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利多卡因对大鼠海马CA1区锥体神经元l-型Ca^2＋通道开放功能的影响

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中华麻醉学杂志 2007年第10期27卷 903-906页

作者：张庆国徐世元雷洪伊许睿周建粱启波南方医科大学附属珠江医院麻醉科 510282

目的研究不同浓度利多卡因对大鼠海马CA1区锥体神经元l-型Ca^2＋通道开放功能的影响。方法成年SD大鼠,体重200～250 g,雌雄不拘。麻醉后迅速断头取脑,采用酶加机械分离的方法急性分离海马CA1区锥体神经元。配制利多卡因溶液,终浓度依次... 详细信息

目的研究不同浓度利多卡因对大鼠海马CA1区锥体神经元l-型Ca^2＋通道开放功能的影响。方法成年SD大鼠,体重200～250 g,雌雄不拘。麻醉后迅速断头取脑,采用酶加机械分离的方法急性分离海马CA1区锥体神经元。配制利多卡因溶液,终浓度依次为2、4、8、16、32μg/ml。选取活力好的细胞,采用膜片钳细胞贴附模式单通道记录技术,依次记录l-型Ca^2＋通道在不同浓度利多卡因作用下单通道的开放时间,并计算开放概率,共观察和记录7个锥体神经元。结果利多卡因对大鼠海马CA1区锥体神经元l-型Ca^2＋单通道功能的影响呈浓度依赖性：与未加利多卡因比较,2和4μg/ml利多卡因对l-型Ca^2＋单通道的功能无明显影响,8和16μg/ml利多卡因使l-型Ca^2＋单通道开放时间延长,开放概率增加（P〈0.05）;32μg/ml利多卡因使l-型Ca^2＋单通道开放时间缩短,开放概率降低（P〈0.05）。结论2和4μg/ml利多卡因对大鼠海马CA1区锥体神经元l-型Ca^2＋单通道无明显影响;8和16μg/ml时有增强作用;32μg/ml时有抑制作用。

关键词：利多卡因海马神经元钙通道 l-型

l-型钙通道电流在D型钠尿肽抑制豚鼠胃动力中的作用

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山东医药 2013年第5期53卷 4-7页

作者：郭莉李萍邱阳刘越坚贺守城法欣欣郭慧淑大连医科大学附属第一医院辽宁大连116011

目的探讨l-型钙通道电流在D型钠尿肽(DNP)抑制豚鼠胃动力中的作用及机制。方法制作豚鼠胃窦部环形肌肌条后,用多道生理记录仪记录环形肌自发性收缩活动;分离环形肌细胞后,用膜片钳记录细胞l-型钡电流(IBa),以IBa代表钙电流;观察不同抑... 详细信息

目的探讨l-型钙通道电流在D型钠尿肽(DNP)抑制豚鼠胃动力中的作用及机制。方法制作豚鼠胃窦部环形肌肌条后,用多道生理记录仪记录环形肌自发性收缩活动;分离环形肌细胞后,用膜片钳记录细胞l-型钡电流(IBa),以IBa代表钙电流;观察不同抑制剂预处理后,10 nmol/l DNP对IBa的影响。结果 1、10、100 nmol/lDNP抑制豚鼠胃窦环形肌自发性收缩的幅度分别为(35.00±7.00)%、(54.00±8.00)%、(78.00±13.00)%,呈明显的剂量依赖性(r=0.923,Pl/l DNP抑制豚鼠胃窦环形肌细胞上IBa分别为(60.12±2.02)%、(57.12±3.02)%、(42.12±3.16)%。用鸟苷酸环化酶抑制剂lY83583预处理后,10 nmol/l DNP对IBa的抑制作用由预处理前的(67.12±4.02)%减弱为(88.03±4.15)%;用cGMP依赖的蛋白激酶G抑制剂KT5823预处理后,几乎完全阻断了10 nmol/l DNP引起的IBa抑制作用;而用cGMP敏感的磷酸酯酶抑制剂zaparinast预处理后,10 nmol/l DNP对IBa的抑制作用由预处理前的(67.12±4.02)%增强至(53.00±4.23)%。结论 DNP能明显抑制豚鼠胃窦环形肌自发性收缩,其作用机制可能与pGC-cGMP-PKG通路有关。

