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S-腺苷-L-甲硫氨酸的分离纯化及其稳定盐的制备过程

S-腺苷-L-甲硫氨酸的分离纯化及其稳定盐的制备过程

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作者：赵晓星浙江大学

学位级别：硕士

S—腺苷—L—甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,简称SAM,SAMe或AdoMet)是一种重要的中间代谢产物,广泛存在于各种生物体中,也是人体内一种重要的生理活性物质。本文主要研究了温度及pH对SAM稳定性的影响;SAM的分离纯化;SAM硫酸盐,SAM... 详细信息

S—腺苷—L—甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,简称SAM,SAMe或AdoMet)是一种重要的中间代谢产物,广泛存在于各种生物体中,也是人体内一种重要的生理活性物质。本文主要研究了温度及pH对SAM稳定性的影响;SAM的分离纯化;SAM硫酸盐,SAM对甲苯磺酸硫酸双盐,SAM1,4—丁二磺酸盐的制备;SAM硫酸盐,SAM对甲苯磺酸硫酸双盐的热稳定性。对SAM稳定性进行研究表明,在4℃的条件下,pH从3.0上升到7.0,SAM的降解速率常数k由1.810×10 gLh增加到4.817×10 gLh,降解速度随pH升高而加快;在pH=3.0的条件下,温度从50℃增加到70℃,降解速率常数kd从4.44×10—2 gL-1h-1增大到7.11×10—1 gL-1h-1,随温度提升迅速加快。采用离子交换法从细胞提取液中分离纯化SAM。此法相对于传统的使用苦味酸,苦酮酸选择沉淀SAM的方法,提高了SAM的回收率,而且减小了操作的危险性和对环境的污染。研究得出SAM提取液在jk110弱酸性离子交换树脂上的最佳上柱条件为:SAM浓度:4.98g/L;流速:2BV/h;SAM料液pH:5.0。以硫酸作为洗脱剂洗脱SAM,得出最佳洗脱条件为0.1mol/L的硫酸,流速2BV/h。流速对洗脱效果基本没有影响。SAM洗脱效率为91.9%。采用有机反相沉淀的方法制备SAM硫酸盐,并在此基础上优化SAM对甲苯磺酸硫酸双盐的制备工艺,解决了以往稳定盐制备中结晶收率低,纯度低的问题。所得SAM硫酸盐产品收率为97.0%,纯度92%;SAM对甲苯磺酸硫酸双盐收率为87.5%。对两种稳定盐的热稳定性进行研究表明,SAM对甲苯磺酸硫酸双盐的热稳定性得到极大的改善。在45℃的条件下,30天后,SAM硫酸盐中有效成分降解了61.0%,而在SAM对甲苯磺酸硫酸双盐中,仅降解了18.4%。在1,4—丁二磺酸二钠盐的制备过程中由于表面活性剂EDTA的加入,反应时间由文献中的72h缩短到3h,反应转化率达到99.39%。此外,采用HPCE建立1,4—丁二磺酸的检测方法。该方法的线性相关系数0.9989,日内变异系数0.05%,日间变异系数0.9%,回收率96.30%。该方法准确性高、重现性好、灵敏度高,非常适合于1,4—丁二磺酸二钠盐含量的测定。以1,4—丁二磺酸洗脱SAM。得出浓度为0.2mol/L为合适的洗脱浓度,洗脱峰集中,洗脱效率为96.17%;流速对洗脱效率影响不大。收集洗脱液,过大孔吸附树脂柱后经喷雾干燥得到SAM1,4—丁二磺酸产品。本文旨在开发并完善已有的SAM分离纯化工艺,建立一条低成本,高产率的SAM稳定性盐的制备途径,为SAM工业化应用打下良好基础。

关键词： S-腺苷-L-甲硫氨酸 SAM SAM稳定性盐 jk110弱阳离子交换树脂 SAM硫酸盐 SAM对甲苯磺酸硫酸双盐 1,4-丁二磺酸

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