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雷帕霉素对jak2 v617f阳性HEL细胞增殖凋亡及PD-1/PD-L1信号通路的影响

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河北医学 2022年第5期28卷 705-710页

作者：齐林王蕊谢旭磊张朝成志勇付建珠承德医学院研究生院河北承德067000 河北省石家庄市第四医院内科河北石家庄050000 河北省保定市第一医院血液内科河北保定071000

目的:探究雷帕霉素(Rapa)对jak2 v617f阳性HEL细胞增殖凋亡及程序性死亡受体1与其配体(PD-1/PD-L1)的影响。方法:体外培养jak2 v617f突变阳性的人红白血病HEL细胞,分别加入浓度为10nM、50nM和100nM的Rapa,设立对照组,CCK-8检测细胞增殖... 详细信息

目的:探究雷帕霉素(Rapa)对jak2 v617f阳性HEL细胞增殖凋亡及程序性死亡受体1与其配体(PD-1/PD-L1)的影响。方法:体外培养jak2 v617f突变阳性的人红白血病HEL细胞,分别加入浓度为10nM、50nM和100nM的Rapa,设立对照组,CCK-8检测细胞增殖抑制率。Caspase 3/7活性检测试剂盒检测各组细胞Caspase 3/7活性,Transwell小室观察各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况及PD-1/PD-L1表达情况,实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中jak2和PD-1、PD-L1 mRNA变化,蛋白质印迹法检测各组哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达。选取5名健康志愿者,分离其淋巴细胞与HEL细胞共培养,加入不同浓度的Rapa,流式细胞术检测各组Treg细胞数量变化。结果:CCK-8检测结果显示:不同终浓度Rapa(10nM、50nM、100nM)在72h时对细胞增殖抑制率分别为(33.33±4.6)%、(49.12±3.72)%、(55.16±4.14)%(Pjak2和PD-L1 mRNA表达量较对照组显著下调(Pjak2通路,导致HEL细胞增殖受抑,PD-L1表达减低,Treg细胞受抑。

关键词：雷帕霉素 jak2 v617f 程序性死亡受体1

cMPDs患者jak2 v617f点突变和ETS2 mRNA表达及其相关性的研究

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cMPDs患者JAK2 V617F点突变和ETS2 mRNA表达及其相关性的研究

作者：孙国锋河北医科大学

学位级别：硕士

目的:真性红细胞增多症(Pv)、原发性血小板增多症(ET)和特发性骨髓纤维化(IMf)组成了经典的BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性疾病(cMPDS)。与BCR/ABL阳性的CML不同,在Pv、ET和IMf患者没有发现可重复性染色体易位,也无特效治疗药物。近期的... 详细信息