关键词：钙通道 l-型钠尿肽 D型胃肠活动豚鼠

利多卡因对大鼠海马神经元l-型Ca^(2+)通道电流的影响

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临床麻醉学杂志 2007年第7期23卷 599-600页

作者：张庆国徐世元雷洪伊南方医科大学附属珠江医院麻醉科广州市510282

目的观察不同浓度利多卡因对成年大鼠海马CA1区锥体细胞l-型Ca2+通道电流的影响,以探讨其对中枢神经的作用。方法采用酶加机械分离的方法,急性分离成年大鼠海马CA1区锥体细胞。运用膜片钳细胞贴附模式技术,记录0、2、4、8、16、32μg/m... 详细信息

目的观察不同浓度利多卡因对成年大鼠海马CA1区锥体细胞l-型Ca2+通道电流的影响,以探讨其对中枢神经的作用。方法采用酶加机械分离的方法,急性分离成年大鼠海马CA1区锥体细胞。运用膜片钳细胞贴附模式技术,记录0、2、4、8、16、32μg/ml的利多卡因对l-型Ca2+通道电流幅度和电导的影响。结果不同浓度的利多卡因不影响单通道的单一电流幅度,也不影响l-型Ca2+通道的单通道电导。低浓度利多卡因(2、4μg/ml)对l-型Ca2+通道的整体平均电流无明显影响;浓度为8、16、32μg/ml时,整体平均电流分别为(0.80±0.09)、(0.67±0.07)、(0.37±0.05)pA(与对照浓度比较,Pl-型Ca2+通道电流,随着浓度的增加表现为先兴奋后抑制。

关键词：利多卡因 l-型 Ca2+通道电生理学

聚合酶链反应和改良抗酸染色诊断l型结核杆菌感染

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第四军医大学学报 2000年第2期21卷 198-199页

作者：邹菊贤刘茂贤齐为民郭天程金发光第四军医大学唐都医院检验科陕西西安710038 解放军451医院

目的　探讨 l 型抗酸菌的 IK染色和 PCR检测的临床应用价值 .方法　采用 IK染色和 PCR技术 ,对结核病患者(35例 )、非特异性淋巴结炎患者 (30例 )和正常胎儿 (1 0例 )的石蜡切片进行对比研究 .结果　两种方法 (PCR和 IK染色 )对上述 3组... 详细信息

目的　探讨 l 型抗酸菌的 IK染色和 PCR检测的临床应用价值 .方法　采用 IK染色和 PCR技术 ,对结核病患者(35例 )、非特异性淋巴结炎患者 (30例 )和正常胎儿 (1 0例 )的石蜡切片进行对比研究 .结果　两种方法 (PCR和 IK染色 )对上述 3组 75例的检测阳性率分别为 80 % ,83% ;6 7% ,6 0 %及 0 % .结论　 PCR技术及 IK染色 ,检测抗酸菌 l

关键词：结核病诊断 PCR l-型聚合酶链反应抗酸染色

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自牛乳中分离l—型分枝杆菌

国外兽医学（畜禽传染病） 1991年第2期11卷 50-50页

作者： Г.,МИ 谢敏康

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酶法反应液中谷氨酰胺的提取工艺研究

食品与发酵工业 2004年第12期30卷 77-79页

作者：刘金山段作营毛忠贵江南大学工业生物技术教育部重点实验室

根据谷氨酸和谷氨酰胺的电离常数的差异,针对谷氨酰胺酶法反应液的性质,采用单根强碱性阴离子Cl-型拄,从酶法反应液中提取谷氨酰胺。经预处理、脱色、离交分离、浓缩结晶,反应液中谷氨酰胺总提取收率为519%,纯度为968%,谷氨酸去除率964%。

关键词：谷氨酰胺酶酶法谷氨酸提取工艺 l-型分离研究反应液提取收率浓缩结晶

霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的细胞形态研究——活的非可培养状态细胞

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青岛海洋大学学报（自然科学版） 1997年第2期27卷 187-190页

