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2018中国遗传学会第十次全国会员代表大会暨学术讨论会

作者： Guozhen Zhang Peng Zuo Weining Jian Shuang Huang Jieying Fan Zhengyi Wei Shaochen Xing Institute of Agricultural Biotechnology Jilin Academy of Agricultural Sciences Faculty of Agronomy Yanbian Uninversity

Keratinocyte growth factor-1（kgf-1）is a member of the fibroblast growth factor family（FGFs）, which binds to specific receptors in epithelial cells. It can promote the proliferation, migration and differentiation of epithelial cells, embryo development, immune reconstitution and repair of wounds, thus is widely used in clinical practice. Natural kgf-1 has low yield and poor stability, therefore, even if the production and storage costs are high and with an extremely high price, the production of kgf-1 is still insufficient for the market demand. In this study, we optimized the human kgf-1 gene sequence according to the rice codon usage bias, and transformed into rice via agrobacterium-mediated method, and kgf-1 was driven by an endosperm specific promoter and expressed in rice grains. Forty-six transformation events were identified by PCR of both kgf-1 and the selectable gene, bar, combined with aurum-labelled immune strip assay the bar gene. Total soluble proteins from the grains of these materials were extracted for ELISA detection, and the expression of kgf-1 in 15 transformation events was preliminarily determined. The expression level of kgf-1 in the highest expression transformation event was 10.8 μg/g of brown rice. The results of Southern blotting analysis indicated that there was a single copy kgf-1 inserted in the transformation events with the top 6 highest expression level. Further protein purification and activity assays are ongoing.

关键词： kgf-1 rice endosperm specificity

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慢性牙周炎龈沟液中kgf-1及IL-23含量检测及其意义

慢性牙周炎龈沟液中KGF-1及IL-23含量检测及其意义

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作者：赵哲山西医科大学

学位级别：硕士

目的:在免疫调节和直接介导方面,细胞因子发挥了极其重要的作用,推测它可能会成为有价值的判断牙周炎症指标和诊断指标。该实验采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)来检验健康人群以及慢性牙周炎患者牙周基础... 详细信息

目的:在免疫调节和直接介导方面,细胞因子发挥了极其重要的作用,推测它可能会成为有价值的判断牙周炎症指标和诊断指标。该实验采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)来检验健康人群以及慢性牙周炎患者牙周基础治疗前后龈沟液中角质细胞生长因子-1(keratinocyte growth factor-1,kgf-1)及白介素-23(interleukin-23,IL-23)的质量浓度,并分析两者质量浓度与牙周各项临床指标间的关系,分析其在牙周炎发病机理、病情发展等方面中所起的作用。方法:选30例慢性牙周炎患者为病例组,对照组选择30例牙周健康者,所有受试者均以同一颗磨牙作为研究对象,病例组分为牙周基础治疗前和治疗后第4周、第6周、第8周四组,检测并记录每个受试者磨牙的各临床指标:探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(attachment loss,AL)、龈沟出血指数(sulcus bleeding index,SBI)。采用滤纸条浸润法采集牙周健康人群和慢性牙周炎患者治疗前及治疗后不同时期的龈沟液样本,使用酶联免疫吸附法测定样本中kgf-1及IL-23质量浓度,并与各临床指标作相关检验。结果:⑴慢性牙周炎患者GCF中kgf-1和IL-23质量浓度显著高于健康对照组(Pkgf-1和IL-23质量浓度在治疗后各个阶段都低于治疗前(Pkgf-1和IL-23质量浓度在治疗后各个阶段与健康对照组比较,差异有统计学意义(Pkgf-1的水平与PD、AL、SBI呈显著正相关,相关系数r和p值分别为0.545,0.039;0.617,0.012;0.537,0.031。龈沟液中IL-23的水平与PD、AL、SBI呈显著正相关,相关系数r和p值分别为0.467,0.031;0.629,0.019;0.541,0.027。结论:慢性牙周炎患者龈沟液中存在kgf-1和IL-23,且龈沟液中kgf-1和IL-23浓度显著高于牙周健康者,且kgf-1和IL-23质量浓度在治疗后各个时期都低于治疗前,kgf-1和IL-23水平升高可以较好地反映牙周炎牙周组织的健康状况,这两个细胞因子在牙周疾病的发生发展过程中起一定作用,因此可认为kgf-1和IL-23可作为诊断牙周病和反映牙周状态的客观指标。