目的:真性红细胞增多症(Pv)、原发性血小板增多症(ET)和特发性骨髓纤维化(IMf)组成了经典的BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性疾病(cMPDS)。与BCR/ABL阳性的CML不同,在Pv、ET和IMf患者没有发现可重复性染色体易位,也无特效治疗药物。近期的一些研究发现BCR/ABL阴性的cMPDS患者中广泛存在一种特异性基因突变: jak2基因的第1849位点发生G→T突变,导致jak2蛋白第617位的缬氨酸被苯丙氨酸代替(简称为jak2 v617f)。约90%的Pv患者存在该突变,并且在其他BCR/ABL阴性的cMPDS患者如ET和IMf中也有相当的比例,而在其他血液病中罕见此突变。ETS2(人红血细胞增多症病毒致癌基因同源体2)是ETS转录因子家族的一员,ETS2基因定位于21号染色体21q22.3,编码分子量为56-kDa的蛋白质,它在肿瘤发生、骨骼发育和免疫应答中扮演重要角色。近期有研究表明在BCR/ABL阴性的cMPDs中, jak2 v617f点突变阳性患者的ETS2 mRNA表达水平高于阴性者。本研究旨在探讨BCR/ABL阴性的cMPDs中jak2 v617f点突变的发生率、ETS2 mRNA表达情况及其与cMPDs分类、疗效、并发症发生率及预后之间的关系。通过jak2 v617f突变率与ETS2 mRNA表达情况的相关性研究,了解jak2 v617f点突变与ETS2 mRNA表达水平的异常在cMPDs发生发展中的作用机制,期望为寻找针对性治疗方法奠定基础。方法:1本实验研究对象包括62例BCR/ABL阴性的cMPDs患者[26例Pv、26例ET、9例IMf、1例慢性中性粒细胞性白血病(CNL)];20例慢性粒细胞性白血病(CML)患者、10例急性白血病(AL)患者,15名健康志愿者。62例cMPDS患者为研究组、其他患者和正常人为对照组。所有病例符合WHO诊断标准。2从各组患者及健康志愿者的骨髓或血液中提取单个核细胞,再从其中提取总RNA及DNA。3用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组ETS2 mRNA的表达水平。4用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)筛选各组jak2v617f点突变,根据检查结果将62例cMPDs患者分为突变阳性组及阴性组。全部阳性标本和随机抽取的部分阴性对照标本,经PCR、产物纯化后,进行基因测序以验证突变结果。5分别观察和比较各组病例的临床特征,包括:性别、发病年龄、临床症状及体征、血象、骨髓像、并发症、疗效和预后等。6统计学处理:采用单因素方差分析比较ETS2 mRNA在MPD组、急性白血病组、慢性粒细胞白血病组与正常对照组中的表达水平有无差异;卡方检验分析jak2 v617f点突变率在各组的差异。ETS2 mRNA表达水平在cMPDs jak2 v617f点突变阳性组与阴性组比用t检验。所有数据用SPSS11.0统计软件分析处理。结果:1 62例BCR/ABL阴性的cMPDs患者中,共有44例患者检测到jak2 v617f点突变,包括23/26(88.46%)例Pv,15/26(57.69%)例ET,5/9(55.56%)例IMf。1/1(100.00%)例CNL。在CML、AL及健康志愿者中未检测到jak2 v617f点突变。2 ETS2 mRNA表达水平在cMPDs组(平均值0.2876,阳性率81.96%)、CML组(平均值0.4133,阳性率85.0%)和AL(平均值0.5320,阳性率80.0%)组均显著高于健康志愿者(平均值0.106,阳性率46.7%)。cMPDs组、CML组、AL组之间比较,ETS2 mRNA表达水平均值无明显差别。3在cMPDs组jak2 v617f点突变阳性的病例中ETS2 mRNA表达水平(平均值0.323,阳性率86.0%)明显高于突变阴性病例(平均值0.203,阳性率72.2%),差别有显著意义,P=0.022。4临床特征对比:Pv患者中jak2 v617f点突变阳性组的外周血白细胞计数显著高于阴性组(平均值18.2×109/L vs 7.6×109/L,P=0.035),血小板计数显著高于阴性组(平均值479×109/L vs 277×109/L,P=0.025)。ET患者中jak2 v617f点突变阳性组的血红蛋白显著高于阴性组(平均值146g/L vs 122g/L, P=0.001),白细胞计数显著高于阴性组(平均值14.6×109/L vs 10.9×109/L, P=0.044)。在IMf患者中jak2 v617f点突变阳性组与阴性组之间的临床特征无显著性差异,P>0.05。

关键词：慢性骨髓增殖性疾病 BCR/ABL融合基因 jak2 v617f ETS2 mRNA RT-PCR AS-PCR

BCR-ABL1 is a secondary event after jak2v617f in a patient with essential thrombocythemia who develop chronic myeloid leukemia

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Blood Science 2022年第4期4卷 199-204页

