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黄牛klf7、klf11和klf15基因的单核苷酸多态性及其与生长性状的关联研究

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黄牛KLF7、KLF11和KLF15基因的单核苷酸多态性及其与生长性状的关...

作者：马亮西北农林科技大学

学位级别：硕士

调节能量代谢的基因具有影响家养动物生长的潜力,基因的多态性同样具有此效应。klf家族(Kruppel-like factors)是真核生物中广泛存在的一类基础转录元件结合蛋白(BTEP),通过羧基端三个连续锌指构成的保守结构域结合靶基因启动子内富含G... 详细信息

调节能量代谢的基因具有影响家养动物生长的潜力,基因的多态性同样具有此效应。klf家族(Kruppel-like factors)是真核生物中广泛存在的一类基础转录元件结合蛋白(BTEP),通过羧基端三个连续锌指构成的保守结构域结合靶基因启动子内富含GC的序列以调控其转录,进而调控各类细胞的增殖分化和组织发育。本研究致力于检测编码klf转录因子家族中相关基因的单核苷酸多态性(SNPs),并分析了SNPs与黄牛生长性状的相关性。本研究采用PCR-RFLP、PCR-SSCP和DNA测序技术,检测了南阳牛、秦川牛、郏县红牛和中国荷斯坦牛共4个群体1045个个体的五个与能量代谢调控相关基因(klf4、klf5、klf7、klf11和klf15)的遗传变异,分析了其在4个牛群体的遗传结构和遗传多样性,并对四个群体在上述基因位点的单核苷酸多态性与其生长性状进行了相关分析,以检验这些基因对4个黄牛群体生长发育的遗传效应,并对具有显著相关的候选基因进行了实时定量分析,以期发现对重要经济性状具有显著效应的遗传标记,为中国黄牛的高效选育和分子标记数据库的建立、种质资源保存与利用提供遗传学依据。本研究共扫描了五个klf家族基因(klf4、klf5、klf7、klf11和klf15)的17个位点,然而仅在三个基因(klf7、klf11和klf15)的五个位点有多态性,这与klf转录因子家族在进化中的高保守性和重要功能一致。 1. klf7基因多态性及其与南阳牛、秦川牛和郏县牛生长性状的相关分析本研究揭示了位于klf7基因第二外显子及其侧翼区的3个SNPs :NC07300:g.41401C>T,42025T>C和42075A>G。其中发现了一个同义突变:苯丙氨酸/苯丙氨酸(p.F54F,C41401T)。有趣的是在同时引入三个TaqI酶切位点后这三个单核苷酸多态性可以同时被酶切和检测。在三个位点中,只有中国荷斯坦奶牛在C41401T位点偏离哈代温伯格平衡状态。连锁不平衡分析发现C41401T和T42025C在郏县红牛中强连锁,T42025C和A42075G在秦川牛、南阳牛和中国荷斯坦奶牛中强连锁(r2 > 0.33)。群体遗传指数分析发现中国荷斯坦奶牛纯合度在C41401T位点达到1,只有一个有效等位基因。χ2检验显示在P1、P2和P3位点基因型分布有显著差异,暗示这些多态性与牛品种显著相关(Pklf7基因的三个单核苷酸多态性P1、P2和P3均与秦川牛和郏县牛的体重和体尺性状没有显著相关。 2. klf11和klf15基因多态性及其与南阳牛、秦川牛和郏县牛生长性状的相关分析本研究揭示了位于klf11和klf15基因的2个SNPs :黄牛klf11基因NC07309:g.24769 C>T和klf15基因的NC07301:g.1230 A>G。其中klf11基因中的C>T突变导致了异亮氨酸>缬氨酸(p.I19V)的错义突变。群体遗传分析发现检测群体中的遗传多样性不高,χ2检验发现klf11和klf15位点的基因型分布与黄牛品种显著相关。相关分析结果显示位于klf11基因3’非翻译区的C/T SNP在南阳牛6月龄的体重(P = 0.002)、日增重(P = 0.006)和体长(P = 0.001),12月龄的日增重(P = 0.005)效应显著。但klf15基因的SNP在P klf11基因的C/T没有引起氨基酸的改变,但它可能与其它可能还未检测到的SNP或它附近的数量性状基因座(QTL)紧密连锁。 klf11和klf15基因的两个单核苷酸多态性均与秦川牛和郏县牛的体重和体尺性状没有显著相关。 3. klf7和klf11基因在秦川牛12个组织的表达谱本试验采集3头18月龄纯种秦川牛的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、小肠、胃、肌肉、皮下脂肪、腹部脂肪、垂体共12个组织样,采用SYBR Green I荧光染料法

关键词：黄牛 klf 单核苷酸多态性生长性状

ERβ在乳腺癌组织中的表达及其与MMP2、MMP9、MFN2、klf4关系的研究

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ERβ在乳腺癌组织中的表达及其与MMP2、MMP9、MFN2、KLF4关系的研...

