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knd0.9La0.1P4O12晶体中Nd3+离子光谱的强度

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中国科学技术大学学报 1984年第2期 205-210页

作者：徐彭寿夏上达高怡平洪广言中国科学技术大学物理系长春应化所

测量了室温下knd0.9La0.1P4O12中Nd3+离子的吸收谱。应用Judd-ofelt(J—O)理论得到三个强度参数Ωλ。计算了始于~4F3/2的辐射跃迁几率及激发态吸收线强。讨论了该晶体中Nd3+离子光谱的性质。

关键词：拟合数学分析晶体 P4O knd 离子 La

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knd（PO3）4单晶的生长和特性

人工晶体 1982年第Z1期 89-90页

作者：徐天华古开惠廖作惠黄毓林王乔蒲正刚成都西南技术物理所四川大学物理系四川大学物理系 77级毕业生

knd（PO3）4晶体是具有无中心空间群的高钕浓度激光材料,可能用于微小型激光器,并有二次非线性光学过程,或可直接用于激光实现线性电光调制。我们用助熔剂法生长 knd（PO3）4单晶。初始原料为 Nd2O3（3 N）,K2CO3（分析纯）和NH4H2PO4... 详细信息

knd（PO3）4晶体是具有无中心空间群的高钕浓度激光材料,可能用于微小型激光器,并有二次非线性光学过程,或可直接用于激光实现线性电光调制。我们用助熔剂法生长 knd（PO3）4单晶。初始原料为 Nd2O3（3 N）,K2CO3（分析纯）和NH4H2PO4（分析纯）,共温度程序为:

关键词：单晶 knd 晶形六角形 PO3

基于knd-10M数控系统MasterCAM 9.0后置处理的研究

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科技创新导报 2011年第4期8卷 98-99,101页

作者：陆春伟江苏省吴中职业教育中心江苏苏州215104

Mastercam通过绘制二维、三维图形生产刀具路径数据文件,然后根据它本身拥有后置处理文件生产NC数控程序。不同的后置处理文件会生成不同格式的NC程序,然而Mstercam中没有对应knd系统的后置处理文件。所以,本文将探讨Mastercam后置文件... 详细信息

Mastercam通过绘制二维、三维图形生产刀具路径数据文件,然后根据它本身拥有后置处理文件生产NC数控程序。不同的后置处理文件会生成不同格式的NC程序,然而Mstercam中没有对应knd系统的后置处理文件。所以,本文将探讨Mastercam后置文件的二次开发,使其自动生成的NC文件直接符合knd-10M数控系统编程格式。

关键词： Mastercam 后置文件 knd

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国产数控knd系列CNC

制造技术与机床 2001年第4期 44-44页

太平洋牡蛎cDNA文库的筛选及唾液酸醛缩酶的克隆表达与性质分析

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太平洋牡蛎cDNA文库的筛选及唾液酸醛缩酶的克隆表达与性质分析

作者：李玉泉南京农业大学

学位级别：硕士

新型细胞系的开发或基因组测序工作中,生物材料的获取是实验的关键,但由于企业保密性及特定国家海关规定等,一些样本获取会比较困难。无法继续获取具有参考价值的生物材料,会阻碍下一步研究的进行,也影响其对第三方的参考价值。例如,太... 详细信息

