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Cloning of the kininogen gene from Lampetra japonica provides insights into its phylogeny in vertebrates

Journal of Genetics and Genomics 2009年第2期36卷 109-115页

作者： Liwei Zhou Xin Liu Ping Jin Qingwei Li College of Life Sciences Liaoning Normal University Dalian 116029 China

kininogens, the precursors of bradykinins, ubiquitously exist in vertebrates, including mammals, birds, amphibians, and fishes. To elucidate the phylogeny of kininogen genes in early vertebrates, we cloned the full-length cDNA of kininogen gene from the liver of Lampetra japonica. The open reading frame of this sequence contained 546 bp and encoded 181 amino acids, including a cystatin domain without the canonical binding site for cysteine proteinases and a bradykinin domain. Our results suggested that in lampreys and most of other vertebrates, there might be only one kininogen gene, which was fused by certain sequences during vertebrate evolution and encoded proteins with more functions; however, another special kininogen gene, only encoding the bradykinin domain with multiple copies in some species, arose only in amphibians for adapting themselves to the unique environment. Using reverse transcription PCR, kininogen mRNA was also detected in lamprey gut, kidney, and leukocyte, but absent in lamprey buccal gland. Our findings may provide insights into the phylogeny of kininogen genes as well as other gene families in vertebrates.

关键词： kininogen Lampetrajaponica phylogeny bradykinin domain cystatin domain tissue distribution

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22 脊髓损伤早期kininogen免疫反应性的表达和意义

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解剖学研究 1994年第1期 81-81页

作者：黎昭洪 J.Xu J.Chao E.L.Hogan 暨南大学医学院美国南卡罗来纳医科大学美国南卡罗来纳医科大学 510632

kininogen是BRADYK ININ和KININ的前体,可舒张血管,增加血管的渗透性,参与传导痛觉,抑制蛋白酶活性.在炎症时迅速增加,具有保护作用和促进愈合作用.脊髓的胶状质和后根节存在BRADYKININ受体.我们已调查了kininogen在脊髓的正常分布并用... 详细信息

kininogen是BRADYK ININ和KININ的前体,可舒张血管,增加血管的渗透性,参与传导痛觉,抑制蛋白酶活性.在炎症时迅速增加,具有保护作用和促进愈合作用.脊髓的胶状质和后根节存在BRADYKININ受体.我们已调查了kininogen在脊髓的正常分布并用生化方法检测了脊髓损伤样本,发现kininogen含量增高,拟用免疫细胞化学法证实.用抗kininogen单克隆抗体藉免疫细胞化学技术研究了以重物压迫法造成脊髓损伤的大白鼠脊髓.压迫的重量和时间分别为10克5分钟,10克10分钟和20克10分钟.存活期分别为术后30分钟和3小时.取受压的脊髓段作研究,并以单纯切除椎板而不作压迫损伤的动物作对照观察.发现kininogen的免疫反应性在损伤后明显增高.在脊髓的边缘带和胶状质区较为显著.星形胶质细胞,前角运动神经元和血管内皮细胞的免疫反应性均有不同程度的增加.其增加的程度大致与压迫的重量和时间成正比例.损伤后30分钟免疫反应性即已增高.提示在脊髓损伤早期,kininogen的合成增加.推测其作用可能是对抗损伤所引起的血管痉挛,和拮抗蛋白酶的活性,属保护性反应,会有利于减轻迟发性神经元损害.减轻神经功能的丧失.

关键词：脊髓损伤损伤后免疫反应性 kininogen

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基于蛋白质组学技术筛选唐氏妊娠母体血清蛋白标志物的研究

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第三军医大学学报 2015年第5期37卷 464-469页

作者：姚远张波蒋滢罗娟吴玉娇姚宏第三军医大学西南医院:检验科全军检验医学中心重庆400038 解放军第309医院检验科北京100091 第三军医大学西南医院:检验科妇产科产前诊断中心重庆400038

目的筛选唐氏(DS)妊娠母体血清蛋白标志物,初步验证其临床应用价值。方法收集确诊为DS妊娠的母体血清(DS组)和正常孕妇血清标本(对照组)各6例(均为16孕周采集),经二维凝胶电泳(2-DE)获得2组血清蛋白电泳图像,比较2组间蛋白含量变化,选... 详细信息

目的筛选唐氏(DS)妊娠母体血清蛋白标志物,初步验证其临床应用价值。方法收集确诊为DS妊娠的母体血清(DS组)和正常孕妇血清标本(对照组)各6例(均为16孕周采集),经二维凝胶电泳(2-DE)获得2组血清蛋白电泳图像,比较2组间蛋白含量变化,选取差异显著的蛋白质点进行生物质谱分析与鉴定,并采用Western blot方法验证筛选获得的血清蛋白标志物在DS妊娠母体血清中的变化情况(n=12)。结果通过2-DE图谱分析,共筛选出29个表达显著差异的血清蛋白质点。从中选取6个表达差异较大的蛋白质点,经生物质谱技术分析和NCBI数据库搜索与匹配,发现CFHR1和kininogen 1等10个蛋白质与其匹配的可能性较大(匹配分值>66分)。Western blot结果显示,CFHR1和kininogen 1在DS组的积分光密度值分别为(5 687.0±727.8)和(133 451.8±32 118.8),均明显高于对照组水平[(1 414.1±715.6)(Pkininogen 1的异常变化可能与DS妊娠密切相关,有望成为DS早期产前筛查的母体血清蛋白新标志物。

关键词：唐氏综合征 CFHR1 kininogen 1 母体血清产前筛查

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鲢鱼卵中两种高分子半胱氨酸蛋白酶抑制因子的纯化与鉴定

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食品科学 2015年第23期36卷 6-11页

作者：李树红蒋然然杨娟刘玲钟海霞陈志光李美良李冉四川农业大学食品学院四川雅安625014

以鲢鱼卵为材料,通过匀浆、酸处理和超滤制备半胱氨酸蛋白酶抑制因子(cystine proteinase inhibitors,CPIs)粗提液,进而经Sephacryl S-100分子筛层析、Blue Sepharose 6 Fast Flow染料亲和层析、SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析、Con A Sepharose 4B亲和层析,获得两种纯化的高分子CPIs,即Con A不吸附部分a-1和吸附部分的糖蛋白a-2。二者分别被纯化了102.62倍和274.28倍,酶活回收率分别为2.02%和1.42%。通过TSK G2000 SWXL凝胶过滤高效液相色谱结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及其反相酶谱法分析,表明a-2及再次经高效液相色谱法回收的a-1在电泳图上均呈单一带,a-2为单一峰,且a-1的分子质量为139 ku,a-2的分子质量为92 ku。二者均能抑制半胱氨酸蛋白酶(木瓜蛋白酶和鲢鱼组织蛋白酶L)但不抑制丝氨酸蛋白酶(胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)。根据a-1和a-2的分子质量及抑制活性特征和糖蛋白特性,推测二者可能为鲢鱼卵kininogens的不同形式。

关键词：鲢鱼卵半胱氨酸蛋白酶抑制因子 kininogen 纯化鉴定

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