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人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体在CHO k1细胞中的表达及鉴定

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中国生物制品学杂志 2018年第11期31卷 1222-1226,1229页

作者：周朋张琨许磊涛叶艺孔茜杨帅彭玲黄颖孔健北京绿竹生物技术股份有限公司北京101113

目的 CHO k1细胞中表达人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体,并进行鉴定。方法采用电穿孔转染法将含编码人源化抗VEGF单克隆抗体轻、重链全基因的真核表达质粒DGV-k11转染至CHO k1细胞,经L-... 详细信息

目的 CHO k1细胞中表达人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体,并进行鉴定。方法采用电穿孔转染法将含编码人源化抗VEGF单克隆抗体轻、重链全基因的真核表达质粒DGV-k11转染至CHO k1细胞,经L-蛋氨酸亚砜(methionine sulfoxide,MSX)加压筛选和有限稀释克隆筛选,获得分泌表达人源化抗VEGF单克隆抗体的k11细胞株。利用生物反应器培养k11细胞,采用MabSelect SuRe、DEAE Sepharose FF和Eshmuno S凝胶色谱纯化培养液,以贝伐珠单抗(Bevacizumab)作为阳性对照,分析人源化抗VEGF单克隆抗体的纯度、电荷异质性、相对分子质量、N-末端序列、等电点及生物学活性。结果人源化抗VEGF单克隆抗体还原和非还原型CE-SDS分析图谱峰形及电荷异质性与阳性对照相似,轻、重链N-末端氨基酸序列一致;人源化抗VEGF单克隆抗体及阳性对照的SEC-HPLC单体纯度分别为97.46%和97.08%,完整相对分子质量分别为149 201.76和149 201.81,主峰等电点分别为7.31和7.32,生物学活性分别为0.993×10~4和0.960×10~4 U/mg。结论于CHO细胞中成功表达了人源化抗VEGF单克隆抗体,与贝伐珠单抗(Bevacizumab)具有相似的纯度、电荷异质性及生物学活性,本实验为CHO细胞大规模表达人源化抗VEGF单克隆抗体奠定了基础。

关键词：血管内皮生长因子单克隆抗体 CHO k1细胞

siRNA抑制HMGA1基因表达对甲状腺乳头状癌k1细胞增殖的影响

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安徽医科大学学报 2016年第6期51卷 783-786页

作者：周大新周锐李德群董慧明张晖朱金海马小开陈春春马桂凯陈海龙王志军蚌埠医学院第一附属医院肿瘤外科蚌埠233004 安徽医科大学淮北临床学院、淮北市人民医院普外科淮北235100

目的研究HMGA1-siRNA基因对甲状腺乳头状癌k1细胞增殖的影响。方法 HMGA1-siRNA组转染HMGA1的小干扰RNA(siRNA);阴性对照组转染HMGA1的无关序列,并转染甲状腺乳头状癌k1细胞。采用CCk-8法检测转染HMGA1-siRNA基因后对k1细胞增殖的影响;R... 详细信息

目的研究HMGA1-siRNA基因对甲状腺乳头状癌k1细胞增殖的影响。方法 HMGA1-siRNA组转染HMGA1的小干扰RNA(siRNA);阴性对照组转染HMGA1的无关序列,并转染甲状腺乳头状癌k1细胞。采用CCk-8法检测转染HMGA1-siRNA基因后对k1细胞增殖的影响;RT-PCR法检测正常组、HMGA1-siRNA组和阴性对照组的HMGA1-mRNA表达;Western blot法检测三组的HMGA1蛋白表达;Transwell侵袭实验检测三组HMGA1-siRNA基因转染后k1细胞的侵袭能力。结果 HMGA1-siRNA基因对k1细胞的抑制增殖作用明显,呈现时间-剂量依赖关系;HMGA1-siRNA基因在k1细胞中mRNA和蛋白的表达显著低于正常组和阴性对照组;HMGA1-siRNA组k1细胞侵袭能力显著低于正常组和阴性对照组。结论 siRNA可以沉默HMGA1基因,减缓甲状腺乳头状癌k1细胞增殖。

