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VEGF165对人胚肾293细胞kcnq1/kcne1电流的影响及机制探讨

VEGF165对人胚肾293细胞KCNQ1/KCNE1电流的影响及机制探讨

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作者：乔元郑州大学

学位级别：硕士

研究背景和目的血管内皮生长因子165在机体内具有强大的促进血管生成的作用,利用这一特性,人们将其视为治疗心肌梗死等缺血性疾病的潜在突破点。许多研究表明:VEGF165能够减少心肌梗死面积,促进干细胞迁移至缺血部位,预防心室重构,抗心... 详细信息

研究背景和目的血管内皮生长因子165在机体内具有强大的促进血管生成的作用,利用这一特性,人们将其视为治疗心肌梗死等缺血性疾病的潜在突破点。许多研究表明:VEGF165能够减少心肌梗死面积,促进干细胞迁移至缺血部位,预防心室重构,抗心肌细胞凋亡,通过多个途径发挥保护心肌细胞的作用。但VEGF165对心肌细胞电活动的直接影响及可能的机制仍未阐明。I通道在哺乳动物的心肌细胞上广泛分布,是影响心肌细胞动作电位复极过程的重要离子通道。目前认为I通道由α亚单位(kcnq1基因编码)和β亚单位(kcne1基因编码)组成。本实验运用细胞转染和膜片钳等技术,分析VEGF165对异源表达的kcnq1/kcne1通道电流的影响,并探讨其可能的机制。研究方法将人胚肾293细胞随机分为对照组、实验A组和实验B组,对照组细胞正常培养,不做特殊处理,实验A组细胞导入含有KDR、kcnq1和kcne1基因的质粒,实验B组细胞导入含KDR和kcnq1基因的质粒,外源基因导入约48小时后,PCR技术被用来验证转染是否成功。实验A组和实验B组人胚肾293细胞均经同样浓度的重组人VEGF165蛋白处理后,运用全细胞膜片钳技术观察并记录处理前、后2组细胞的电流大小,并进行比较。研究结果***结果提示实验A组和实验B组均成功的将目的基因导入人胚肾293细胞。2.实验A组的细胞经实验药物VEGF165处理后,在各个电压下(-20,0,+20,+40和+60 mV),处理前测量的标准化激活电流(0.078±0.060、0.243±0.090、0.465±0.080、0.750±0.060、1.000±0.000)均明显高于处理后(0.045±0.040、0.159±0.060、0.349±0.050、0.568±0.090、0.729±0.100),差异均具有统计学意义;处理前测量的标准化尾电流(0.068±0.030、0.252±0.080、0.526±0.070、0.766±0.060、1.000±0.000)均明显高于处理后(0.054±0.030、0.167±0.090、0.409±0.050、0.607±0.060、0.803±0.030),差异均具有统计学意义。3.实验B组的细胞经实验药物VEGF165处理后,在各个电压下(-20,0,+20,+40和+60 mV),处理前测量的标准化激活电流与处理后的数值没有统计学差异,处理前测量的标准化尾电流与处理后的数值没有统计学差异。结论在100 ng/mL的浓度条件下,VEGF165能直接抑制人胚肾293细胞kcnq1/kcne1电流的大小,但VEGF165不能直接抑制人胚肾293细胞kcnq1电流,说明VEGF165对kcnq1/kcne1电流的抑制作用需要β亚单位(kcne1)的参与。

关键词：血管内皮生长因子165 人胚肾293细胞转染 kcnq1/kcne1电流 kcnq1电流

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