均匀设计 T型关联度分析

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酸酶法生产l-鼠李糖工艺的研究

酸酶法生产L-鼠李糖工艺的研究

作者：陈宏喜大连工业大学

学位级别：硕士

l-鼠李糖属单糖类,在工业生产及科学研究中,已经开展了广泛的应用。在应用上l-鼠李糖能够用来检测肠道的渗透性,亦也可用来作甜味剂,工业上主要用于生产香精香料和医药中间体,可食用。目前针对鼠李糖的制备工艺的报道较少,随着l-鼠李糖... 详细信息

l-鼠李糖属单糖类,在工业生产及科学研究中,已经开展了广泛的应用。在应用上l-鼠李糖能够用来检测肠道的渗透性,亦也可用来作甜味剂,工业上主要用于生产香精香料和医药中间体,可食用。目前针对鼠李糖的制备工艺的报道较少,随着l-鼠李糖销售量的不断增加,制备l-鼠李糖的工艺日渐增多。目前国内主要制备鼠李糖的方法是高压酸水解法,原料是芦丁,产物是槲皮素,副产物是l-鼠李糖,把l-鼠李糖作为槲皮素的副产品在研究。因此都不是最理想的制备方法。本文中所采用的方法是采用121℃酸水解和微生物酶解相结合的工艺,原料使用了价格较低廉的橙皮苷来进行研究。首先将橙皮柑置入硫酸浓度为3.2%酸解液中,在121℃下水解60min。底物水解为HMG,l-鼠李糖。葡萄糖以及l-鼠李糖-葡萄糖二糖混合物。再利用微生物产生的酶将二糖混合物酶解成l-鼠李糖和葡萄糖。接着微生物菌种除杂法去除掉体系的葡萄糖,将剩余混合物利用在甲醇中的溶解度不同进行分离。本文所采用的方法,已将橙皮柑的商业价值实现至最大化。水解副产品橙皮素和HMG也有一定的经济价值。通过生产,l-鼠李糖和HMG的纯度分别都能达到98%(HPlC外标法测定)。本文叙述了橙皮苷酸水解工艺和菌种黑曲霉产酶工艺(包括液体培养和固体培养)的研究、橙皮苷酶的诱导,酶解工艺和纯化结晶工艺等。运用液体培养的黑曲霉产出的酶活性比普通的固体培养酒精沉淀法高很多,而硫酸铵沉淀法和液体培养不仅比传统的酒精沉淀法更易保证安全,价格上也更为低廉,这种酸酶法制备l-鼠李糖可以运用到大生产当中去,使高纯度结晶的l-鼠李糖产业化成为可能。

关键词： l-鼠李糖橙皮苷酸水解酶解黑曲霉液体培养

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l-鼠李糖的制备及检测方法研究进展

安徽农业科学 2014年第18期42卷 5966-5968页

作者：高旭东郝宝成梁剑平陈士恩中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030

l-鼠李糖作为一种微量糖广泛分布于植物中,是食品加工中常用的甜味剂之一,还可用于生产香精香料。研究发现,l-鼠李糖还可以诱导酵母甘露聚糖提高在动物机体中α-甘露糖苷酶的活性,显示出良好的药用价值。一方面介绍了l-鼠李糖的制备方... 详细信息

l-鼠李糖作为一种微量糖广泛分布于植物中,是食品加工中常用的甜味剂之一,还可用于生产香精香料。研究发现,l-鼠李糖还可以诱导酵母甘露聚糖提高在动物机体中α-甘露糖苷酶的活性,显示出良好的药用价值。一方面介绍了l-鼠李糖的制备方法及应用的研究情况,另一方面根据l-鼠李糖的化学性质及测定原理,结合近年来l-鼠李糖含量检测研究领域中的最新研究成果,综述了l-鼠李糖的检测方法,并重点从薄层色谱发(TlC)、高效液相色谱法(HPlC)及二硝基水杨酸法(DNS)等几方面介绍l-鼠李糖的定性、定量检测方法,并对各种检测方法的优缺点进行了比较。