关键词：牙周炎龈沟液 kgf-1 IL-23 ELISA

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慢性牙周炎龈沟液中kgf-1及IL-23含量检测及其意义

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临床检验杂志（电子版） 2018年第1期7卷 128-129页

作者：宋尚林马天叶马兰邯郸市口腔医院河北邯郸056001

目的分析慢性牙周炎龈沟液中kgf-1及IL-23含量检测及其意义。方法选取我院2016年3月-2017年2月收治的70例慢性牙周炎患者,视为观察组;选取同期来我院寻求治疗的70例健康患者,视为对照组。两组均接受kgf-1及IL-23含量检测,分析并对比两... 详细信息

目的分析慢性牙周炎龈沟液中kgf-1及IL-23含量检测及其意义。方法选取我院2016年3月-2017年2月收治的70例慢性牙周炎患者,视为观察组;选取同期来我院寻求治疗的70例健康患者,视为对照组。两组均接受kgf-1及IL-23含量检测,分析并对比两组的检测结果及意义。结果观察组的kgf-1及IL-23的质量浓度明显高于对照组,差异有统计学意义(Pkgf-1及IL-23的质量浓度与龈沟出血指数(SBI)、探诊深度(PD)、附着丧失(AL)呈正相关。结论 kgf-1及IL-23可以较好地反映牙周炎患者的健康状况,可以作为诊断牙周病和反映牙周状态的客观指标。

关键词：慢性牙周炎龈沟液 kgf-1 IL-23 检测

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慢性牙周炎龈沟液中kgf-1含量检测及其意义

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临床口腔医学杂志 2011年第2期27卷 70-72页

作者：赵哲武云霞孙晓军山西医科大学附属第一医院口腔科山西太原030001

目的:检测慢性牙周炎患者牙周基础治疗前及治疗后不同时期龈沟液中角质细胞生长因子(keratinocytegrowth factor,kgf)-1的质量浓度,探讨kgf-1与牙周炎的关系及其在牙周炎发病机理、病情进展方面的作用。方法:用滤纸条浸润法采集牙周健... 详细信息

目的:检测慢性牙周炎患者牙周基础治疗前及治疗后不同时期龈沟液中角质细胞生长因子(keratinocytegrowth factor,kgf)-1的质量浓度,探讨kgf-1与牙周炎的关系及其在牙周炎发病机理、病情进展方面的作用。方法:用滤纸条浸润法采集牙周健康者和慢性牙周炎患者治疗前后不同时期的龈沟液样本,用酶联免疫吸附测定法检测样本中kgf-1的质量浓度。结果:慢性牙周炎患者龈沟液中kgf-1的质量浓度高于健康对照组(Pkgf-1的质量浓度低于治疗前,且治疗后不同时期的复查结果与治疗前相比,均有统计学意义(Pkgf-1的质量浓度与牙周探诊深度(PD)、附着丧失(AL)、龈沟出血指数(SBI)存在正相关。结论:龈沟液中kgf-1水平与牙周炎症密切相关,kgf-1可作为反映牙周状态的客观指标。

关键词：牙周炎龈沟液 kgf-1

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在水稻胚乳中表达角质细胞生长因子kgf-1

在水稻胚乳中表达角质细胞生长因子KGF-1

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2018中国遗传学会第十次全国会员代表大会暨学术讨论会

作者：张国珍左朋坚伟宁黄爽范杰英韦正乙邢少辰吉林省农业科学院农业生物技术研究所延边大学农学院

角质细胞生长因子-1（kgf-1）是成纤维细胞生长因子家族（FGFs）的一员,与上皮细胞中的特异性受体结合,能够促进上皮细胞的增值、迁移和分化,胚胎的发育、免疫重建及创伤的修复,被广泛应用于临床。天然的kgf-1蛋白产量低和稳定性差,所... 详细信息