关键词： HMGA1-siRNA基因甲状腺乳头状癌 k1细胞干扰技术RNA

微小RNA-145通过靶向锌指蛋白转录因子5抑制甲状腺乳头状癌k1细胞的增殖及侵袭

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中华实验外科杂志 2019年第4期36卷 635-638页

作者：石东亮陈亮杨猛杨文华丁明剑沧州市中心医院甲状腺乳腺外二科 061001

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-145通过调节锌指蛋白转录因子5(kLF5)对甲状腺乳头状癌k1细胞增殖及侵袭能力的影响。方法利用TargetScan和PicTar对人甲状腺乳头状癌k1细胞株的miR-145靶基因进行预测,采用双荧光素酶报告基因验证miR-145对... 详细信息

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-145通过调节锌指蛋白转录因子5(kLF5)对甲状腺乳头状癌k1细胞增殖及侵袭能力的影响。方法利用TargetScan和PicTar对人甲状腺乳头状癌k1细胞株的miR-145靶基因进行预测,采用双荧光素酶报告基因验证miR-145对靶基因的直接调控。应用细胞计数试剂盒(CCk-8)检测转染miR-145模拟物及miR-145模拟物同时过表达kLF5的甲状腺乳头状癌k1细胞在4 d的吸光度(A450)值以判断其增殖能力。应用平板克隆形成实验检测转染miR-145模拟物及miR-145模拟物同时过表达kLF5的甲状腺乳头状癌k1细胞孵育2周后克隆细胞的数量以判断其克隆能力。应用Transwell侵袭实验检测转染miR-145模拟物及miR-145模拟物同时过表达kLF5的甲状腺乳头状癌k1细胞孵育48 h后穿膜细胞数以判断其侵袭能力。结果TargetScan和PicTar软件预测显示kLF5基因是miR-145的潜在靶基因。双荧光报告基因的相对荧光值显示,与共转染miR-145模拟物和kLF5-mt组比较,共转染miR-145模拟物和kLF5-wt组荧光素酶活性显著下降(t=14.907,Pk-8实验结果显示,miR-145模拟物转染组k1细胞在4 d检测到的A450 nm值(0.433±0.003)明显低于阴性对照组及共转染miR-145模拟物和过表达kLF5组(0.534±0.004、0.522±0.005),差异有统计学意义(t=29.954、22.816,PkLF5组比较,差异无统计学意义(t=3.035,P>0.05)。平板克隆实验结果显示,miR-145模拟物转染组k1细胞克隆的形成数[(67.00±3.52)个]明显低于阴性对照组及共转染miR-145模拟物和过表达kLF5组[(113.00±4.16)、(109.00±2.52)个],差异有统计学意义(t=10.281、12.124,PkLF5组比较,差异无统计学意义(t=2.774,P>0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,miR-145模拟物转染组k1细胞穿过基底膜细胞数[(54.00±1.15)个]明显低于阴性对照组及共转染miR-145模拟物和过表达kLF5组[(127.00±4.58)、(119.00±4.51)个],差异有统计学意义(t=35.839、23.579,PkLF5组比较,差异无统计学意义(t=1.906,P>0.05)。结论miR-145通过靶向调节kLF5抑制甲状腺乳头状癌k1细胞的增殖及侵袭。

关键词：微小RNA-145 锌指蛋白转录因子5 k1细胞增殖侵袭

转染ZNF703-siRNA对人甲状腺乳头状癌k1细胞增殖凋亡影响的研究

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转染ZNF703-siRNA对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖凋亡影响的研究

作者：臧露阳华北理工大学

学位级别：硕士

目的锌指蛋白703(zinc finger protein 703,ZNF703)是NET家族新近发现的成员,目前认为,ZNF703主要是通过负向调节转录、激活细胞周期相关转录基因发挥作用。本研究采用慢病毒转染技术干扰甲状腺乳头状癌k1细胞ZNF703信号的表达,通过检测... 详细信息