关键词： l-鼠李糖薄层色谱高效液相色谱二硝基水杨酸法

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芦丁水解过滤液制备l-鼠李糖工艺优化

生物技术 2023年第5期33卷 641-645页

作者：杨阳刘凯华毛华张良明杨景霞西安天一生物技术股份有限公司陕西西安710000

[目的]优选芦丁水解过滤液制备l-鼠李糖工艺。[方法]通过正交试验设计,以单位时间内葡萄糖发酵量为考察指标,筛选出发酵pH、酵母添加量、温度对发酵工艺的影响;以吸光度为指标,筛选出温度、活性炭用量、时间对脱色工艺的影响。[结果]最... 详细信息

[目的]优选芦丁水解过滤液制备l-鼠李糖工艺。[方法]通过正交试验设计,以单位时间内葡萄糖发酵量为考察指标,筛选出发酵pH、酵母添加量、温度对发酵工艺的影响;以吸光度为指标,筛选出温度、活性炭用量、时间对脱色工艺的影响。[结果]最佳发酵脱色工艺为:芦丁水解过滤液用氢氧化钡调pH值至5~7,过滤,滤液添加酵母1‰(m/v),30℃发酵14 h时,加3‰(m/v)活性炭,50℃搅拌90 min。[结论]对芦丁水解过滤液进行了有效利用,减少废水排放,优选的最佳发酵脱色工艺稳定可行,成本低,所得鼠李糖纯度≥98%。

关键词：芦丁 l-鼠李糖发酵脱色工艺优化

基于多糖组成和含量的3种基原黄精质量比较和识别研究

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中草药 2019年第10期50卷 2467-2473页

作者：陶爱恩杜泽飞赵飞亚夏从龙段宝忠大理大学药学院云南大理671000

目的通过定性与定量分析,结合化学计量学方法,比较黄精3种基原植物中多糖的组成和含量差异,为黄精药材质量评价提供参考。方法采用红外光谱法(FTIR)和柱前衍生化-HPlC(PMP-HPlC)法比较3种基原黄精中多糖的差异;采用紫外光谱法(UV)测定... 详细信息

目的通过定性与定量分析,结合化学计量学方法,比较黄精3种基原植物中多糖的组成和含量差异,为黄精药材质量评价提供参考。方法采用红外光谱法(FTIR)和柱前衍生化-HPlC(PMP-HPlC)法比较3种基原黄精中多糖的差异;采用紫外光谱法(UV)测定总多糖含量。结果 3种基原黄精多糖的IR平均光谱和二阶导数图谱差异明显,主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PlS-DA)及聚类分析(HCA)分析均可将3种基原的黄精加以区分;PMP-HPlC图谱显示3种基原黄精中多糖的单糖组成存在差异,共有成分为D-甘露糖、D-核糖、l-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-木糖、D-阿拉伯糖和l-岩藻糖;结果表明,所测样品多糖含量符合《中国药典》2015年版的要求。结论本研究所建立方法为黄精类药材的多糖组成研究和质量评价提供了新的参考。

关键词：黄精 D-甘露糖 D-核糖 l-鼠李糖 D-半乳糖醛酸 D-葡萄糖醛酸 D-半乳糖 D-葡萄糖 D-木糖 D-阿拉伯糖 l-岩藻糖红外光谱柱前衍生化紫外光谱质量评价

大肠杆菌44277(O2:K1)中rmlB基因功能

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微生物学报 2011年第9期51卷 1168-1176页

作者：丁卫平罗元明艾国民金城中国科学院微生物研究所北京100101

【目的】确定rmlB基因在大肠杆菌(O2:K1)l-型鼠李糖合成中的作用。【方法】将基因rmlB进行原核表达并测定酶活;用同源重组的方法将rmlB基因敲除,分析表型变化,并运用质谱,以及核磁共振等手段分析脂多糖O侧链的结构,以确定rmlB在O抗原合... 详细信息

