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纳升电喷雾毛细管液相色谱-串联质谱鉴定k562细胞株中混合蛋白质

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分析化学 2005年第11期33卷 1547-1550页

作者：蒙根王海龙刘炳玉王鸿丽李卫华王红霞魏开华张学敏杨松成岑坚军事医学科学院国家生物医学分析中心海军总医院血液科

用标准蛋白质混合物建立了一种适用于低丰度混合蛋白质及其异构体分离与鉴定的蛋白质组学方法。通过IPG胶条等电聚焦分离蛋白质,染色后进行混合胶内酶切,采用纳升电喷雾毛细管液相色谱-串联质谱“散弹法(shot-gun)”分析酶切产物,并进... 详细信息

用标准蛋白质混合物建立了一种适用于低丰度混合蛋白质及其异构体分离与鉴定的蛋白质组学方法。通过IPG胶条等电聚焦分离蛋白质,染色后进行混合胶内酶切,采用纳升电喷雾毛细管液相色谱-串联质谱“散弹法(shot-gun)”分析酶切产物,并进行数据库检索鉴定蛋白质。运用该方法从k562细胞株样品中鉴定出14种具有重要功能的蛋白质,部分蛋白质同时在多个条带中出现,可能是异构体。肽段及其碎片离子的平均质量偏差小于0.05 U,综合得分大都远远超过有效值。该方法灵敏、准确度高、分辨率高、省时、便于操作,在鉴定蛋白质异构体方面有优势。

关键词：等电聚焦散弹法蛋白质组学串联质谱 k562细胞株

MAPk在慢性髓细胞白血病k562细胞株信号转导中的作用

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癌症 2003年第2期22卷 140-142页

作者：尚振川孙秉中陈志南王玮冯琦王莎张涛西京医院血液内科第四军医大学细胞工程研究中心陕西西安710032

背景与目的:近年研究表明,ras-MAPk信号传导通路在慢性髓细胞白血病(CML)的发生和发展中起着重要作用。本研究拟探讨丝裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPk)在CML信号传导中的作用及其作用机理。方法:用脂质体转染... 详细信息

背景与目的:近年研究表明,ras-MAPk信号传导通路在慢性髓细胞白血病(CML)的发生和发展中起着重要作用。本研究拟探讨丝裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPk)在CML信号传导中的作用及其作用机理。方法:用脂质体转染法将MAPk的反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASO)导入CML细胞株k562细胞中,通过细胞增殖、DNA合成、MAPk含量和MAPk活性变化检测MAPkASO对k562细胞的作用。结果:MAPkASO可明显抑制细胞增殖、DNA合成、MAPk含量和MAPk活性,其抑制率分别为51.8%、57.1%、45.3%和61.6%,与对照组比较差异有统计学意义(Pk在CML信号转导中起重要,极有可能成为治疗CML的新靶点。

关键词： MAPk 慢性髓细胞白血病 k562细胞株信号转导作用机理

人参皂苷Rg_1诱导人白血病k562细胞株衰老的实验研究

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中国中药杂志 2012年第16期37卷 2424-2428页

作者：蔡世忠周玥刘俊刘典峰姜蓉王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的:观察人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病k562细胞株衰老的作用及其机制。方法:MTT比色法检测Rg1对k562细胞增殖的影响,筛选最佳作用浓度及时间(20μmol.L-1,48 h)。流式细胞术检测Rg1对细胞周期的影响;SA-β-Gal染色检测细胞阳性染色百... 详细信息

目的:观察人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病k562细胞株衰老的作用及其机制。方法:MTT比色法检测Rg1对k562细胞增殖的影响,筛选最佳作用浓度及时间(20μmol.L-1,48 h)。流式细胞术检测Rg1对细胞周期的影响;SA-β-Gal染色检测细胞阳性染色百分率;RT-PCR法检测衰老相关基因p16,p53,p21,Rb的表达;电镜观察细胞衰老超微形态学改变。结果:Rg1在体外能明显抑制k562细胞增殖,使细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著增高(P细胞衰老相关基因的表达上调(P细胞增大,异染色质凝集、碎裂,线粒体体积增大,溶酶体体积增大、数目增多等衰老形态学变化。结论:Rg1能诱导k562细胞衰老,p53-p21-Rb,p16-Rb信号转导通路在其衰老调控中起重要作用。