目的锌指蛋白703(zinc finger protein 703,ZNF703)是NET家族新近发现的成员,目前认为,ZNF703主要是通过负向调节转录、激活细胞周期相关转录基因发挥作用。本研究采用慢病毒转染技术干扰甲状腺乳头状癌k1细胞ZNF703信号的表达,通过检测ZNF703基因的表达水平,主要探讨ZNF703基因对k1细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,为甲状腺癌的基因靶向治疗提供新的研究方向。方法1 RNA干扰技术下调ZNF703的表达筛选出最有效ZNF703-siRNA序列及k1细胞转染最适条件的摸索:甲状腺癌k1细胞分为5组:空白对照组、转染阴性载体对照组、转染阳性载体组,其中阳性载体组为设计合成的3对靶向人ZNF703基因的小干扰RNA(ZNF703-siRNA-1、ZNF703-siRNA-2、ZNF703-siRNA-3),采用表达绿色荧光的病毒载体转染体外甲状腺乳头状癌k1细胞,确定最适的病毒转染序列以及MOI值。慢病毒与细胞融合72h后荧光扫描显微镜下观测转染效率,采用Real-time PCR检测各组ZNF703 m RNA表达水平并筛选出最有效的siRNA。2 ZNF703基因沉默对甲状腺乳头状癌k1细胞蛋白表达水平的影响:k1细胞分组同前,采用免疫印迹法分别检测3组细胞目的蛋白表达水平。3ZNF703基因沉默对甲状腺乳头状癌k1细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响:分别应用MTT、流式细胞术、Hoechst 33342染色、Transwell侵袭实验检测空白对照组、阴性对照组、转染组k1细胞增殖、凋亡的情况及侵袭能力。4统计学分析:本研究中所有实验均平行重复3次。对符合正态分布的实验数值采用SPSS 17.0统计软件处理,对各实验数值进行组内和组间的单因素方差分析,结果以均数±标准差((?)±s)表示。检验水准设为ɑ=0.05,Pk1细胞时,以MOI=70时转染效率最佳,转染效率>80%。3条ZNF703-siRNA转染k1细胞72h后,ZNF703-siRNA-1、ZNF703-siRNA-2、ZNF703-siRNA-3 m RNA相对表达量分别为0.14±0.13、0.49±0.08、0.55±0.07(P0.05)。3 MTT检测细胞增殖结果:分别于转染24h、48h、72h后行MTT检测,与对照组相比转染组24h开始出现生长抑制,并于转染48小时抑制效应最明显,达29.39%(P0.05)。4 FCM、Hochest 33342染色检测细胞凋亡结果:转染48小时后,FCM结果显示,转染组较空白对照组、阴性对照组凋亡率明显升高,凋亡率分别为(15.32±0.18)%、(5.97±0.16)%、(6.04±0.35)%(P细胞凋亡结果具有一致性。5 Transwell检测细胞侵袭能力:与空白对照组、阴性对照组相比,转入ZNF703-siRNA的k1细胞侵袭数目显著下降,空白对照组、阴性对照组、转染组的穿膜细胞数分别为138.33±2.08、133.33±3.21、62.67±2.51(P0.05)。结论体外实验证实,通过慢病毒干扰技术,转染ZNF703-siRNA能显著下调甲状腺癌k1细胞ZNF703 m RNA的表达,对k1细胞的侵袭能力和增殖能力也有明显的抑制作用,并能显著提高细胞凋亡率,提示ZNF703-siRNA参与了甲状腺癌的发生发展进程。

关键词：甲状腺乳头状癌 k1细胞锌指蛋白703 RNA干扰侵袭凋亡

三叶因子-3对甲状腺乳头状癌细胞增殖及迁移作用的研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2015年第13期29卷 1194-1198页

作者：郑晓春张婷婷吴靖芳张文静张静王保芝张家口学院护理学院河北张家口075000 河北北方学院组胚教研室河北医科大基础医学院解剖教研室

目的:应用小发卡状RNA(shRNA)沉默TFF3基因表达,探索其对人甲状腺癌乳头状癌k1细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用脂质体转染法将靶向TFF3基因的TFF3-shRNA瞬时转染人甲状腺乳头状癌k1细胞,使相应的基因沉默。实验设空白对照组、阴性对照... 详细信息

