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伊马替尼耐药的k562细胞系的建立及其生物学特性研究

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中华血液学杂志 2004年第6期25卷 337-341页

作者：齐静彭晖顾振纶梁中琴杨纯正中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 苏州大学医学院药理教研室

目的　体外建立一株对伊马替尼 (imatinib)耐药的白血病细胞并阐明其生物学特性。方法　以药物浓度递增的方法诱导人白血病细胞株k5 6 2对伊马替尼产生耐药性 ,以MTT法确定其耐药倍数及抗药谱。用RT PCR和Westernblot方法检测耐药细胞中... 详细信息

目的　体外建立一株对伊马替尼 (imatinib)耐药的白血病细胞并阐明其生物学特性。方法　以药物浓度递增的方法诱导人白血病细胞株k5 6 2对伊马替尼产生耐药性 ,以MTT法确定其耐药倍数及抗药谱。用RT PCR和Westernblot方法检测耐药细胞中bcr/abl及mdr1基因及其蛋白BCR/ABL和P gp的表达。用免疫共沉淀法检测耐药细胞中BCR/ABL的磷酸化活性。用双色荧光原位杂交法检测细胞中融合基因bcr/abl拷贝数。结果　建立了针对伊马替尼的人白血病耐药细胞系k5 6 2 /G0 1,耐药倍数为 (15 .2± 3.0 )倍 ,其对阿霉素、三尖杉酯碱和鬼臼乙叉甙具有不同程度的交叉耐药性。主要的耐药机制为上调bcr/abl融合基因及其融合蛋白BCR/ABL表达 ,增强BCR/ABL磷酸化活性。此外 ,多药耐药相关基因mdr1及其蛋白产物P gp高表达也参与了耐药性的形成。结论　建立了我国第一株对伊马替尼耐药的人白血病细胞系k5 6 2 /G0 1,并阐明了部分耐药机制。

关键词：伊马替尼耐药性 k562细胞系生物学特性抗药性

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人红白血病k562细胞系生物学活性及DNA结合抑制因子4基因表达的影响

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中国实验血液学杂志 2011年第6期19卷 1388-1392页

作者：王利芳黄闪黄纯李春蕊李登举华中科技大学同济医学院同济医院血液科湖北武汉430030

本研究探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人慢性髓系白血病(CML)急红变细胞系k562细胞生物学活性和DNA结合抑制因子4(ID4)基因表达的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点。应用甲基化特异性PCR方法检测k562细胞中ID4基因甲基化情况;实... 详细信息

本研究探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人慢性髓系白血病(CML)急红变细胞系k562细胞生物学活性和DNA结合抑制因子4(ID4)基因表达的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点。应用甲基化特异性PCR方法检测k562细胞中ID4基因甲基化情况;实时荧光定量PCR检测5-Aza-CdR处理k562细胞后ID4 mRNA的表达水平;流式细胞术分析5-Aza-CdR处理后细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果表明,k562细胞中存在ID4基因的甲基化;5-Aza-CdR处理后k562细胞ID4 mRNA表达增加,并具有浓度依赖性,不同浓度药物处理组之间差异具有统计学意义(pk562细胞凋亡率增加,并且作用呈时间剂量依赖性。且细胞凋亡率与ID4 mRNA的相对表达水平呈高度相关(r=0.95)。5-Aza-CdR处理k562细胞48小时后,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期。结论:甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR能促使CML急红变细胞系k562细胞中沉默的ID4基因重新表达,可能进而参与k562细胞凋亡和细胞周期阻滞的调控。

关键词： DNA结合抑制因子4 k562细胞系 5-氮杂-2'-脱氧胞苷细胞周期细胞凋亡

全反式维甲酸联合猪胆酸钠对k562和kasumi-1细胞系生物活性抑制作用

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中国实验血液学杂志 2013年第4期21卷 879-885页