作者： Yanqing Zhang Hailiang Bi Ying Wang Long Chen Jiaqi Pan Ping Xu Wei Wang Shaobin Yang Department of Hematology The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical UniversityHarbinHeilongjiangP.R.China The Seventh Affiliated Hospital Sun Yat-sen of UniversityShenzhenGuangdongP.R.China Department of Molecular Biology Laboratory Tianjin SINO-US-Diagnostics Co.LtdTianjinP.R.China

Several cases such as myeloproliferative neoplasms(MPN)with the coexistence of jak2 and BCR-ABL have been reported.However,cases of transformation of essential thrombocythemia(ET)into chronic myeloid leukemia(CML)during the disease progression were rarely reported.Here,we report the case of a patient with jak2 v617f-positive ET who subsequently acquired BCR–ABL1,which transformed the disease into CML after 10 years from the initial diagnosis.In this study,we dynamically monitored jak2 v617f and BCR-ABL and observed multiple gene mutations,including IDH2,IDH1,ASXL1,KRAS,and RUNX1.It is important to be aware of this potentially clone evolution in disease progression.

关键词： BCR-ABL1 Chronic myeloid leukemia Clonal evolution jak2 v617f Postessential thrombocythemia myelofibrosis

ASXL1缺失对人白血病HEL细胞生物学特性的影响

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中国药理学通报 2021年第8期37卷 1057-1062页

作者：蒋晓肖方楠刘怡宁张明英袁佳佳邢文周圆中国医学科学院血液病医院中国医学科学院血液学研究所北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室国家血液系统疾病临床医学研究中心天津300020

目的本研究以携带jak2 v617f纯合突变的人红白血病细胞HEL为基础,建立ASXL1和jak2 v617f双突变模型,为研究jak2 v617f与ASXL1协同参与MPN疾病进展的机制以及寻找新的药物治疗靶点奠定基础。方法利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术建立AS... 详细信息

目的本研究以携带jak2 v617f纯合突变的人红白血病细胞HEL为基础,建立ASXL1和jak2 v617f双突变模型,为研究jak2 v617f与ASXL1协同参与MPN疾病进展的机制以及寻找新的药物治疗靶点奠定基础。方法利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术建立ASXL1基因敲除的HEL细胞系,并进行一系列细胞功能实验来验证ASXL1敲除对HEL细胞增殖、克隆形成以及对化疗药物的敏感性的影响。结果成功构建ASXL1基因完全敲除的HEL细胞系(HEL-AKO),模拟jak2 v617f突变与ASXL1基因功能缺失性突变并存。细胞功能实验发现,HEL-AKO细胞较HEL细胞迁移能力变强,增殖能力变慢,细胞周期G 2/M期的进程延长,且HEL-AKO细胞的克隆形成能力减弱,药物敏感实验表明,与HEL细胞相比,HEL-AKO细胞对jak抑制剂芦可替尼产生一定耐受。结论运用CRISPR-Cas9基因编辑技术能够实现对jak2 v617f突变的人红白血病细胞系HEL细胞系的特定编辑,且ASXL1基因敲除之后会对HEL细胞的生物学功能产生明显影响。

关键词： ASXL1 jak2 v617f 骨髓增殖性肿瘤 HEL细胞 CRISPR/Cas9 芦可替尼

BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤患者jak2v617f、CALR、MPL基因突变情况及临床特点分析

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现代医学与健康研究电子杂志 2020年第23期4卷 7-10页

作者：王明迪高乃姝余延芳方志坚北京大学首钢医院血液科北京100041 北京大学首钢医院检验科北京100041

目的探讨BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者jak2v617f、CALR、MPL基因突变情况及临床特点。方法选取北京大学首钢医院2016年1月至2019年12月收治的135例BCR-ABL阴性的MPN患者,其中血小板增多症(ET)90例,真性红细胞增多症(Pv)28例,原... 详细信息