目的:应用小发卡状RNA(shRNA)沉默TFF3基因表达,探索其对人甲状腺癌乳头状癌k1细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用脂质体转染法将靶向TFF3基因的TFF3-shRNA瞬时转染人甲状腺乳头状癌k1细胞,使相应的基因沉默。实验设空白对照组、阴性对照组和实验组。分别采用逆转录PCR、蛋白质印迹法检测转染TFF3-shRNA后k1细胞中TFF3mRNA及其蛋白的表达;CCk-8实验检测3组细胞增殖能力的改变,细胞划痕试验检测k1细胞侵袭能力的变化。结果:1成功将携有TFF3-shRNA基因的重组质粒Ca#HSH018037-4-HIVmU6转染k1细胞;2RT-PCR检测TFF3mRNA的表达,TFF3基因沉默后TFF3mRNA表达降低,是空白对照组的(0.38±0.11)倍(P1),阴性对照组是空白对照组的1.082倍(P>0.05);3 Western blot提示TFF3基因沉默后TFF3蛋白表达降低59.5%,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P1);4细胞划痕检测k1细胞侵袭能力,实验组(TFF3-shRNA组)k1细胞的侵袭能力减弱,划痕宽度与空白对照组比较减少57.1%,差异有统计学意义(P1);5CCk-8试剂盒检测细胞增殖能力,通过生长曲线分析干扰组k1细胞生长明显慢于空白对照组细胞(P1);实验组(TFF3-shRNA组)k1细胞在6、12、24、36、48h的增殖抑制率分别为16.6%、26.6%、33.6%、33.8%、35.0%,与阴性对照组相比,k1细胞增殖能力减弱。结论:TFF3基因沉默后可引起mRNA的降解、蛋白翻译降低,并抑制k1细胞的侵袭与增殖能力。

关键词： k1细胞 TFF3 增殖侵袭 CCk-8 细胞划痕

夏枯草水提物活性成分促进人甲状腺乳头状癌细胞自噬性死亡

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中国中西医结合杂志 2022年第7期42卷 856-862页

作者：黄海斌张朵宋佳万宇苏桦黎姿茵林秀琴杨杏芬南方医科大学公共卫生学院国家药监局化妆品安全评价重点实验室食物安全与健康研究中心广州510515 广东省疾病预防控制中心广州511430

目的探讨夏枯草(Prunella vulgaris L.)水提物中活性成分对人甲状腺乳头状癌细胞株k1自噬性死亡的影响。方法通过高效液相色谱串联质谱分析夏枯草水提物中的活性成分,采用CCk-8观察海藻糖、山柰酚、原儿茶酸、丹酚酸B、金丝桃苷、虫草... 详细信息

目的探讨夏枯草(Prunella vulgaris L.)水提物中活性成分对人甲状腺乳头状癌细胞株k1自噬性死亡的影响。方法通过高效液相色谱串联质谱分析夏枯草水提物中的活性成分,采用CCk-8观察海藻糖、山柰酚、原儿茶酸、丹酚酸B、金丝桃苷、虫草素、木犀草素及水飞蓟宾8种活性成分对k1细胞及人正常甲状腺滤泡上皮细胞HUM-CELL-0097的作用。使用平板克隆实验观察IC_(50)组(120 mmol/L海藻糖)和IC_(50)组(110μmol/L山柰酚)对k1细胞增殖能力的影响。海藻糖分为对照组、0.5 IC_(50)(60 mmol/L)和IC_(50)组(120 mmol/L),山柰酚分为对照组、0.5 IC_(50)(55μmol/L)和IC_(50)组(110μmol/L),分别处理细胞24 h,Western Blot测定k1细胞内自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3Ⅱ、P62)的表达量,透射电镜观察自噬小体形成情况,以上试验均重复3次。结果夏枯草水提物中具有潜在抗肿瘤作用的物质包括海藻糖(3.16%)、山柰酚(0.11%)、原儿茶酸(0.25%)、丹酚酸B(2.11%)、金丝桃苷(0.18%)、虫草素(0.10%)、木犀草素(0.084‰)及水飞蓟宾(0.092%)。海藻糖、木犀草素、水飞蓟宾、虫草素及山柰酚可抑制k1细胞增殖(P细胞活力产生影响(P>0.05)。海藻糖及山柰酚抑制k1细胞增殖的IC_(50)分别为120 mmol/L和110μmol/L,IC_(50)浓度的海藻糖及山柰酚处理k1细胞10 d,k1细胞的增殖克隆能力显著降低。使用0.5 IC_(50)及IC_(50)浓度的海藻糖及山柰酚处理k1细胞24 h,胞内Beclin-1及LC3Ⅱ蛋白表达增加(Pk1细胞自噬性死亡。