作者：常城郭搏张琳朱宏丽卢学春范辉李素霞杨波刘洋翟冰杨洋冉海红林洁中国人民解放军总医院南楼血液科北京100853

本研究旨在探索全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合猪胆酸钠(SBA-Na)对人白血病k562细胞系及kasumi-1细胞系生物学活性的影响及其作用机制。分别配制浓度为10-6mol/L(W1)、10-4mol/L(W2)的ATRA溶液及浓度为100μg/ml(Z1)、200μg/ml(Z2)的SBA-Na溶液,分别使用W1、W2、Z1、Z2、W1+Z1、W2+Z2处理上述2种细胞系,并设立不加药的空白对照组。镜下观察不同处理组细胞形态及生长情况;应用CCk-8法检测细胞增殖能力,绘制细胞生长抑制曲线;分别采用PI单染和PI/Annexin V双染流式细胞术检测各加药组k562细胞和kasumi-1细胞的细胞周期及凋亡的变化;采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)法检测k562细胞系各组CyclinA基因表达量的变化。结果表明,ATRA及SBA-Na对2种细胞均有抑制增殖作用,两者联合用药的作用更明显;各给药组与对照组相比,细胞周期分布发生明显变化,处理组细胞凋亡明显增加,尤以ATRA联合SBA-Na给药组凋亡最为明显。低浓度SBA-Na处理组Cyclin A表达上调,其他处理组Cyclin A表达均下调,且存在量效关系。结论:ATRA及SBA-Na均可抑制k562细胞及kasumi-1胞系增殖,促进其凋亡,且二者联合效果更明显,对于k562细胞系,两者可能是通过下调Cyclin A基因表达而发挥作用。

关键词：全反式维甲酸猪胆酸钠 k562细胞系 kasumi-1细胞系细胞增殖细胞凋亡

MCUR1对k562细胞系增殖、周期和凋亡的影响

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军事医学 2018年第1期42卷 29-33,43页

作者：鹿慧刘松波刘信燚平杰张红星周钢桥安徽医科大学研究生院合肥230032 军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室国家蛋白质科学中心(北京)北京100850 空军军医大学西安710032

目的探讨线粒体钙单向转运体调节因子1(mitochondrial calcium uniporter regulator 1,MCUR1)对慢性髓系白血病细胞系k562细胞的增殖、周期和凋亡的影响以及可能的分子机制。方法通过慢病毒包装将MCUR1敲低重组质粒转染k562细胞系,筛选... 详细信息

目的探讨线粒体钙单向转运体调节因子1(mitochondrial calcium uniporter regulator 1,MCUR1)对慢性髓系白血病细胞系k562细胞的增殖、周期和凋亡的影响以及可能的分子机制。方法通过慢病毒包装将MCUR1敲低重组质粒转染k562细胞系,筛选出稳定低表达MCUR1蛋白的k562细胞系。实时定量PCR(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)实验检测细胞中MCUR1基因的表达水平;蛋白质免疫印迹(Western blotting,WB)实验检测细胞中MCUR1蛋白及凋亡相关蛋白P53、BAX和BCL2的表达水平;细胞增殖实验(cell counting kit-8,CCk-8)检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 MCUR1敲低重组质粒转染k562细胞后,经筛选获得了稳定低表达MCUR1蛋白的细胞系;敲低MCUR1可显著抑制k562细胞增殖,诱导k562细胞凋亡,但不影响k562细胞周期;同时,敲低MCUR1能增加P53蛋白的表达,提高蛋白BAX/BCL2的比例。结论敲低MCUR1可显著抑制k562细胞增殖,促进其凋亡。

关键词：白血病髓样慢性期 MCURl k562细胞系细胞增殖细胞凋亡细胞周期

Rigosertib对白血病细胞系HEL和k562的抗肿瘤作用及机制研究

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中国实验血液学杂志 2017年第5期25卷 1362-1366页

作者：许峰常春康李晓贺琪吴凌云张征上海交通大学附属第六人民医院血液科上海200233

目的:探讨Rigosertib对白血病细胞系HEL和k562细胞的凋亡、增殖和细胞周期的影响及其作用机制。方法:Rigosertib梯度浓度作用于HEL和k562细胞,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,WST-1法绘制细胞增殖曲线,PI染色流式细胞术检... 详细信息