作者：王昊绮河北医科大学

学位级别：硕士

目的：乳腺癌是全球女性常见的恶性肿瘤之一。我国虽不是乳腺癌的高发国家，但随着社会的进步，人类生活质量的提高及生态环境的变化，乳腺癌的发病率较以前逐渐增高，并且出现明显的年轻化趋势，因此乳腺癌的发病机制和治疗仍然倍受重... 详细信息

目的：乳腺癌是全球女性常见的恶性肿瘤之一。我国虽不是乳腺癌的高发国家，但随着社会的进步，人类生活质量的提高及生态环境的变化，乳腺癌的发病率较以前逐渐增高，并且出现明显的年轻化趋势，因此乳腺癌的发病机制和治疗仍然倍受重视。乳腺癌是雌激素相关性疾病，雌激素通过与雌激素受体结合发挥作用。已有研究显示雌激素受体ERα、ER β是乳腺癌主要相关受体。ERα是发现最早的雌激素受体，曾经被视为乳腺癌中唯一作用的受体而倍受关注。1996年ER β的发现，使人们对雌激素受体有了更多的认识，ER β逐渐成为研究的热点。然而至目前为止，ER β在乳腺癌中的生物学行为尚无统一定论，有研究认为ER β的过表达可导致肿瘤的发生，亦有研究显示ER β基因作为抑癌基因对正常的组织起保护作用。ER β基因作为转录因子在乳腺癌的发生发展中起着重要的作用，然而在对乳腺癌的研究中，有关与ER β表达相关的基因国内、外报道较少。为了进一步了解ER β在乳腺癌发病中的作用，为临床研究提供更多的参考依据，我们通过PubMed数据库进行了启动子序列分析，发现MMP2、MMP9、 MFN2、 klf4基因的启动子序列的碱基互补序列与ER β的碱基序列大体相同，因此推测ER β的表达可能与MMP2、MMP9、 MFN2、 klf4的表达具有相关性。本研究采用蛋白质印迹技术(Western blot)及逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerasechain reaction，RT-PCR)技术分别从蛋白水平和基因水平(mRNA)检测ERβ在乳腺癌组织及乳腺正常组织中的表达情况，分析其与乳腺癌相关临床指标的关系，探讨ER β与MMP2、 MMP9、 MFN2、 klf4表达的关系，以期在印证我们假设的同时，为乳腺癌发病机制的研究及其治疗策略的制定提供新的理论依据。方法：采用蛋白质印迹技术(Western blot)及逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)技术分别从蛋白水平和基因水平(mRNA)检测ER β在乳腺癌组织及乳腺正常组织的表达情况，分析乳腺癌组织中ER β的表达与乳腺癌患者年龄、月经状况、肿瘤大小、临床分期、组织学分级、病理类型、腋淋巴结转移数目等临床病理学指标的关系;并探讨ER β与MMP2、 MMP9、 MFN2、 klf4表达的关系。结果： 1ER β基因在乳腺癌组织及乳腺正常组织中的表达 1.1ER β基因在mRNA水平表达 ER β mRNA在乳腺癌组织和正常组织中的阳性表达率分别为70.70%(28/40)和97.50%(39/40)，经统计学分析，二组间差异具有统计学意义(χ=11.114;P=0.001<0.05)，且ER β mRNA在乳腺癌组织中表达的阳性率比其在正常组织中的阳性表达率低。 1.2ER β基因在蛋白水平表达 ER β蛋白在乳腺癌组织和正常组织中的阳性表达率分别为69.46%(27/40)和92.50%(37/40)，经统计学分析，二组间差异具有统计学意义(χ=7.812;P=0.005<0.05)，且ER β蛋白在乳腺癌组织中的表达的阳性率比其在正常组织中的阳性表达率低。 2ER β在乳腺癌组织中的表达与临床病理因素的关系 2.1ER β mRNA的表达与临床病理因素的关系 2.1.1患者年龄40例乳腺癌患者中，年龄≤50岁的患者中有9例ER βmRNA表达阳性，7例患者ER β mRNA表达阴性，年龄＞50岁的患者中有19例ER β mRNA表达阳性，5例ER β mRNA表达阴性。经统计学分析，ER β mRNA的表达在年龄分布中无统计学差异(χ=1.434;P=0.231＞0.05)。 2.1.2患者月经状况40例乳腺癌患者中，未绝经患者中有11例ER βmRNA表达阳性，6例患者ER β mRNA表达阴性，绝经患者中有17例ER β mRNA表达阳性，6例患者ER β mRNA表达阴性。经统计学分析，ER β mRNA的表达在月经状况中的分布无统计学差异(χ=0.395;P=0.530＞0.05)。 2.1.3肿瘤大小40例乳腺癌患者中，肿瘤直径≤2cm的患者中有12例ERβ mRNA表达阳性，6例患者ER β mRNA表达阴性;肿瘤直径为2-5cm的患者中，15例患者ER β mRNA表达阳性，5例患者ER β mRNA表达阴性;肿瘤直径≥5cm的患者中有1例ER β mRNA表达阳性，1例患者ER β mRNA表达阴性。经统计学分析，ER β mRNA的表达在肿瘤直径大小的分布无统计学差异(χ=0.173;P=0.677＞0.05)。 2.1.4组织学分级40例乳腺癌患者中，组织学分级为I级