关键词：夏枯草海藻糖山柰酚 k1细胞自噬

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治疗性单克隆抗体培养工艺的优化

沈阳药科大学学报 2016年第1期33卷 78-81页

作者：刘颖王超黄湛秋魏建玲金育南张景海沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳110016 沈阳三生制药有限责任公司辽宁沈阳110027

目的优化抗TNF-α单克隆抗体的培养工艺,提高抗体表达水平。方法对商业化的化学限定培养基和流加物进行筛选,利用JMP软件对流加培养工艺(fed batch culture)进行全因子析因实验设计,对接种细胞密度、流加物的体积分数和流加时间进行优... 详细信息

目的优化抗TNF-α单克隆抗体的培养工艺,提高抗体表达水平。方法对商业化的化学限定培养基和流加物进行筛选,利用JMP软件对流加培养工艺(fed batch culture)进行全因子析因实验设计,对接种细胞密度、流加物的体积分数和流加时间进行优化。结果经过筛选确定了工程细胞株的基础培养基和流加物,经培养工艺优化后,使工程细胞株的最大活细胞密度由原工艺的7×106m L-1增加到14.6×106m L-1,抗体的表达水平由原工艺的1.0 g·L-1增加到2.5 g·L-1,分别增长了109%和150%。结论通过优化抗TNF-α单克隆抗体的培养工艺,使抗体的表达水平得到了提高。

关键词： CHO k1细胞化学限定培养基流加培养工艺工艺优化

CCNG2对甲状腺癌细胞裸鼠移植瘤抑制的实验研究

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CCNG2对甲状腺癌细胞裸鼠移植瘤抑制的实验研究

作者：梁会杰华北理工大学

学位级别：硕士

目的甲状腺癌（Thyroid carcinoma,TC）是一种比较常见的恶性肿瘤,发病率在过去几十年中不断增加,占全身恶性肿物的1%%,为头颈部第一常见恶性肿瘤。尽管通过手术和放射性碘标准治疗后,能够拥有良好的预后及长期生存率。但复发或放射性... 详细信息