目的探讨BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者jak2v617f、CALR、MPL基因突变情况及临床特点。方法选取北京大学首钢医院2016年1月至2019年12月收治的135例BCR-ABL阴性的MPN患者,其中血小板增多症(ET)90例,真性红细胞增多症(Pv)28例,原发性骨髓纤维化(PMf)17例。患者均行骨髓穿刺术,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测骨髓液中基因jak2v617f、MPL、CALR表达水平。比较BCR-ABL阴性MPN患者的基因突变情况;比较BCR-ABL阴性MPN患者的临床特点;比较不同基因突变的ET、Pv、PMf患者血栓发生情况。结果135例BCR-ABL阴性MPN患者中有126例(93.33%)可检测到基因突变,其中jak2v617f突变阳性患者有98例,CALR突变患者有22例,MPL突变患者有6例;135例BCR-ABL阴性的MPN患者中,ET组的发病年龄偏高,女性多于男性,但3组发病年龄、性别比较,差异无统计学意义(P>0.05);白细胞计数(WBC)水平由高到低依次为PMf组、Pv组、ET组,HGB水平由高到低依次为Pv组、ET组、PMf组,PLT水平由高到低依次为ET组、Pv组、PMf组,WBC、HGB、PLT水平组间两两比较,差异均有统计学意义(Pf组患者脾肿大发生率高于Pv组及ET组(Pv组、PMf组血栓发生率分别为42.22%、67.86%、17.65%,Pv组发生率明显高于ET组、PMf组(Pjak2v617f、CALR、MPL基因突变率、分布、血栓栓塞事件等均有各自的特点,其中以Pv患者jak2v617f基因突变阳性率最高,且PMf患者WBC水平、脾肿大发生率最高,HGB、PLT水平最低;此外,CALR突变阳性患者同jak2v617f突变阳性患者相比,发病年龄更年轻、血栓发生率更低,提示预后较好。

关键词：骨髓增殖性肿瘤 BCR-ABL 基因突变 jak2 v617f CALR MPL

jak2基因突变在急性髓细胞白血病中的研究进展

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诊断学理论与实践 2020年第2期19卷 195-198页

作者：徐娜娜吴涛寇明坤白海中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院(原兰州军区兰州总医院)全军血液病中心甘肃兰州730050

急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一种高度异质性的恶性克隆性疾病,可继发于肿瘤相关疾病的化疗、放疗,或由其他血液相关疾病如骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasm,MPN)转化而来,患者具有... 详细信息

急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一种高度异质性的恶性克隆性疾病,可继发于肿瘤相关疾病的化疗、放疗,或由其他血液相关疾病如骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasm,MPN)转化而来,患者具有不同的分子遗传学异常,其与AML的发生、发展密切相关。Janus激酶2(Janus kinase 2,jak2)基因突变多见于MPN,是MPN患者中最常见的突变基因,而jak2 v617f是jak2基因最常见的突变类型。MPN可以转化为AML,继发于MPN的AML患者中jak2v617f突变阳性率为40%~50%6",而原发AML患者的jak2 v617f突变率相对较低。自2005年开始,研究陆续报道了由jak2突变引起的原发AML患者,突变率占初始AML患者的1.1%~2.7%,但该突变对AML患者预后的影响目前仍不明确2。目前,采用jak2特异性抑制剂治疗AML颇有前景,其已被应用于临床,并取得了显著的疗效。本文将就jak2基因在AML中作用的研究进展进行综述。

关键词： jak2 v617f 急性髓细胞白血病骨髓增殖性肿瘤

Ph染色体阴性骨髓增殖性肿瘤血栓事件危险因素分析

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Ph染色体阴性骨髓增殖性肿瘤血栓事件危险因素分析

作者：蔡雪蓉福建医科大学

学位级别：硕士

目的回顾性分析58例费城染色体阴性骨髓增殖性肿瘤(PhMPN)患者的临床特征,其中真性红细胞增多症(Pv)21例,原发性血小板增多症(ET)34例,原发性骨髓纤维化(PMf)3例,探讨PhMPN患者血栓事件发生与PhMPN驱动基因突变类型、纤维蛋白溶解酶原... 详细信息