【目的】确定rmlB基因在大肠杆菌(O2:K1)l-型鼠李糖合成中的作用。【方法】将基因rmlB进行原核表达并测定酶活;用同源重组的方法将rmlB基因敲除,分析表型变化,并运用质谱,以及核磁共振等手段分析脂多糖O侧链的结构,以确定rmlB在O抗原合成中的作用。【结果】成功对rmlB基因进行了表达并测定了重组蛋白的酶活,确定蛋白RmlB具有dTDP-D-glucose 4,6-dehydratase活性。成功构建了rmlB基因缺失突变株,对突变株进行表型分析发现突变株的表型与野生株相比无变化。对突变株分析发现突变株中的O抗原仍含有l-型鼠李糖,说明在该菌株中可能存在RmlB的同功能酶或者存在其它的l-型鼠李糖合成途径。【结论】rmlB基因编码的蛋白具有dTDP-D-glucose 4,6-dehydratase活性但此基因对于l-型鼠李糖的合成不是必需的。

关键词：大肠杆菌 l-鼠李糖合成

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以阿拉伯胶为原料提取分离l-阿拉伯糖

以阿拉伯胶为原料提取分离L-阿拉伯糖

作者：黄敏慧浙江大学

学位级别：硕士

l-阿拉伯糖作为一种功能性糖类,因能非竞争性抑制蔗糖吸收,所以在医药、食品行业具有巨大市场潜力。而在众多原料中,阿拉伯胶作为自然界中l-阿拉伯糖含量较高的天然产物,价格低廉易得。传统制备方法存在操作困难、有机溶剂用量大、成本... 详细信息

l-阿拉伯糖作为一种功能性糖类,因能非竞争性抑制蔗糖吸收,所以在医药、食品行业具有巨大市场潜力。而在众多原料中,阿拉伯胶作为自然界中l-阿拉伯糖含量较高的天然产物,价格低廉易得。传统制备方法存在操作困难、有机溶剂用量大、成本高等不足。为克服以上不足,本论文研发了一种以阿拉伯胶为原料提取分离高纯度l-阿拉伯糖的新工艺路线,即阿拉伯胶经稀硫酸水解、活性炭脱色、中和脱盐、醇沉结晶以及重结晶等步骤,制得纯度高达98%的l-阿拉伯糖产品。针对各工艺单元,重点对阿拉伯胶酸催化水解反应、吸附分离及结晶精制等关键步骤进行工艺参数优化及相关基础数据测定,为该工艺的工业化应用奠定基础。首先,作为制备工艺的首要步骤,酸水解条件的优化使水解液中l-阿拉伯糖的含量和收率均达到最佳水平,是保证后续分离纯化工艺重现性、降低分离消耗负荷及提升产品品质的关键。实验中,通过单因素变量法考察了时间、温度、pH、固液比等对水解的影响,得到较佳的水解条件为:0.1 mol/l硫酸溶液、固液比1:10(m/V)、90℃水解200 min左右。此时水解液中l-阿拉伯糖浓度约为34 g/l,占水解液固形物中的55%,水解率达81%以上(以阿拉伯胶中l-阿拉伯糖的平均含量为42%计)。其次,考察了活性炭吸附法对l-阿拉伯糖和其他糖类分离的可行性。通过静态吸附实验分别考察了活性炭于不同温度下对l-阿拉伯糖、D-半乳糖、l-鼠李糖各单组份的吸附平衡热力学,并进一步研究了模拟水解料液在活性炭固定床上的动态吸附行为。研究结果表明,上述单糖在活性炭上的吸附作用强弱为:l-鼠李糖>D-半乳糖>l-阿拉伯糖,模拟水解液的动态饱和吸附量分别为22.4mg/g、14.4 mg/g/220.3 mg/g,其中混合糖液的初始浓度为:28.5 mg/ml l-阿拉伯糖,1.3 mg/ml D-半乳糖,1.2 mg/ml l-鼠李糖,且3个床层体积的20%(V/V)乙醇水溶液能实现对固定床的完全再生。若采用活性炭对l-阿拉伯糖与D-半乳糖、l-鼠李糖进行分离,其效果并不很理想,为了增大活性炭柱的利用率,只利用其脱除水解液中色素等其他杂质,从而大大提高了水解液的处理量。此后,对料液进行中和脱盐后,通过结晶的方式实现单糖分离。最后,结晶作为工艺过程中必要的纯化手段,合适的结晶溶剂和温度显得尤为重要。因为过程中,最难将D-半乳糖从l-阿拉伯糖中分离开。因此本文先测定了l-阿拉伯糖和D-半乳糖于不同温度范围内在不同比例的甲醇或乙醇水溶液中的溶解度数据,并在此基础上对醇沉结晶、重结晶工段进行了参数优化。最终确定较佳的结晶工艺条件为:先采用85%(V/V)的乙醇溶液、固液比1:8(m/V),在加热回流条件下醇沉去除下层不溶胶状杂质,对上清液于4℃下进行低温结晶,可得到绝对纯度大于90%的l-阿拉伯糖粗品,批间平均回收率为63%。再采用相同的条件对粗品进行重结晶,可得到绝对纯度大于98%的最终产品,该步骤产品收率大于72%。整个工艺下来,以阿拉伯胶中含有42%的l-阿拉伯糖为基准,l-阿拉伯糖的收率为30%。若将整个结晶过程的母液均能套用至前一个工段,从而可进一步提高l-阿拉伯糖的收率。