目的甲状腺癌（Thyroid carcinoma,TC）是一种比较常见的恶性肿瘤,发病率在过去几十年中不断增加,占全身恶性肿物的1%%,为头颈部第一常见恶性肿瘤。尽管通过手术和放射性碘标准治疗后,能够拥有良好的预后及长期生存率。但复发或放射性碘难治性疾病患者仅有15%0%的10年生存率。因此针对甲状腺癌的分子靶向治疗成为医疗领域迫切需要解决的问题。CCNG2作为周期蛋白家族一员,是细胞周期调控的负性因子,参与调控和肿瘤进展相关的多种功能。CCNG2基因表达异常可以导致中心体的异常扩增引起细胞周期紊乱从而诱导肿瘤发生。我们在前期体外实验研究中发现在甲状腺乳头状癌组织中CCNG2表达明显降低,通过构建过表达CCNG2基因的质粒转染甲状腺癌k1细胞,我们发现k1细胞出现明显的增殖抑制和凋亡增加。为了进一步研究CCNG2过表达后的体内肿瘤抑制效应,采用裸鼠异种移植瘤模型,构建CCNG2过表达慢病毒载体,应用慢病毒稳定转染技术使CCNG2稳定长期表达于k1细胞,对CCNG2在甲状腺癌的抑制作用进行初步的体内实验研究。方法将18只4周龄SPF级BALB/C雌性裸鼠编号,随机数字表法分为空白对照组（k1细胞组）、阴性转染对照组（LV-GFP-Puro细胞组）和CCNG2转染组（LV-CCNG2细胞）3组,每组6只。分别收集生长状态良好的3种细胞（k1细胞、LV-CCNG2细胞、LV-GFP-Puro细胞）消化后重悬于无血清培养基中（终浓度为5×107）于裸鼠右侧腋窝皮下按组别接种建立甲状腺癌异种移植瘤模型,观察并记录裸小鼠的生存状态以及开始出现瘤结节的时间,同时游标卡尺测量瘤体的长轴、短轴计算移植瘤体积,绘制生长曲线。30天后断颈处死所有组别的裸小鼠,摘取瘤组织,通过免疫组织化学和蛋白印记检测法对CCNG2、p53、mdm2蛋白进行定性、定量检测,观察CCNG2过表达对瘤体的体内抑制效应。结果1裸鼠移植瘤成瘤情况及裸鼠成长状况。k1细胞组、LV-CCNG2细胞组、LV-GFP-Puro细胞组分别在接种细胞悬液后长出瘤结节,成瘤率100%。LVCCNG2细胞组裸鼠体重明显大于其他两组,其差异具有统计学意义（F=7.112,Pk1细胞组和LV-GFP-Puro细胞组裸鼠体重无统计学差异（P>0.05）。2裸鼠皮下移植瘤生长曲线。LV-CCNG2细胞组裸鼠移植瘤成瘤时间延迟、瘤组织体积及生长速度缓慢,平均体积明显小于k1细胞组和LV-GFP-Puro细胞组（F=54.983,P细胞悬液接种裸鼠后所形成的肿瘤组织的体积在不同时间观察发现总体积同时也存在差异（F=267.128,Pk1细胞组及LV-GFP-Puro细胞组相比较,移植瘤的生长趋势均无明显统计学差异（P>0.05）。LV-CCNG2细胞组在转染初期,移植瘤生长速度明显减慢,实验后期其生长速度有加快趋势,但仍然低于k1细胞组及LV-GFP-Puro细胞组。3裸鼠移植瘤重量的变化。LV-CCNG2细胞组平均肿瘤质量低于k1细胞组及LV-GFP-Puro细胞组,差异均具有统计学意义（Pk1细胞组和LV-GFPPuro细胞组相比较移植瘤体积和平均肿瘤质量均无明显统计学差异（P>0.05）。4免疫组织化学检测结果。LV-CCNG2细胞组裸鼠瘤组织中CCNG2、p53、mdm2蛋白阳性率较阴性转染对照组及空白对照组明显升高,差异均有统计学意义（Pk1细胞组与LV-k1-NC细胞组比较,移植瘤中CCNG2、p53、mdm2蛋白表达量均无明显的统计学意义（P>0.05）。5 Western blotting检测结果。LV-CCNG2细胞组CCNG2、P53、mdm2蛋白表达量明显高于k1细胞组和LVk1-NC细胞组,差异均有统计学意义（Pk1细胞组和LV-GFP-Puro细胞组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论通过慢病毒介导过表达CCNG2基因有效升高裸鼠皮下移植瘤组织中CCNG2基因表达,有效延长k1细胞成瘤时间和生长速度,裸鼠移植瘤的重量、体积均相应减少。CCNG2基因有可能成为治疗甲状腺癌的新的靶分子。

关键词：细胞周期蛋白G2(CCNG2) 甲状腺癌 k1细胞慢病毒裸鼠

miR-124靶向调节STAT3基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响

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解剖科学进展 2017年第1期23卷 42-45页

作者：陈亮秦伟白静慧抚顺市中心医院普通外科辽宁抚顺113006 辽宁省肿瘤医院综合内科辽宁沈阳110042

目的探讨miR-124及STAT3在甲状腺乳头状癌组织中的表达,以及抑制或过表达miR-124对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测17例患者甲状腺乳头状癌组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,Western bolt法检测STAT... 详细信息

目的探讨miR-124及STAT3在甲状腺乳头状癌组织中的表达,以及抑制或过表达miR-124对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测17例患者甲状腺乳头状癌组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,Western bolt法检测STAT3蛋白的表达。将miR-124 inhibitors及miR-124 mimics转染至甲状腺乳头状癌kl细胞株,Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化,CCk-8方法和克隆形成实验检测转染后kl细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-124在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于癌旁组织,STAT3蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于癌旁组织(Pk1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高(Pk1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著降低,细胞内STAT3蛋白表达亦明显降低(Pkl细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关。

关键词： miR-124 甲状腺乳头状癌 k1细胞 STAT3 增殖侵袭