目的:探讨Rigosertib对白血病细胞系HEL和k562细胞的凋亡、增殖和细胞周期的影响及其作用机制。方法:Rigosertib梯度浓度作用于HEL和k562细胞,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,WST-1法绘制细胞增殖曲线,PI染色流式细胞术检测细胞周期,流式细胞术胞内染色检测胞内信号通路蛋白表达。结果:Rigosertib明显诱导HEL和k562细胞凋亡且呈现时间依赖性(r=0.997)和剂量依赖性(r=0.987);以低剂量Rigosertib浓度(0.5μmol/L)分别作用于HEL和k562细胞6-54 h,明显抑制HEL和k562细胞增殖,诱导HEL和k562细胞阻滞于 G_0/M期, G_1期细胞比例明显降低。流式细胞术分析显示,Rigosertib激活胞内凋亡蛋白cleaved caspase 3和cleaved PARP蛋白的表达,同时抑制增殖蛋白BCL-2和Cyclin D1蛋白的表达。此外Rigosertib明显抑制AkT、磷酸化AkT(S473)和磷酸化GSk-3α/β(S21/9)的表达。结论:Rigosertib诱导白血病细胞系HEL和k562细胞凋亡,增殖抑制和细胞周期阻滞,其抗肿瘤作用可能通过抑制AkT-GSk信号通路而实现的。本研究为rigosertib进一步应用于临床前研究提供了实验依据。

关键词： rigosertib HEL细胞系 k562细胞系细胞增殖细胞凋亡细胞周期 AkT-GSk信号通路

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人红白血病k562细胞系生物学活性及DNA结合抑制因子4基因表达的影响

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5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人红白血病K562细胞系生物学活性及DNA结合...

作者：王利芳华中科技大学

学位级别：硕士

【目的】研究5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人慢性粒细胞白血病（CML）急红变细胞系k562细胞生物学活性和DNA结合抑制因子4（ID4）基因表达的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点。【方法】1.应用甲基化特异性PCR（MS-PCR）方法... 详细信息

【目的】研究5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人慢性粒细胞白血病（CML）急红变细胞系k562细胞生物学活性和DNA结合抑制因子4（ID4）基因表达的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点。【方法】1.应用甲基化特异性PCR（MS-PCR）方法检测CML急红变细胞系k562细胞中ID4基因甲基化情况。2.实时荧光定量PCR（RQ-PCR）检测不同浓度5-Aza-CdR（0.5,2,5,10μM）处理k562细胞48h后ID4 mRNA的表达水平。3. FITC标记的膜联蛋白V/碘化丙锭（Annexin V-FITC/PI）双染色流式细胞术分析不同浓度5-Aza-CdR作用24h,48h,72h后细胞凋亡率的变化,并分析5-Aza-CdR作用48h后细胞周期的变化。【结果】k562细胞中存在ID4基因的甲基化;5-Aza-CdR处理后k562细胞ID4 mRNA表达增加,并具有浓度依赖性。ID4基因的表达水平在不同药物处理组之间差异具有统计学意义（P ＜ 0.01）。5-Aza-CdR可使k562细胞凋亡率增加,并且作用呈时间剂量依赖性。5μM 5-Aza-CdR处理k562细胞24h,48h,72h后细胞凋亡率分别为15.3%,17.6%,21.3%。不同浓度5-Aza-CdR（0.5,2,5,10μM）处理k562细胞48h后细胞凋亡率分别为6.9%,12.6%,17.6%,29.3%。与对照组相比,统计学差异具有显著性（P＜0.05）。5-Aza-CdR处理k562细胞48h后,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期。0μM、2μM和5μM 5-Aza-CdR处理48h后G0/G1期细胞分别为26.45%,33.49%,40.68%;G2/M期细胞分别为17.54%,8.44%,6.48%。处理组与对照组相比,均有显著统计学差异（P＜0.01）。【结论】甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR能促使CML急红变细胞系k562细胞中沉默的ID4基因重新表达,进而可能参与了k562细胞凋亡和细胞周期阻滞的调控。

关键词： DNA结合抑制因子4 k562细胞系 5-氮杂-2′-脱氧胞苷细胞周期细胞凋亡

SCL基因反义寡核苷酸对k562和CEM细胞系的作用

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中国实验血液学杂志 2002年第5期10卷 404-408页

作者：郑正津胡建达黄淑桦王少元吕联煌福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所福州350001

干细胞白血病 (SCL)基因是新发现的与白血病发生有关的癌基因。为进一步探讨SCL反义寡核苷酸对白血病细胞的作用 ,本研究应用SCL基因的反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (AS PS ODN)分别与k562和CEM白血病细胞系作用 ,观察细胞生长、分化、凋亡... 详细信息