关键词：人参皂苷Rg1 白血病 k562细胞株细胞衰老

鬼臼酰肼对白血病k562细胞株作用的实验研究

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中药材 2005年第2期28卷 111-113页

作者：俞建陈彻高培龙贾正平兰州大学附属第一医院兰州730000 甘肃中医学院兰州730000 兰州军区总医院兰州730030

目的:研究鬼臼毒素衍生物鬼臼酰肼对k562白血病细胞的抑制增殖、诱导细胞凋亡作用。方法:采用集落形成实验、MTT比色法观察鬼臼酰肼对k562白血病细胞增殖的影响;流式细胞仪等技术手段研究鬼臼酰肼对k562细胞凋亡的影响。结果:鬼臼酰肼... 详细信息

目的:研究鬼臼毒素衍生物鬼臼酰肼对k562白血病细胞的抑制增殖、诱导细胞凋亡作用。方法:采用集落形成实验、MTT比色法观察鬼臼酰肼对k562白血病细胞增殖的影响;流式细胞仪等技术手段研究鬼臼酰肼对k562细胞凋亡的影响。结果:鬼臼酰肼能抑制k562白血病细胞增殖,与对照组相比有显著性差异 (Pk562细胞的凋亡,在 5 0μg/ml处理 48h,鬼臼酰肼组凋亡百分率 33 .5%。结论:鬼臼酰肼具有抗肿瘤活性,鬼臼毒素衍生物的不同结构对抗肿瘤活性有一定影响。

关键词：鬼臼毒素白血病细胞 k562 增殖 k562细胞株凋亡抗肿瘤活性诱导百分率剂量

反义寡核苷酸靶向hTERT对k562细胞株端粒酶活性和细胞凋亡的影响

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中国实验血液学杂志 2008年第1期16卷 48-53页

作者：应晓杨方美云王一大连大学附属中山医院血液科辽宁大连116001 大连医科大学附属第一医院血液科辽宁大连116011

本研究探讨靶向封闭端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的反义硫代寡核苷酸(antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,ASPSODN)对k562细胞目的基因抑制作用及对端粒酶活性和细胞凋亡的影响。选用3种浓度ASPSODN,分别为0.2μmol/L、0.6μmol/L、1.0μmol/L,同时设空白组、脂质体组和三种相同浓度正义硫代寡核苷酸(SPSODN)作为对照,转染到人红白血病细胞株k562,于24、48小时收集细胞进行检测。用RT-PCR检测靶基因hTERT mRNA的表达,TRAP-ELISA检测细胞端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果表明:①k562细胞被转染24小时后,hTERT mRNA的表达在脂质体组为0.80±0.24,在0.2μmol/LASPSODN组为0.69±0.12,在SPSODN组为0.72±0.25,它们与空白对照组(0.85±0.28)无统计学差异(p>0.05),而0.6μmol/LASPSODN组的hTERT mRNA的表达(0.42±0.16)比脂质体组明显下调(p细胞死亡明显增多。②24小时端粒酶相对活性空白对照组为88.9%,脂质体作用组为77.7%,两者无显著性差异;0.2、0.6、1.0μmol/LASPSODN作用后端粒酶相对活性分别为60.6%、52%、58%,与空白对照组相比均有显著性差异(p细胞凋亡率分别为4.34%和1.83%,脂质体作用组为1.84%,空白对照组为1.07%,ASPSODN和SPSODN组两者间有统计学差异(pk562细胞hTERT mRNA的表达,明显下调k562细胞株端粒酶活性,最佳作用浓度为0.6μmol/L,但抑制时间较短,24小时明显抑制,48小时则有所恢复。高浓度(1.0μmol/L)寡核苷酸表现出一定的细胞毒性;48小时0.6μmol/LASPSODN能明显诱导细胞凋亡,而SPSODN组则无此作用,两者间有显著性差异(p<0.05)。