目的回顾性分析58例费城染色体阴性骨髓增殖性肿瘤(PhMPN)患者的临床特征,其中真性红细胞增多症(Pv)21例,原发性血小板增多症(ET)34例,原发性骨髓纤维化(PMf)3例,探讨PhMPN患者血栓事件发生与PhMPN驱动基因突变类型、纤维蛋白溶解酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因型4G/5G多态性和感染之间相关性。方法选取2018年1月1日至2018年12月31日就诊于福建医科大学附属第二医院血液科住院及门诊PhMPN患者;采用特异性聚合酶联反应(PCR)检测驱动基因突变;测序反应通用试剂盒检测PAI-1基因型4G/5G多态性;采用χ检验统计学方法分析血栓事件发生的影响因素,并对影响因素之间进行比较分析;采用二元Logistic回归统计学方法研究血栓事件发生的独立危险因素。结果1(1)发生驱动基因突变总共51例,突变率为88%(51/58)。jak2基因突变率为76%(44/58),均为jak2 v617f突变;CALR基因突变率为12%(7/58);MPL基因突变率为0%(0/58)。三阴性者为12%(7/58)。(2)在Pv患者中,jak2v617f基因突变率为77%(16/21);CALR基因突变率为0%(0/21)。(3)在ET患者中,jak2 v617f基因突变率为79%(27/34);CALR基因突变率为15%(5/34)。2(1)在Pv患者中,jak2 v617f基因突变阳性者较突变阴性者血栓事件发生率高,但差异无统计学意义。(2)在ET患者中,jak2 v617f基因突变阳性者较突变阴性者血栓事件发生率高,但差异无统计学意义。jak2 v617f基因突变阳性者较CALR基因突变阳性者血栓发生率低,但差异无统计学意义。3(1)在Pv患者中,PAI-1各基因型血栓事件发生率高低为4G4G>5G5G>4G5G,但差异无统计学差异。(2)在ET患者中,PAI-1各基因型血栓事件发生率高低为4G4G>4G5G>5G5G,差异有统计学差异(P=0.04v患者中,有感染患者血栓事件发生率高于无感染患者,差异均有统计学意义(Pv患者中,PAI-1各基因型感染发生率高低为4G4G>5G5G>4G5G,但差异无统计学意义。(2)在ET患者中,PAI-1各基因型感染发生率高低为4G5G>4G4G>5G5G,但差异无统计学意义6(1)在Pv患者中,jak2 v617f基因突变阳性者的PAI-1各基因型频率高低为4G5G>4G4G>5G5G,与jak2 v617f基因突变阴性者比较,差异无统计学意义。(2)在ET患者中,jak2 v617f基因突变阳性者的PAI-1各基因型频率高低为4G4G>4G5G>5G5G,与jak2 v617f基因突变阴性者比较,差异无统计学意义,但与CALR基因突变阳性者比较,差异有统计学意义(P=0.04273.522)。结论1在ET患者中,PAI-1基因型4G4G血栓发生率高于基因型4G5G和5G5G,以及基因型4G5G血栓发生率高于基因型5G5G。2在PhMPN患者中,发生感染者血栓事件发生率高于无感染者。3在ET患者中,jak2 v617f基因突变阳性者中PAI-1基因型4G4G表达率最高,其次是基因型4G5G,基因型5G5G表达率最低。4在PhMPN患者中jak2 v617f基因突变阳性者,如果合并有PAI-1基因型4G4G则考虑为血栓高危病人,该类患者并发感染将又会增加血栓事件发生率,此时应特别重视防控血栓。

关键词：骨髓增殖性肿瘤血栓事件 jak2 v617f 纤溶酶原激活物抑制物-1 感染