角质细胞生长因子-1（kgf-1）是成纤维细胞生长因子家族（FGFs）的一员,与上皮细胞中的特异性受体结合,能够促进上皮细胞的增值、迁移和分化,胚胎的发育、免疫重建及创伤的修复,被广泛应用于临床。天然的kgf-1蛋白产量低和稳定性差,所以即便是生产和储存成本高,价格昂贵,市场上的kgf-1仍然供不应求。本研究本研究跟据水稻的密码子偏好性对人源的kgf-1基因序列进行了优化,并通过农杆菌介导法转入水稻中,在胚乳特异性启动子驱动下,在水稻籽粒中表达。通过对目的基因和标记基因bar的PCR检测,结合bar基因的金边免疫室纸条检测,鉴定了46个转化事件。提取这些材料籽粒的总可溶性蛋白,进行ELISA检测,初步确定了15个转化事件中kgf-1得到了表达。表达量最高的转化事件中kgf-1的表达量可达到10.8μg/g糙米。Southern blot分析结果表明,表达量最高的6个转化事件中,kgf-1均为单拷贝插入。进一步的蛋白纯化和活性分析正在进行中。

关键词： kgf-1 水稻胚乳特异性

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角质细胞生长因子（kgf-1）在红花中的高效表达

角质细胞生长因子（KGF-1）在红花中的高效表达

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中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会

作者：张晓美李校堃吉林农业大学

[目的]本实验通过植物油体系统来表达外源蛋白kgf-1,为利用植物生物反应器提高kgf-1产量提供了理论依据。[方法]将经过密码子植物偏好优化过的人kgf-1基因构建到植物油体表达载体上,并通过冻融法将重组载体转化到农杆菌EHA105中,并介导... 详细信息

[目的]本实验通过植物油体系统来表达外源蛋白kgf-1,为利用植物生物反应器提高kgf-1产量提供了理论依据。[方法]将经过密码子植物偏好优化过的人kgf-1基因构建到植物油体表达载体上,并通过冻融法将重组载体转化到农杆菌EHA105中,并介导红花子叶节的转化,并采用PCR检测和Southernblot筛选出高效表达的转基因红花植株,同时对转基因红花种子进行westernblot和Elisa分析kgf-1在转基因红花种子中的表达量。[结果]成功构建了植物油体重组载体p1301-oleosin-kgf1和对照载体p1301-35S-kgf1,并获得了含有重组表达载体的工程菌EHA105和转基因阳性红花,从基因水平上的检测结果可知,kgf-1成功整合到红花基因组中,western blot和Elisa分析结果说明,植物油体重组载体的kgf-1的表达量远远高于对照组。[结论]为建立kgf-1的新的生产途径奠定了基础,为利用植物表达系统更有效地表达其它具有重要价值的药用蛋白提供技术和理论基础,同时也提供一个大量生产kgf-1的方法。

关键词： kgf-1 油体重组高效表达

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重组人角质细胞生长因子C40-C106二硫键异构体的制备、鉴定与功效相关性的研究

重组人角质细胞生长因子C40-C106二硫键异构体的制备、鉴定与功效...

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作者：谢敏重庆理工大学

学位级别：硕士

人角质细胞生长因子（keratinocyte growth factor, kgf）自1989年Rubin等人从人胚胎肺成纤维细胞（M426）的培养液中分离出来,已被发现具有两种分型：kgf-1（即FGF-7）和kgf-2（即FGF-10）。其主要的生物学作用是促进上皮细胞的增殖和... 详细信息

