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双酚A通过miR-10a-5p影响人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的研究

双酚A通过miR-10a-5p影响人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的研究

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作者：杨亚兰中南大学

学位级别：硕士

目的:双酚A(Bisphenol A,BPA)作为一种内分泌干扰物,具有拟雌激素的作用,干扰女性生殖系统,导致女性卵巢功能异常。目前其具体机制仍不清楚。本研究基于前期经BPA干预后SD大鼠的卵巢组织转录组测序数据,探索BPA通过miR-10a-5p对人卵巢... 详细信息

目的:双酚A(Bisphenol A,BPA)作为一种内分泌干扰物,具有拟雌激素的作用,干扰女性生殖系统,导致女性卵巢功能异常。目前其具体机制仍不清楚。本研究基于前期经BPA干预后SD大鼠的卵巢组织转录组测序数据,探索BPA通过miR-10a-5p对人卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡的机制。方法:(1)利用CCK-8实验检测BPA干预后的人卵巢颗粒细胞(human ovarian granulosa tumor cell line,kgn)的增殖能力,采用Western Blot检测凋亡蛋白的表达。(2)通过分析SD大鼠卵巢组织的测序数据,获得差异表达的miRNA并翻阅文献筛选出目的miR-10a-5p,qRT-PCR 验证 miR-10a-5p 在 BPA 干预后的 SD 大鼠卵巢组织和kgn细胞中的表达水平。(3)对kgn细胞分别转染miR-10a-5p mimic、inhibitor,通过 CCK-8 实验、EdU 实验、WB 实验检测miR-10a-5p对kgn细胞增殖凋亡的作用。(4)利用miRNA在线预测网站筛选出miR-10a-5p的预测靶基因SERPINE1,利用WB实验验证miR-10a-5p对SERPINE1的调控作用。通过双荧光素酶报告基因验证两者的直接作用关系。将miR-10a-5p mimic和SERPINE1过表达质粒共转染,通过CCK-8、EdU增殖实验和WB实验验证SERPINE1对miR-10a-5p抑制细胞增殖促进细胞凋亡能力的回复作用。结果:(1)用 50μM、100μM、150μM、200μM 四种不同的BPA浓度干预kgn细胞,48h后150μM的BPA实验组和200μM的BPA实验组的kgn细胞受到显著抑制。(2)通过分析F0代出生56天后SD大鼠卵巢组织差异表达的miRNA,筛选出miR-10a-5p进一步研究。且qRT-PCR验证结果显示BPA干预后,卵巢组织和kgn细胞中miR-10a-5p的表达水平较对照组相比明显上调。(3)miR-10a-5p能明显抑制kgn细胞的增殖能力,促进凋亡。(4)miR-10a-5p通过靶向SERPINE1抑制kgn细胞的增殖能力促进凋亡。(5)SERPINE1过表达能部分缓解miR-10a-5p的抑制细胞增殖促进凋亡的作用。结论:综上所述,BPA通过miR-10a-5p负调控SERPINE1基因来抑制kgn细胞的增殖并促进其凋亡,为揭示双酚A对卵巢功能的影响提供实验基础和依据。图11幅,表10个,参考文献70篇

关键词： BPA kgn 细胞凋亡 miR-10a-5p SERPINE1

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