关键词：端粒酶端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸 k562细胞株细胞凋亡

三氧化二砷、人参皂甙、β-榄香烯联合环磷酰胺对k562细胞株端粒-端粒酶系统的作用(英文)

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中国实验血液学杂志 2006年第6期14卷 1089-1095页

作者：王一方美云大连医科大学附属第一医院血液科大连116011

本研究探索三氧化二砷、人参皂甙、β榄香烯单独及联合环磷酰胺应用对k562细胞株端粒长度和端粒酶活性的调节作用,探讨上述药物抗白血病的作用机制。用不同浓度的三氧化二砷、人参皂甙及β榄香烯单独及联合环磷酰胺与人类红白血病细胞株... 详细信息

本研究探索三氧化二砷、人参皂甙、β榄香烯单独及联合环磷酰胺应用对k562细胞株端粒长度和端粒酶活性的调节作用,探讨上述药物抗白血病的作用机制。用不同浓度的三氧化二砷、人参皂甙及β榄香烯单独及联合环磷酰胺与人类红白血病细胞株k562共培养,采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性、Southern杂交法检测端粒长度。观察上述药物对k562细胞端粒酶活性及端粒长度的影响。结果表明①经人参皂甙、三氧化二砷、β榄香烯及环磷酰胺作用后,k562细胞株端粒酶活性下降,下降程度呈浓度时间依赖性。当与环磷酰胺联合应用后,下降程度更明显。②三氧化二砷、人参皂甙、β-榄香烯作用后k562细胞的存活率下降,且抑制作用呈浓度、时间依赖性。当与环磷酰胺联合应用后,抑制作用更明显。③三氧化二砷、人参皂甙、β榄香烯及环磷酰胺作用于k562细胞株72小时后,端粒长度略有延长。结论三氧化二砷、人参皂甙、β榄香烯及环磷酰胺均能抑制k562细胞株的生长及端粒酶活性,抑制端粒酶活性可能是其抗肿瘤作用的机制之一;三氧化二砷、人参皂甙、β榄香烯与环磷酰胺联合应用后抑制作用增强;联合环磷酰胺可望降低上述药物的给药浓度。抑制端粒酶活性后,k562细胞株的端粒长度略有延长,提示除了端粒酶以外,白血病细胞可能存在其他的端粒长度调节机制。

关键词：端粒-端粒酶三氧化二砷人参皂甙 β榄香烯 k562细胞株

人参皂苷Rg1诱导人红白血病k562细胞株衰老与p16-Rb信号通路的相关性

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1310-1314页

作者：蔡世忠刘俊周玥刘典锋杨斌姜蓉王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨人参皂苷Rg1(以下简称Rg1)诱导人红白血病k562细胞株衰老与p16-Rb信号通路的相关性。方法以不同浓度的Rg1(0、5、10、20、40和80μmol/L)作用于k562细胞不同时间(24、48、72 h),MTT法筛选Rg1抑制k562细胞增殖的最佳作用浓度及... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1(以下简称Rg1)诱导人红白血病k562细胞株衰老与p16-Rb信号通路的相关性。方法以不同浓度的Rg1(0、5、10、20、40和80μmol/L)作用于k562细胞不同时间(24、48、72 h),MTT法筛选Rg1抑制k562细胞增殖的最佳作用浓度及作用时间,以该浓度干预k562细胞不同时间,流式细胞术检测细胞的细胞周期;以最佳浓度Rg1干预k562细胞最佳时间,集落培养法检测细胞集落形成能力;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率;透射电镜观察细胞的超微结构;Southern blot检测细胞的端粒长度;Western blot检测细胞中P16和RB蛋白的表达。结果 Rg1在体外可明显抑制k562细胞增殖,其最佳作用浓度及作用时间分别为20μmol/L和48 h;经20μmol/L Rg1诱导48 h的k562细胞与常规培养对照组相比,细胞出现G2/M期阻滞(P细胞体积增大,且溶酶体,线粒体体积增大,数目增多,端粒缩短加速(Pk562细胞株衰老,可能与Rg1激活了p16-Rb信号通路有关。