人角质细胞生长因子（keratinocyte growth factor, kgf）自1989年Rubin等人从人胚胎肺成纤维细胞（M426）的培养液中分离出来,已被发现具有两种分型：kgf-1（即FGF-7）和kgf-2（即FGF-10）。其主要的生物学作用是促进上皮细胞的增殖和分化。本项目在Amgen公司缺失kgf-1N端23个氨基酸的基础上,突变其102位的半胱氨酸为丝氨酸并人工形成40位和106位这对二硫键发现：此突变体具有抗组织纤维化的功能。目的：本论文主要探讨kgf-1突变体蛋白的制备工艺,结构鉴定,人工形成40位和106位二硫键异构体的方法以及二硫键形成与否对其生物学功能的影响,从而为开发新型抗组织纤维化的药物和研究蛋白质的二硫键与其功能的相关性奠定基础。方法：（1） kgf-1突变体蛋白的制备工艺：将发酵好的重组工程菌破碎,洗涤后得到突变体蛋白的包涵体;包涵体经过SP Sepharose F.F和肝素柱亲和纯化得到突变体蛋白。（2） kgf-1突变体蛋白的复性方法：研究纯化好的kgf-1突变体蛋白人工形成40位和106位二硫键和完全不含二硫键的复性方法。（3） kgf-1突变体蛋白的结构鉴定：激光解析飞行时间色谱检验kgf-1突变体蛋白的分子量是否正确;RP-HPLC验证其纯度;氨基酸序列分析kgf-1突变体蛋白的一级结构;计算机模拟两种蛋白的空间构象;ELISA验证其kgf-1常规免疫结合位点是否改变;还原和非还原质量肽图鉴定其二硫键形成是否完全。（4） kgf-1突变体蛋白的生物学活性研究：通过人肝星状细胞,人肺成纤维细胞和大鼠肝星状细胞三种细胞株来研究两种异构体蛋白的体外生物学活性;通过四氯化碳造成的大鼠肝纤模型、博来霉素造成的大鼠肺纤模型以及乙醇造成的家兔角膜纤维化三种模型研究两种异构体蛋白的体内生物学活性。结果：（1）通过优化已有的纯化工艺最终得到电泳纯度为95%以上,RP-HPLC纯度为97%以上的未复性的kgf-1突变体蛋白。（2）通过对复性工艺的研究得到完全不含二硫键和含有40位和106位二硫键的两种突变体蛋白,两种目标蛋白纯度＞99%。（3）质谱测定其分子量为16KD,氨基酸N端15个氨基酸测序结果与理论值相同;计算机模拟含有40位-106位二硫键突变体和不含二硫键突变体蛋白的空间结构得知两种突变体蛋白构象迥异;ELISA实验证明两种突变体蛋白与野生型kgf-1和K23相比,其免疫结合位点已经发生改变;质量肽图证明含有二硫键的突变体40位-106位二硫键形成完全。（4）体外细胞测活实验证明kgf-1突变体蛋白含40-106二硫键蛋白可以明显抑制人肝星状细胞,人肺成纤维细胞,轻微抑制大鼠肝星状细胞;体内大鼠肝纤模型证明两种突变体蛋白均可以明显改善已经形成的肝纤维化,体内大鼠肺纤维化证明其含二硫键突变体可以控制肺纤维化的病情,体内家兔角膜损伤实验证明了kgf-1含二硫键突变体可以明显改善已经纤维化的角膜组织,kgf-1突变体不含二硫键样品效果其次。结论：成功获得了两种高纯度的kgf-1异构体蛋白,并且证明了他们的空间构象在二硫键形成与否的情况下发生了改变,同时还确定了他们的体内外的生物学活性。kgf-1含二硫键突变体蛋白可以抑制组织纤维化相关细胞：人肝星状细胞,人肺成纤维细胞等的生长,而且体外三个动物实验模型证明kgf-1含40-106位二硫键突变体蛋白可以控制纤维组织的继续生成,kgf-1不含二硫键突变体效果其次。综上所述,两种新型的kgf-1二硫键突变体蛋白的体内外活性测定证明了其功能与蛋白质结构之间的关系,对于研发新型抗纤维化药物以及研究蛋白质的构效关系具有重大意义。

关键词： kgf-1 40位-106位二硫键 HSC HFL-1 四氯化碳博来霉素

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一种重组角质细胞生长因子-1的纯化工艺研究

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生物化工 2018年第1期4卷 83-85页

作者：郝东史瑾王维邓晗王俊杨晓琳赵金礼陕西慧康生物科技有限责任公司陕西西安710054

目的:以毕赤酵母表达的重组角质细胞生长因子-1(kgf-1)发酵液为原料,建立一种kgf-1纯化方法。方法:高速离心技术、膜过滤技术、超滤技术为主要的粗纯工艺,应用离子交换色谱的精细纯化工艺。结果:以该纯化工艺可生产获得单一组分的kgf-1,... 详细信息

目的:以毕赤酵母表达的重组角质细胞生长因子-1(kgf-1)发酵液为原料,建立一种kgf-1纯化方法。方法:高速离心技术、膜过滤技术、超滤技术为主要的粗纯工艺,应用离子交换色谱的精细纯化工艺。结果:以该纯化工艺可生产获得单一组分的kgf-1,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳及反相高效液相色谱C8柱检测其纯度可达90%以上。结论:本工艺得到的kgf-1纯度大于90%、可用于进一步工业化研究。

关键词： kgf-1 超滤浓缩离子交换层析纯化

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