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MDR1基因短发卡样RNA表达载体逆转k562/a02人白血病细胞多药耐药的研究

中华肿瘤杂志 2006年第6期28卷 422-425页

作者：肖希斌谢兆霞秦群中南大学湘雅医院血液科长沙410008 中南大学湘雅医院药剂科长沙410008

目的构建MDR1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对k562/a02人白血病细胞株MDR1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响。方法以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B至k56... 详细信息

目的构建MDR1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对k562/a02人白血病细胞株MDR1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响。方法以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B至k562/a02细胞株,通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法,检测MDR1基因表达及P-gp表达水平的变化；以MTT法检测阿霉素(ADM)对k562/a02细胞的半数抑制浓度(IC_(50))；高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内ADM含量。结果构建的2种重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B均明显抑制k562/a02细胞株MDR1基因表达,抑制率最高为48．2%±2．5%；同时抑制P-gp蛋白的表达,抑制率最高为50．67%。对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为40．8%和62．4%；同时使k562/ a02细胞内ADM含量增加。结论shRNA表达载体可明显抑制k562/a02细胞MDR1 mRNA的转录和P-gp蛋白的表达,增加k562/a02细胞内ADM含量,恢复k562/a02细胞对化疗药物的敏感性,逆转MDR1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药。

关键词： MDR1基因真核表达载体 k562/a02人白血病细胞株 P-糖蛋白多药耐药

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