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西安交通大学学报（医学版） 2013年第3期34卷 287-290,312页

作者：张静魏峰王亭忠倪雅娟马爱群新疆医科大学附属中医医院心脏病中心新疆乌鲁木齐830000 西安交通大学医学院第一附属医院心内科陕西西安710061

目的动态观察在体内心肌缺血微环境下,大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌细胞分化过程中主要钾离子通道的分化表达。方法采用左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)结扎术建立大鼠急... 详细信息

目的动态观察在体内心肌缺血微环境下,大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌细胞分化过程中主要钾离子通道的分化表达。方法采用左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)结扎术建立大鼠急性心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型(n=60),将绿色荧光蛋白(green fluorescent pro-tein,GFP)标记的MSCs,心外膜下注射移植到心肌梗死周边区;免疫荧光染色观察移植后3d(MI-3d组)、5d(MI-5d组)、7d(MI-7d组)、9d(MI-9d组)MSCs的存活情况及其主要钾离子通道(Kv1.4、Kir2.1、Kv4.3、kca1.1)蛋白的表达;应用激光捕获显微切割技术分离以上各组心肌组织中GFP标记的MSCs群,应用Real-time PCR测定其Kv1.4、Kir2.1、Kv4.3、kca1.1的mRNA表达。结果免疫荧光染色观察到移植的MSCs于移植后第3天开始持续表达Kv1.4、Kir2.1、Kv4.3,不表达kca1.1,于移植后第9天几乎未观察到MSCs;Real-time PCR结果显示移植后3、5、7d,移植的MSCs上Kv1.4和Kir2.1表达呈逐步增多趋势,差异具有统计学意义(P<0.05),Kv4.3的表达无此变化趋势,但高于未移植MSCs,未见明显差异。结论移植的MSCs在大鼠体内心肌缺血微环境下向心肌细胞分化的过程中能够表达部分钾离子通道表型,但其不能长时间、有效的存活。

关键词：心肌梗死骨髓间充质干细胞移植钾离子通道 Kv1.4 Kir2.1 Kv4.3 kca1.1

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宿主因子KCNMA1影响流感病毒复制的机制研究

宿主因子KCNMA1影响流感病毒复制的机制研究

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作者：倪子欣中国农业科学院

学位级别：硕士

动物流感造成全球畜牧业的巨大经济损失,能够跨宿主屏障感染人类,引发严重的公共卫生问题,造成该疾病的病原为流感病毒。流感病毒在进化过程中不断发生变异,其基因组突变和重组会造成抗原漂移及抗原转变,获得感染更多新宿主的能力,持续... 详细信息

动物流感造成全球畜牧业的巨大经济损失,能够跨宿主屏障感染人类,引发严重的公共卫生问题,造成该疾病的病原为流感病毒。流感病毒在进化过程中不断发生变异,其基因组突变和重组会造成抗原漂移及抗原转变,获得感染更多新宿主的能力,持续产生出危害动物和人类健康的新病毒。也正是该特点使得针对病毒研制的疫苗需要随着病毒的进化而更新,靶向作用于病毒蛋白的药物逐渐产生耐药的问题。因此,完善病毒与宿主相互作用机制的研究对抗病毒显得尤为重要。本研究利用kca1.1的小分子拮抗剂Paxillines与特异性siRNA干扰技术相结合的方法,在A549与293T细胞系上对宿主因子KCNMA1分别进行功能抑制和下调表达处理,从而探究kca1.1对包括H1、H5、H7和H9亚型在内的六株流感病毒（WSN,GD1330,FJ1660,AH1,SD008-627K和SD007）复制情况的影响。结果表明,KCNMA1所编码的kca1.1能够帮助流感病毒在细胞上建立感染。为了探究宿主因子KCNMA1影响流感病毒生命周期的具体阶段,运用qPCR与影像技术在A549细胞系上分别评估H1、H5、H7和H9亚型流感病毒内吞效率,结果表明kca1.1能够帮助多种亚型流感病毒完成内化过程。流感病毒HA蛋白在病毒粒子内吞过程中发挥关键作用,为了进一步阐明kca1.1发挥作用的机制及相关通路,本研究利用免疫沉淀（IP）与shotgun质谱结合的方法筛选得到了与H5、H7亚型流感病毒HA蛋白相互作用的宿主膜蛋白,并对筛选得到的蛋白质数据库进行了基因本体论（GO）分析。同时也鉴定出在病毒感染情况下与kca1.1存在相互作用的宿主膜蛋白,为进一步揭示kca1.1帮助流感病毒完成内吞作用的机制提供了基础数据。关于流感病毒早期入侵宿主细胞的相关研究尚不完善,本研究揭示了宿主蛋白kca1.1能够影响多种亚型流感病毒的内化过程,丰富了流感病毒与宿主相互作用的生命周期网络,证明宿主因子KCNMA1有潜力作为新的药物靶点。

关键词：流感病毒 kca1.1 内化蛋白质组学

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