关键词：人参皂苷Rg1 人红白血病 k562细胞株细胞衰老 p16-Rb信号通路

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丹参酮Ⅱ A对k562细胞株的诱导分化

华西医科大学学报 2002年第1期33卷 80-83页

作者：吴俣羊裔明孟文彤李云贾永前刘霆四川大学华西医院血液科成都610041

目的　了解丹参酮 A(Tan A)对 k5 6 2细胞株的生长影响及红系诱导分化作用 ,探讨其可能的作用机制。方法　细胞培养、形态观察和流式细胞术检测等。结果　 Tan A对 k5 6 2细胞有生长抑制作用 ,而适当浓度的 Tan A可诱导 k5 6 2细胞向... 详细信息

目的　了解丹参酮 A(Tan A)对 k5 6 2细胞株的生长影响及红系诱导分化作用 ,探讨其可能的作用机制。方法　细胞培养、形态观察和流式细胞术检测等。结果　 Tan A对 k5 6 2细胞有生长抑制作用 ,而适当浓度的 Tan A可诱导 k5 6 2细胞向红系分化。用 0 .5 μg/ m l的 Tan A处理后 ,k5 6 2细胞的凋亡细胞增加 ,G0 / G1 期细胞堆积 ,c- m yc、bcl- XL 和 H- ras的表达下降 ,p5 3和 Rb的表达增加。结论　 Tan A对 k5 6 2细胞有生长抑制及诱导红系分化的作用。

关键词：丹参酮ⅡA k562细胞株诱导分化细胞凋亡基因表达急性白血病

反义寡聚脱氧核苷酸对白血病k562细胞株生物特性的影响

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癌症 1997年第4期16卷 251-253页

作者：尚振川宋霆婷孙秉中王春红朱华锋中国人民海军青岛401医院山东济宁市第一人民医院第四军医大学西京医院血液科

目的：探讨反义核酸对白血病Ｋ５６２细胞株的影响。方法：用人工合成的ｂｃｒ３／ａｂ１２反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｂ）及无义寡聚脱氧核苷酸（Ｎ－ＯＤＮ）处理人急性红白血病细胞株Ｋ５６２细胞系，以观察Ｋ５６２细胞的生长及... 详细信息

目的：探讨反义核酸对白血病Ｋ５６２细胞株的影响。方法：用人工合成的ｂｃｒ３／ａｂ１２反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｂ）及无义寡聚脱氧核苷酸（Ｎ－ＯＤＮ）处理人急性红白血病细胞株Ｋ５６２细胞系，以观察Ｋ５６２细胞的生长及其ｂｃｒ３／ａｂ１２癌基因的表达。结果：ＡＳＯ－ｂ能抑制体外培养的Ｋ５６２细胞的生长（抑制率为５３．８３±１０．７８，Ｐ＜０．０５），集落形成（４０μＭ的ＡＳＯ－ｂ的抑制率为８８．９，Ｐ＜０．０５），ＤＮＡ及Ｐ２１０蛋白的合成（１２ｈ抑制率分别为７９．６８±１３．５３，６０．３３，Ｐ＜０．０５）；而对照组对Ｋ５６２细胞则无明显的影响。结论：提示ｂｃｒ３／ａｂ１２癌基因是维持Ｋ５６２细胞恶性生长表型的主要因素，也为慢性髓系白血病的治疗指出了新的方向。

关键词：反义寡核苷酸白血病 k562细胞株慢性