作者：徐怀恕黄备祁自忠王祥红纪伟尚青岛海洋大学海洋生物系美国马里兰大学微生物系

使用透射电镜和萤光抗体染色，对处于可培养和活的非可培养状态的霍乱弧菌进行了细胞形态结构比较研究。结果表明：处于非可培养状态的霍乱菌细胞，体积明显地缩小，形态由弧形变成了球形，我们共观察了３８２个非可培养状态的细胞，发... 详细信息

使用透射电镜和萤光抗体染色，对处于可培养和活的非可培养状态的霍乱弧菌进行了细胞形态结构比较研究。结果表明：处于非可培养状态的霍乱菌细胞，体积明显地缩小，形态由弧形变成了球形，我们共观察了３８２个非可培养状态的细胞，发现它们的细胞壁都是完整的，即不是细菌－Ｌ型。

关键词：霍乱弧菌培养状态细胞形态 l-型芽孢

gltB影响金黄色葡萄球菌持留菌形成的机制研究

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gltB影响金黄色葡萄球菌持留菌形成的机制研究

作者：包婷瑞兰州大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是人类化脓感染中最常见的病原菌,可产生多种毒力因子,既能引起局部皮肤或组织的化脓性感染,也可以引起内脏器官甚至危及全身的感染。持留菌(Persister)是细菌群体中一小部分对抗生素不敏感的细... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是人类化脓感染中最常见的病原菌,可产生多种毒力因子,既能引起局部皮肤或组织的化脓性感染,也可以引起内脏器官甚至危及全身的感染。持留菌(Persister)是细菌群体中一小部分对抗生素不敏感的细菌亚群,本质是细菌的一种休眠状态,在这种状态下可以逃避抗菌药物的杀伤以及宿主免疫应答。本实验室在前期的研究中得到了谷氨酸合酶大亚基基因(Glutamate synthase,large subunit gene,gltB)的敲除株,并且发现由于gltB的缺失会导致金黄色葡萄球菌持留菌和l-型、色素形成能力降低。目的:探究gltB影响金黄色葡萄球菌Newman株持留菌形成、细胞壁合成以及金黄色色素合成的分子机制,为金黄色葡萄球菌持留菌的防控提供新的药物靶点。方法:1.微量肉汤稀释法测定多种抗菌药物对金黄色葡萄球菌Newman株与ΔgltB株的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration,MBC)。2.不同抗菌药物(氨苄青霉素、左氧氟沙星)暴露试验测定Newman株与ΔgltB株在培养的不同时间点的持留菌形成状况;Newman株、ΔgltB株、外源补充谷氨酸的ΔgltB株的持留菌形成状况。3.测定WT::pRAB11、ΔgltB::pRAB11、ΔgltB::pRABgltB在脱水四环素诱导下的生长曲线以及对热、酸、氧化剂以及饥饿的抵抗能力;不同抗菌药物(氨苄青霉素、诺氟沙星、庆大霉素、万古霉素)暴露试验测定三菌株的持留菌形成状况。4.收集Newman株与ΔgltB株培养至48h的菌体沉淀进行转录组学测序(RNA-seq)及生物信息学分析。Q-PCR验证结果。5.观察Newman株、ΔgltB株、外源补充组氨酸的ΔgltB株在抗菌药物(氨苄青霉素、左氧氟沙星)的作用下持留菌形成情况。Q-PCR测定在不同时间点下Newman株与ΔgltB株中相关基因的表达水平。6.将Newman株、ΔgltB株以及外源补充谷氨酸、组氨酸的ΔgltB株培养至18h的菌液接种至l-型诱导培养基,观察四种菌液的l-型形成能力。7.通过透射电子显微镜(Transmission electron microscope,TEM)观察金黄色葡萄球菌Newman株与ΔgltB株的菌细胞超微结构;选用原子力显微镜(Atomic force microscope,AFM)检测两种菌株的生物力学特性。Q-PCR测定Newman株与ΔgltB株中相关基因的表达水平。8.收集培养6h和48h在脱水四环素诱导下的WT::pRAB11、ΔgltB::pRAB11、ΔgltB::pRABgltB三种菌株沉淀,比较色素形成的差异,测定金黄色色素含量;Q-PCR测定相关基因在三种菌株中的表达水平。结果:1.相较于Newman株,ΔgltB株对多种抗菌药物的MIC和MBC更低,ΔgltB株对抗菌药物更加敏感。***株与ΔgltB株的48h培养物比较,在氨苄青霉素和左氧氟沙星作用下,ΔgltB株持留形成能力明显降低,表现为药物作用下分别在8d和6d无活菌存在,而Newman株仍有活菌存在。外源补充谷氨酸之后,ΔgltB株对氨苄青霉素和左氧氟沙星的耐受力明显增强,表现为在氨苄青霉素的作用下,ΔgltB株在9d左右已无活菌存在,而补充谷氨酸的ΔgltB株仍有10CFU/m l左右活菌数存在;在左氧氟沙星的作用下,ΔgltB株在7d左右已无活菌存在,补充谷氨酸的ΔgltB株与Newman株在10d左右全部死亡。3.在脱水四环素诱导下的WT::pRAB11、ΔgltB::pRAB11、ΔgltB::pRABgltB在16h前的生长速度慢于无诱导剂培养的WT::pRAB11。WT::pRAB11对热、酸、氧化剂以及饥饿抵抗力强于ΔgltB::pRAB11;回补gltB后ΔgltB株部分恢复了对上述压力的抵抗。在培养至3h时,WT::pRAB11、ΔgltB::pRAB11、ΔgltB::pRABgltB对(氨苄青霉素、诺氟沙星、庆大霉素、万古霉素)均敏感;培养至24h、48h和72h时,WT::pRAB11对四种抗菌药物的耐受性均显著强于ΔgltB::pRAB11,回补gltB后,ΔgltB::pRABgltB对四种抗菌药物的耐受性恢复。***-seq结果显示,ΔgltB株相较于Newman株共筛选出184个差异表达基因(Differentially Expressed Genes,DEGs),其中上调8个,下调176个。DEGs主要分布于组氨酸代谢、微生物代谢、群体感应、ABC转运系统、次级代谢产物的生物合成