关键词：蛋白质印迹技术逆转录聚合酶链反应 ERβ MMP2 MMP9 MFN2 klf 乳腺癌

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klf在神经系统疾病中作用的研究进展

医学理论与实践 2024年第15期37卷 2546-2548,2558页

作者：叶紫阳和晴曹湘玉湖南医药学院医学院湖南省怀化市418000

神经系统疾病是由于各种原因导致神经系统组织受到器质性损害,引起的神经系统功能障碍。Krüppel样因子(klf)作为一类转录因子,能调控细胞生长、分化、增殖、代谢、凋亡等多种过程,尤其在神经系统疾病的发生、发展过程中发挥关键作用。... 详细信息

神经系统疾病是由于各种原因导致神经系统组织受到器质性损害,引起的神经系统功能障碍。Krüppel样因子(klf)作为一类转录因子,能调控细胞生长、分化、增殖、代谢、凋亡等多种过程,尤其在神经系统疾病的发生、发展过程中发挥关键作用。本文对klf在神经系统疾病中的作用进行综述,旨在为神经系统疾病的治疗提供新策略。

关键词： klf 神经系统疾病转录因子

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淫羊藿次苷Ⅱ对糖尿病环境下人阴茎海绵体血管内皮细胞中miR-181c及其靶基因klf6、klf9、klf10和klf15的表达影响研究

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中华临床医师杂志（电子版） 2016年第1期10卷 56-61页

作者：关瑞礼雷洪恩唐渊方冬郑卫辛钟成北京大学第一医院男科中心 100034

目的检测淫羊藿次苷Ⅱ(ICAⅡ)对糖尿病环境下人阴茎海绵体血管内皮细胞(HCECs)中mi R-181c及其靶基因klf6、klf9、klf10和klf15的表达影响。方法经分离鉴定的原代HCECs,随机分为三组:正常+BSA组(NC组)、AGE-BSA+高糖组(DM组),ICAⅡ治疗... 详细信息

目的检测淫羊藿次苷Ⅱ(ICAⅡ)对糖尿病环境下人阴茎海绵体血管内皮细胞(HCECs)中mi R-181c及其靶基因klf6、klf9、klf10和klf15的表达影响。方法经分离鉴定的原代HCECs,随机分为三组:正常+BSA组(NC组)、AGE-BSA+高糖组(DM组),ICAⅡ治疗组(DM+ICAⅡ组)。蛋白印迹实验检测e NOS和RAGE蛋白水平;实时定量PCR检测mi R-181c在模型中的表达差异;生物学信息网站预测mi R-181c的靶基因;实时定量PCR检测对应靶基因在模型中的变化;蛋白印迹实验验证靶基因klf6、klf9及klf6下游TXNIP蛋白表达水平差异。结果与NC组相比,蛋白印迹实验的DM组在AGE-BSA联合高糖刺激下,e NOS蛋白表达水平明显降低,而RAGE蛋白表达水平明显升高,表明成功构建用于模拟体内的糖尿病模型;而ICAⅡ干预后能够有效恢复e NOS和RAGE蛋白表达(Pklf6和klf9在DM组明显升高(Pklf10和klf15的m RNA水平无显著差异(P>0.05);ICAⅡ干预后有效降低其klf6和klf9的m RNA表达水平(Pklf6和klf9的蛋白水平变化,与上述的klf6和klf9的m RNA表达变化结果一致。另外,klf6作用的下游TXNIP蛋白水平变化在模型下呈现和其一样的变化趋势。结论 AGE-BSA联合高糖刺激下mi R-181c及其靶基因的显著表达差异揭示其参与内皮细胞损伤的发生发展,而ICAⅡ能够有效逆转上述变化,为进一步研究ICAⅡ与mi R-181c信号通路具体的作用机制提供前期依据。