干细胞白血病 (SCL)基因是新发现的与白血病发生有关的癌基因。为进一步探讨SCL反义寡核苷酸对白血病细胞的作用 ,本研究应用SCL基因的反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (AS PS ODN)分别与k562和CEM白血病细胞系作用 ,观察细胞生长、分化、凋亡和SCLmRNA变化。结果显示 :(1 )AS PS ODN对k562和CEM细胞的生长有不同程度的抑制作用 ,并呈量效和时效关系 ;(2 )AS PS ODN作用后k562细胞联苯胺染色阳性率明显增加 ;(3)AS PS ODN作用后k562细胞发生凋亡现象 ,但未观察到CEM细胞凋亡 ;(4)AS PS ODN作用后k562细胞和CEM细胞SCLmRNA表达水平减低 ,同时CEM细胞SIL SCLmRNA表达水平也减低。结论 :AS PS ODN能特异性抑制k562和CEM细胞的增殖 ,减低SCLmRNA和SIL SCLmRNA表达水平 ,同时促进红系分化。

关键词：干细胞白血病基因反义寡核苷酸 k562细胞系 CEM细胞系 SCL 表达水平基因治疗

DNA甲基化调控k562细胞系kir3dl1基因表达

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中国实验血液学杂志 2008年第3期16卷 472-475页

作者：高晓宁于力解放军总医院血液科北京100853

为分析kir3dl1基因启动子区的甲基化模式及其与基因表达的关系,探讨kir3dl1基因的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测k562细胞中kir3dl1基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理k562细胞以诱导CpG岛去甲基化,观察启... 详细信息

为分析kir3dl1基因启动子区的甲基化模式及其与基因表达的关系,探讨kir3dl1基因的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测k562细胞中kir3dl1基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理k562细胞以诱导CpG岛去甲基化,观察启动子区CpG岛甲基化与kir3dl1基因表达的关系。结果显示:k562细胞中kir3dl1基因核心启动子区CpG二核苷酸甲基化频率在20%-100%之间;k562细胞中kir3dl1基因启动子序列在转录因子E2F可能的结合位点上存在1个碱基的突变,并形成1个新的被甲基化的CpG二核苷酸;应用甲基化抑制剂5-氮胞苷可以诱导不表达kir3dl1基因的k562细胞重新表达该基因。结论:k562细胞中kir3dl1基因表达受启动子甲基化调控,对转录因子E2F的深入研究有助于了解其在kir3dl1基因表达调控中可能的作用。

关键词： kir3dl1基因基因表达调控 DNA甲基化 k562细胞系

冬凌草甲素逆转多药耐药细胞系k562/A02耐药性的研究

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上海医学 2002年第1期25卷 43-45页

作者：郭娟娟邹俊晖潘祥林冯长伟山东大学齐鲁医院血液科 250012 山东省立医院血液科济宁医学院附属医院血液科

目的　探讨冬凌草甲素对多药耐药细胞系k5 6 2 /A0 2耐药性的逆转作用。方法　以柔红霉素(DNR)和高三尖杉酯碱 (HHT)联合不同浓度的冬凌草甲素处理k5 6 2 /A0 2及敏感细胞系k5 6 2 /S ,以四唑盐比色法 (MTT)检测两种化疗药物的半数抑制... 详细信息

目的　探讨冬凌草甲素对多药耐药细胞系k5 6 2 /A0 2耐药性的逆转作用。方法　以柔红霉素(DNR)和高三尖杉酯碱 (HHT)联合不同浓度的冬凌草甲素处理k5 6 2 /A0 2及敏感细胞系k5 6 2 /S ,以四唑盐比色法 (MTT)检测两种化疗药物的半数抑制浓度 (IC50 ) ,以流式细胞仪检测P170蛋白的表达与细胞内DNR的浓度。结果　冬凌草甲素可明显减小k5 6 2 /A0 2细胞对DNR、HHT的IC50 ,降低耐药倍数 ,下调P170蛋白的表达 ,增高细胞内DNR的浓度 ,而对k5 6 2 /S细胞无显著影响。结论　冬凌草甲素可逆转耐药细胞系k5 6 2 /A0 2的耐药性 ,是一种很有希望的抗白血病中药。

关键词：冬凌草甲素多药耐药性逆转 k562细胞系 A02细胞中药研究