关键词： l-阿拉伯糖阿拉伯胶水解吸附结晶 D-半乳糖 l-鼠李糖

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l-岩藻糖的合成研究及意外发现

L-岩藻糖的合成研究及意外发现

作者：卢崇敏陕西师范大学

学位级别：硕士

糖是生命体内重要的能源物质和结构物质,广泛存在于自然界,它与蛋白质、核酸并称为三大生命物质。随着生命科学的发展,糖的其它生物功能逐渐被人们所认识,糖生物学的研究取得了突飞猛进的发展。脱氧糖作为糖类化合物中的一大类,在生命... 详细信息

糖是生命体内重要的能源物质和结构物质,广泛存在于自然界,它与蛋白质、核酸并称为三大生命物质。随着生命科学的发展,糖的其它生物功能逐渐被人们所认识,糖生物学的研究取得了突飞猛进的发展。脱氧糖作为糖类化合物中的一大类,在生命体活动中有不可替代的作用。本论文起初的目标是探索以便宜易得的l-鼠李糖为原料快速合成l-岩藻糖糖模块的方法,为合成具有潜在抗肿瘤活性的六聚糖Globo-H提供必要的糖模块。我们采取的策略是将l-鼠李糖的端基和3位羟基选择性保护后,使其2,4位羟基同时翻转得到目标化合物。我们分别以SN2亲核取代反应和Mitsunobu反应对3-O-苄基-α-l-鼠李糖甲苷的2,4位羟基进行构型翻转,均没有得到预期产物。但在尝试经典的Mitsunobu反应过程中,通过改变反应条件,却意外得到了非常规的区域选择性和立体选择性产物。该产物的结构通过核磁共振谱和简单的Fischer酯化反应对照得以证实。我们在此条件下对底物及羧酸进行扩展,均得到了相似的结果。最后为了简化分离,我们还尝试了在鼠李糖端基引入氟链,通过氟固相萃取分离法(F-SPE)分离Mitsunobu产物。综上所述,本论文主要包括以下三个方面的工作： (1)参照已有文献,以l-鼠李糖为原料合成l-岩藻糖及其糖模块;(2)设计新路线,以l-鼠李糖为原料,以3-0-苄基-α-l-鼠李糖甲苷的2,4位羟基构型同时翻转为关键步骤,经3-4步快速合成新的l-岩藻糖糖模块,没有得到预期化合物;(3)用Mitsunobu反应构建了具有特殊区域选择性和立体选择性的l-鼠李糖糖模块,并进行了底物扩展和分离条件及反应机理的简单探索。

关键词： l-鼠李糖 l-岩藻糖糖模块区域选择性酰化 Mitsunobu反应