关键词：淫羊藿次苷Ⅱ 内皮细胞功能障碍 mi R-181c 晚期糖基化终产物 klf TXNIP

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从klf薯片败走卖场谈起

销售与市场(管理版) 2004年第9期 54-55页

作者：黄静

几年前,当百事食品的 LS 著片"忽如一夜春风来,千树万树梨花开",短期内热销大江南北的同时,另一品牌 klf 也正逢上市推广之际。两家都是外资企业背景,都有雄厚的资金实力,可谓旗鼓相当。短兵相接之后,klf 饮恨退出薯片市场,而 LS 薯片... 详细信息

几年前,当百事食品的 LS 著片"忽如一夜春风来,千树万树梨花开",短期内热销大江南北的同时,另一品牌 klf 也正逢上市推广之际。两家都是外资企业背景,都有雄厚的资金实力,可谓旗鼓相当。短兵相接之后,klf 饮恨退出薯片市场,而 LS 薯片一路凯歌,成为著片领域的第一品牌。在这里,我们先不探究它们的产品定位、产品质量和媒体广告,就来说说其终端的具体推广行为。我清晰地记得当时的情景:在卖场入口处,双方都有促销小姐和展示平台开展免费品尝,但 LS 一方的促销小姐不论从外貌衣着还是工作的热情度都更胜一筹——走进电梯入口,巨大的 LS 薯片挂幅从二楼垂落下来,每一个上下电梯进出卖场的人都能看见"LS薯片,新鲜好滋味"的字样,蓝色的包装洒出金黄色的薯片,着实让人垂涎欲滴。如此的黄金宣传地段,看不见 klf 的身影。进入卖场的休闲食品区就可以看见 LS 和 klf 的两个大型主题陈列,都很有气势,差别之处依然还是在促销员的服务与气势上:顾客还没走近堆头的时候,LS 小姐就微笑着迎上,试吃品递过来,热情得让人无法推拒;klf 促销小姐则似乎在等待顾客的主动。一天下来,LS 的销量是 klf 的10倍之多。在销量的巨大悬殊下,两方的促销小姐表现和促销质量差距也愈拉愈大。卖场里的促销推广之战打得热闹,销量的差异也逼得业务代表与采购频繁接触,LS 一方业务人员斗志高昂,拿出了更具体更有操作性的促销案希望采购乘胜追击大力支持,尽快把 klf 打翻下马;klf 则乱了方寸,焦头烂额之余一味以费用投入为条件,要求采购削弱对 LS 的扶持,他们并不清楚卖场要的是什么,相关的推广人员也没有冷静地面对局面与卖场多多沟通。费用是一时的,而销售衍生的毛利才是长久的,卖场更需要的是那些有销售潜力有长期培养价值的高毛利商品,当然费用的投入也是不会拒绝的。因此采购的做法就是在扶持 LS 的同时也支持 klf,在大致的平台上让双方以自己的实力去打斗。龙争虎斗,风云过招,LS 用半年的时间笑到了最后。

关键词：卖场 LS 促销小姐 klf 执行者新品上市促销员管理者管理人员顾客薯片决策者决策个体新品推广销量

山羊Kruppel样转录因子家族在前体脂肪细胞分化中的表达模式及相关性分析

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中国农业科学 2019年第13期52卷 2341-2351页

作者：朱江江林亚秋王永林森青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室

【目的】优化山羊前体脂肪细胞体外培养体系,揭示Kruppel样转录因子家族(klfs)成员在前体脂肪细胞分化过程中的表达模式。【方法】于四川省简阳大哥大牧业有限公司随机选取3只7日龄简州大耳羊为研究对象。放血致死并清洗后,在无菌环境... 详细信息

