检索结果-南通市图书馆

中国医院药学杂志 2012年第22期32卷 1816-1819页

作者：刘燕婕邱文杰陈茜璐丁虹长江航运总医院武汉脑科医院检验科湖北武汉430010 武汉大学药学院湖北武汉430072

目的:研究维拉帕米(VER)对Th17/Treg细胞因子的效应作用。方法:用酶联免疫吸附试验(ELASA)法检测VER对脂多糖(LPS)激活的体外培养的人外周血淋巴细胞分泌Th17/Treg细胞因子的影响,观察VER对淋巴细胞增殖的效应。结果:正常儿童外周血淋... 详细信息

目的:研究维拉帕米(VER)对Th17/Treg细胞因子的效应作用。方法:用酶联免疫吸附试验(ELASA)法检测VER对脂多糖(LPS)激活的体外培养的人外周血淋巴细胞分泌Th17/Treg细胞因子的影响,观察VER对淋巴细胞增殖的效应。结果:正常儿童外周血淋巴细胞经脂多糖(LPS)激活后IL-17、IL-6和TGF-β1含量较未激活组显著增加(P0.05),与激活组比较显著降低(Pkv1.3通道阻断剂VER在体外可通过对人外周血淋巴细胞的直接作用,调节T淋巴细胞增殖、分化,使Th17/Treg细胞因子分泌发生改变。因此,推测T细胞膜kv1.3钾离子通道可能为治疗自身免疫疾病的作用靶点之一。

关键词：维拉帕米 kv1.3通道阻断剂 Th17/Treg细胞因子效应机制

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

穿膜肽—融合蛋白dNP2-ImKTx88的表达纯化与功能探究

穿膜肽—融合蛋白dNP2-ImKTx88的表达纯化与功能探究

引用

作者：毛文倩武汉大学

学位级别：硕士

背景:kv1.3通道阻断剂被广泛用于多种人类疾病治疗的研究。然而,相比于小分子药物,具有更高选择性的多肽类kv1.3通道阻断剂往往不具备跨血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)的能力。BBB,作为复杂的天然屏障,主要负责维持中枢神经系统(Cen... 详细信息

背景:kv1.3通道阻断剂被广泛用于多种人类疾病治疗的研究。然而,相比于小分子药物,具有更高选择性的多肽类kv1.3通道阻断剂往往不具备跨血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)的能力。BBB,作为复杂的天然屏障,主要负责维持中枢神经系统(Central nervous system,CNS)的稳态。该屏障一方面保护着机体,另一方面却限制了许多药物在CNS中发挥治疗作用的可能性。因此,寻找协助功能性分子穿过BBB的转运载体至关重要。研究表明,细胞穿膜肽(Cell penetrating peptides,CPPs)能携带多种大分子物质进入细胞或组织中,其中包括多肽。而dNP2作为一种新型CPP,有着比经典CPP更高的转运效率。在本课题组的前期研究工作中,我们筛选得到了高选择性的kv1.3通道阻断剂多肽ImKTx88,或简称ImK。它能够通过抑制T细胞的活化来有效改善多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)动物模型,实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠的疾病症状。然而随着疾病的缓解和BBB的修复,多肽ImK无法继续进入CNS发挥抗炎作用。本研究将利用dNP2,构建和表达同时具有跨BBB潜能和抗炎功能的kv1.3通道阻断剂多肽dNP2-ImK,为kv1.3通道阻断剂在CNS疾病的应用与CPPs在药物递送系统的应用提供理论基础和实验依据。目的:构建具有跨BBB潜能的kv 1.3通道阻断剂dNP2-ImK,比较dNP2-ImK与ImK在细胞穿膜能力、跨BBB潜能和抗炎能力上的差异。方法:(1)以含有ImK基因序列的pEGX-6p-1质粒为模板,利用PCR引物获得dNP2-ImK的基因序列。通过双酶切连接反应构建原核基因表达载体pEGX-6p-1-dNP2-ImK,并对阳性克隆进行筛选与测序鉴定。(2)将测序结果正确的重组载体转化至表达菌种***/Rosetta(DE3)中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导、超声破碎、GST亲和层析、超滤浓缩、酶切反应、高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)纯化、冻干得到纯化的多肽dNP2-ImK。取少量蛋白样品通过Tricine-SDS-PAGE来反映蛋白表达的过程,并通过质谱来精确测定重组多肽的分子量。(3)体外培养293T细胞,将mkv1.3质粒转染至细胞中,利用全细胞膜片钳技术检测dNP2-ImK对kv1.3电流的影响,探究其对kv1.3通道的作用。分离大鼠外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),体外给予刺激剂刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)激活并提前加入不同浓度的dNP2-ImK(100pM,1nM,10nM,100nM)干预。酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测dNP2-ImK对炎性细胞因子IL-2、IFN-γ和IL-17A的分泌的影响。同样条件下,使用10nM ImK和10nM dNP2-ImK分别干预,实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和ELISA检测ImK和dNP2-ImK对炎性细胞因子IL-2、IFN-γ和IL-17A基因和蛋白水平表达的影响。进而评估ImK和dNP2-ImK的抗炎能力。(4)体外培养人脑微血管内皮细胞(Human brain microvascular endothelial cell,HBMEC)。实验分组,Ctrl组、Dye组、Dye-ImK组、Dye-dNP2-ImK组。分别用含有0.5%DMSO的PBS、1 μM Dye、1 μM Dye-ImK、1 μM Dye-dNP2-ImK 处理 HBMEC 4h。经多聚甲醛固定、Hoechst33258染色后,利用共聚焦显微镜检测细胞中的荧光密度。进而评估ImK和dNP2-ImK的细胞穿膜能力。同时,将HBMEC铺于0.4μm孔径的Transwell小室上层,下层加入PBS。待细胞完全贴壁后,分别加入含有0.5%DMSO的PBS、1μMDye、1μM Dye-ImK、1μMDye-dNP2-ImK处理24h。后收集下室液体,检测下室溶液的荧光情况。进而评估ImK和dNP2-ImK的跨BBB潜能。(5)体外分别培养HBMEC、293T、原代大鼠星形胶质细胞、大鼠PBMC。实验分组:Ctrl组、药物处理组。各组细胞分别

关键词：细胞穿膜肽血脑屏障 kv1.3通道阻断剂

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：