关键词：金黄色葡萄球菌谷氨酸合酶大亚基(gltB) 持留菌 l-型细胞壁金黄色色素组氨酸

结核分枝杆菌“不均一耐药株”的形态学变异及细胞壁缺陷

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国际结核病与肺部疾病杂志 2006年第2期1卷 85-91页

作者： l.Michailova V. Kussovski T Radoucheva M.Jordanova W.Berget H.Rinder N.Markova 张宗德张立兴 Institute of MicrobioIogY Bulgarian Academy of Sciences.SofiaBulgaria Department of Infectious Diseases and TropicaI Medicine.University of Munich.Munich Bavaria Department of Health and Food safety Oberschleissheim Germany

地点:保加利亚索非亚国立结核病治疗医院;目的:研究2株“不均一耐药”临床分离株和1株非“不均一耐药”分离株的形态学。所有分离株均来自新诊断的结核病人(TB),以及参考株H37Rv。不均一耐药分离株包含克隆相关的敏感菌和耐药菌,它们进... 详细信息

地点:保加利亚索非亚国立结核病治疗医院;目的:研究2株“不均一耐药”临床分离株和1株非“不均一耐药”分离株的形态学。所有分离株均来自新诊断的结核病人(TB),以及参考株H37Rv。不均一耐药分离株包含克隆相关的敏感菌和耐药菌,它们进一步用含药初代培养和最初来自用1%比例法诊断为敏感的结核病例菌株。分枝杆菌在Dubos液体培养基培养25天后用透射电镜观察。结果:和H37Rv、非“不均一耐药”株相比,2株“不均一耐药”分离株具有明显的多形性变异,经典型和细胞壁缺陷型同时存在。链霉素和异烟肼耐药突变株在电镜下主要表现为不典型颗粒状的l-形状,构成Dubos培养基上的l-型菌落。结论:包含不同耐药基因型的混合结核分枝杆菌群临床不均一耐药分离株和耐药突变株克隆均可观察到l-型的转化过程,提示细胞壁缺陷的l-期状态和耐药可能相关,也提示可能是耐药突变株能在体内存活的机制之一。

关键词：结核分枝杆菌 l-型不均一耐药