新型细胞系的开发或基因组测序工作中,生物材料的获取是实验的关键,但由于企业保密性及特定国家海关规定等,一些样本获取会比较困难。无法继续获取具有参考价值的生物材料,会阻碍下一步研究的进行,也影响其对第三方的参考价值。例如,太平洋牡蛎广泛分布于亚洲、澳大利亚和北美的太平洋沿岸,但单个太平洋牡蛎标本在遗传上具有多样性,不适合直接用作建立基因库的起始材料。在本文中,我们使用不同区域养殖的太平洋牡蛎作为样本,生成cDNA文库。以线粒体管家基因细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COX1)和NADH脱氢酶(ND)为参考,将得到的cDNA文库与公开基因库中的太平洋牡蛎基因组进行比较,选择最接近的文库,再用UDP-葡萄糖异构酶(UGE)、UDP-葡萄糖脱氢酶(UGD)、UDP-木糖合成酶(UXS)三种细胞核基因检验所选cDNA文库的准确性。唾液酸是一种出现在糖苷化合物末端的九碳糖,参与细胞和细胞、细胞与分子之间的识别,其合成与分解一直是研究的热点。N-乙酰神经氨酸醛缩酶(NPL)能催化N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)裂解成N-乙酰-甘露糖胺(ManNAc)和丙酮酸,是唾液酸循环的关键酶之一,这种酶一般出现在需要分解唾液酸的生物中。牡蛎的肝胰腺中发现了几种唾液酸水解酶,但一直没有关于唾液酸醛缩酶的报道。因此,我们拟从太平洋牡蛎中克隆疑似 N-乙酰神经氨酸醛缩酶基因,进行原核异源表达,并与人源的N-乙酰神经氨酸醛缩酶进行比较,推测其在牡蛎中的功能。最终,我们从太平洋牡蛎随机样本中筛选与NCBI基因组数据库参考序列最相似的样本,构建了 cDNA文库并克隆、表达了 N-乙酰神经氨酸醛缩酶,对其底物特异性进行了初步研究,发现其对KDO、KDN及其类似物具有活性,酶活位点是Lys174。具体研究成果如下:1.太平洋牡蛎cDNA文库的筛选选取有地域差异的牡蛎样品-辽宁丹东、山东青岛、江苏连云港、浙江宁波、福建东山岛、广东潮州。用TRIZOL法提取六种牡蛎中的RNA,反转录生成cDNA。设计引物克隆COXI、ND、UXS、UGE、UGD基因。COXI、ND测序结果表明除浙江样品的差异稍大,其他省份的样品的同源性都很高,辽宁和江苏的样品两个基因的相似度都达到了 100%。然后用细胞核基因UGE、UGD和UXS对所选进行检验,结果显示也是除了浙江省的样品外,相似度都在97.5%以上。因此,辽宁、江苏的cDNA文库可以用来作为克隆后续基因的模板。选取江苏cDNA为模板,成功克隆出了太平洋牡蛎的半乳糖激酶和N-乙酰氨基半乳糖激酶,其中N-乙酰氨基半乳糖激酶对N-乙酰葡萄糖胺、N-乙酰-D-甘露糖胺和N-乙酰半乳糖胺有较强活性。2.牡蛎中唾液酸醛缩酶的克隆表达及*** BL21菌株的改造以大肠杆菌唾液酸醛缩酶(EcNPL)基因为参考,在NCBI网站中检索到太平洋牡蛎中有4种疑似NPL序列。以前一章获得的江苏cDNA为模板克隆得到了 CgNPL-2、CgNPL-3和CgNPL-4,测序结果表明克隆的基因只有少量的氨基酸变异点。CgNPL-3、CgNPL-4在*** BL21中表达时,生成的是包涵体蛋白。CgNPL-1无法用克隆的方式获取,因此由生物公司合成,经*** BL21异源表达后,得到可溶性的酶,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后仍有较多杂蛋白。CgNPL-1以Neu5Ac为底物进行酶活验证时,只有少数情况下有产物生成,推测可能是大肠杆菌本身表达的NPL影响了活性验证的结果。因此使用双质粒CRISPR/Cas9技术来敲除大肠杆菌中NPL基因,经PCR法、Neu5Ac诱导法验证,大肠杆菌NPL基因敲除成功。将CgNPL-3导入敲除NPL基因的BL21中,该蛋白能够成功表达,说明NPL基因的敲除对BL21的蛋白表达能力没有显著影响。3.重组唾液酸醛缩酶酶的活性检测通过生物公司合成人源的N-乙酰神经氨酸醛缩酶(HsNPL)。对CgNPL-1氨基酸序列进行分析后得知,其Lys174可能是其活性位点,利用PCR法将该位点突变成丙氨酸。将HsNPL、CgNPL-1、突变后的CgNPL-1质粒导入敲除唾液酸醛缩酶基因的*** BL21中,Ni2+-NTA亲和层析柱去除大部分杂蛋白,以Neu5Ac、KDO、去氨基神经氨酸(KDN)及其类似物为底物,验证三种酶的活性。结果表明不同于HsNPL,CgNPL-1对Neu5Ac没有活性,但对KDO、KDN以及KDN类似物有活性。突变后的CgNPL-1活性消失,说明Lys174是其活性中心。

关键词： cDNA文库线粒体基因 N-乙酰神经氨酸醛缩酶 knd CRISPR/Cas9