【目的】优化山羊前体脂肪细胞体外培养体系,揭示Kruppel样转录因子家族(klfs)成员在前体脂肪细胞分化过程中的表达模式。【方法】于四川省简阳大哥大牧业有限公司随机选取3只7日龄简州大耳羊为研究对象。放血致死并清洗后,在无菌环境中取其皮下脂肪组织。利用Ⅰ型胶原酶消化法获得其皮下前体脂肪细胞,待细胞长至细胞密度为80%时传代至6孔培养板中(F3代),以"150μmol·L油酸+10 mg·L胰岛素"前体脂肪细胞进行成脂诱导,并在诱导分化后0 d、3 d、5 d、7 d收集细胞,Trizol法提取细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测klf20, klf 12和klf15共11个klf转录因子家族成员在不同分化阶段细胞中的表达水平,并利用皮尔逊系数分析各个成员mRNA总体表达水平之间的相关性。【结果】150μmol·L油酸+10 mg·L胰岛素处理前体脂肪细胞24 h后细胞中开始出现小脂滴,48 h后脂滴数量增多、体积增大,诱导120 h后脂肪细胞分化程度显著增加。RT-qPCR结果显示,脂肪分化标志基因过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)基因随着诱导分化的进行其表达水平持续上升,其中在第7天时其表达水平极显著高于其他各组(Pklf2、klf3、klf4、klf6、klf7和klf15在脂肪细胞中表达水平显著(Pklf3、klf6和klf15在分化5 d时表达水平最高,klf2和klf4表达水平在7 d时最高,而klf7则在3 d时表达水平最高;klf5、klf8、klf9、klf10和klf12在前体脂肪细胞中的表达水平极显著高于分化后脂肪细胞中的表达水平(Pklf8、klf10和klf12的表达水平均在5 d时达到最低,而klf5和klf9则在7 d时表达水平最低;相关性分析结果显示klf家族各成员mRNA在山羊前体脂肪细胞分化过程中总体表达水平存在相关性,klf12与6个基因具有较强的相关性,其次为klf4和klf9,分别与5个成员具有较强的相关性,而klf2与其他基因均没有较强的相关性。【结论】明确了klf家族在山羊前体脂肪细胞分化过程中的表达模式,解析了各个成员mRNA表达之间的相关性,为阐明山羊前体脂肪细胞分化的分子机制提供重要的基础数据。

关键词：山羊前体脂肪细胞分化 klf

Krüppel-like factors 4 and 5:the yin and yang regulators of cellular proliferation

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Cell Research 2005年第2期15卷 92-96页

作者： Amr M.GHALEB,Mandayam O.NANDAN,Sengthong CHANCHEVALAP,W.Brian DALTON,Irfan M.HISAMUDDIN,Vincent W.YANG Division of Digestive Diseases Department of Medicine Emory University School of Medicine Atlanta Georgia USA Division of Digestive Diseases Department of Medicine Emory University School of Medicine Atlanta Georgia USA Division of Digestive Diseases Department of Medicine Emory University School of Medicine Atlanta Georgia USA Division of Digestive Diseases Department of Medicine Emory University School of Medicine Atlanta Georgia USA Division of Digestive Diseases Department of Medicine Emory University School of Medicine Atlanta Georgia USA Division of Digestive Diseases Department of Medicine Emory University School of Medicine Atlanta Georgia USA Department of Hematology and Oncology Winship Cancer Institute Emory University School of Medicine Atlanta Georgia USA

Krüppel-like factors (klfs) are evolutionarily conserved zinc finger-containing transcription factors with diverseregulatory functions in cell growth, proliferation, differentiation, and embryogenesis. klf4 and klf5 are two closelyrelated members of the klf family that have a similar tissue distribution in embryos and adults. However, the two klfsoften exhibit opposite effects on regulation of gene transcription, despite binding to similar, if not identical, cis-actingDNA sequences. In addition, klf4 and 5 exert contrasting effects on cell proliferation in many instances; while klf4is an inhibitor of cell growth, klf5 stimulates proliferation. Here we review the biological properties and biochemicalmechanisms of action of the two klfs in the context of growth regulation.

关键词： cancer cell cycle klf transcription transformation zinc fingers.