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il6 promotes the proliferation and cisplatin resistance of esophageal carcinoma cells via upregulating CXCR7

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IL6 promotes the proliferation and cisplatin resistance of e...

TNF和il6是人骨髓瘤细胞系OH-2的促生长因子

第十一届全国免疫学学术大会

作者：王丹乔亚敏黄岚张毅郑州大学第一附属医院

Objective: Recent studies reveal that il6 plays a key role in chemoresistance in malignancies and modulates chemokine system. However, the role of chemokine system in il6-mediated progression and chemoresistance of Esophageal cancer(EC) remains unclear. Methods: PCR-array was used to evaluate the effects of il6 on chemokine system. The proliferation and cytotoxicity of EC cell line were detected by CCK8 assay and flow cytometry. CXCR7 knockdown cells were also established. Meanwhile, the clinicopathological parameters and survival of EC were ***: We found that CXCR7 was the most upregulated chemokine receptor in EC cells exposed to il6. CXCR7 knockdown reversed the proliferation and chemoresistance of tumor cells. In clinical samples, patients with higher expression of CXCR7 and il6 presented a significantly worse survival when received cisplatin. Conclusion: These results suggest that il6-CXCR7 axis may be a prognostic marker and provide novel targets for combination therapy of EC.

关键词： Esophageal cancer proliferation chemoresistance il6 CXCR7

来源： cnki会议评论

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国际输血及血液学杂志 1995年第2期 114-115页

作者：姜扬文

从1例终末期骨髓瘤患者的胸水中,用浆细胞特异性单抗-B-B免疫磁珠筛选的方法分离出骨髓瘤细胞,纯度大于99％,连续体外培养2个月建株。所用细胞传代培养基中含5ng/ml的il和5ng/ml的TNF。该株细胞被命名为OH-2。OH-2细胞EB病毒阴性,分泌... 详细信息

从1例终末期骨髓瘤患者的胸水中,用浆细胞特异性单抗-B-B免疫磁珠筛选的方法分离出骨髓瘤细胞,纯度大于99％,连续体外培养2个月建株。所用细胞传代培养基中含5ng/ml的il和5ng/ml的TNF。该株细胞被命名为OH-2。OH-2细胞EB病毒阴性,分泌单克隆IgGκ链,表达PCA-1、CD、B-B、CD和两种TNF受体(P、P),而B系的早期细胞分化抗原如CD、CD、CD,仅在有些细胞表面有微弱表达。经DNA指纹图谱分析证实,OH-2细胞系是来自患者骨髓癌细胞。

关键词： TNF 骨髓瘤细胞 il6 OH-2 促生长因子生长介素

二甲双胍通过下调il6抑制卵巢癌肿瘤相关成纤维细胞活性

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二甲双胍通过下调IL6抑制卵巢癌肿瘤相关成纤维细胞活性

作者：徐森华中科技大学

学位级别：硕士

【目的】:探究il6(interleukin-6)在高级别浆液性卵巢癌间质成纤维细胞中的表达情况,以及二甲双胍对间质il6的表达影响继而抑制肿瘤相关成纤维细胞活性的机制;【方法】:利用在线数据库CSIOVDB和GSE40595分析3431和39例卵巢癌标本转录组... 详细信息

【目的】:探究il6(interleukin-6)在高级别浆液性卵巢癌间质成纤维细胞中的表达情况,以及二甲双胍对间质il6的表达影响继而抑制肿瘤相关成纤维细胞活性的机制;【方法】:利用在线数据库CSIOVDB和GSE40595分析3431和39例卵巢癌标本转录组数据比较il6在卵巢癌肿瘤和间质中的表达水平;收集2014年至2016年同济医院妇科肿瘤科室高级别浆液性卵巢癌病例切片及组织进行免疫荧光和分离培养比较其il6蛋白水平差异;比较GSE40595中il6及其相关通路在CAFs与NOFs中表达差异,利用GSEA和TCGA数据分析il6表达水平与CAFs活化程度的相关性;RT-PCR比较原代CAFs中二甲双胍对炎症因子(il-6、OPN、il-1b、COX-2、Cyr61)的m RNA水平影响;Western Blot和免疫荧光检测二甲双胍对人胚肺成纤维细胞系(MRC5-CAFs)上述炎症因子和α-SMA在蛋白水平的影响;RT-PCR和Western Blot在MRC5-CAFs中进一步验证二甲双胍和(或)il-6对CAFs中STAT3及属性相关基因的影响;上清刺激实验比较二甲双胍处理前(后)MRC5-CAFs CM促进肿瘤迁徙和增殖能力的差异;比较3D培养模型中二甲双胍、il-6和Stattic处理后MRC5-CAFs对肿瘤支持作用差异;小鼠皮下瘤模型比较二甲双胍、il6和Stattic处理后成纤维细胞促进肿瘤生长差异。【结果】:在线数据库和病理切片中,肿瘤间质中il6转录水平和蛋白水平均明显高于肿瘤上皮,Western Blot验证配对病人CAFs中il6明显高于肿瘤细胞。GSE40595中CAFs的il6及其相关通路评分均明显高于NOFs,GSEA分析提示CAFs中il6表达水平与CAFs活化程度相关。二甲双胍能够下调CAFs中il6等炎症因子及α-SMA水平,并通过下调MRC5-CAFs中il6抑制STAT3的激活以及CAFs间质属性相关蛋白表达;上清刺激和3D培养实验提示二甲双胍能够抑制CAFs的促肿瘤增殖转移能力,动物实验中二甲双胍能够抑制MRC5-CAFs活化及其促瘤作用。【结论】:卵巢癌中il-6高表达于间质并参与维持CAFs的间质属性,二甲双胍能够下调CAFs中il-6表达水平抑制其活性,并抑制其促瘤作用。

关键词：卵巢癌肿瘤相关成纤维细胞二甲双胍 il6 炎症

il6介导前列腺癌进展及多西他赛抵抗的研究

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IL6介导前列腺癌进展及多西他赛抵抗的研究

作者：刘正浩华中科技大学

学位级别：硕士

目的:描述良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)患者的临床特征和血清细胞因子水平,选出与临床特征关联性最强的细胞因子。接下来细胞水平探索il6是否参与前列腺癌细胞的进展和是否介导多西他赛抵抗。方法:回顾性收集同济医院泌尿外科202... 详细信息

目的:描述良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)患者的临床特征和血清细胞因子水平,选出与临床特征关联性最强的细胞因子。接下来细胞水平探索il6是否参与前列腺癌细胞的进展和是否介导多西他赛抵抗。方法:回顾性收集同济医院泌尿外科2020年至2022年接受检查或治疗的良性前列腺增生及前列腺癌患者共2000例的临床资料,筛选出197例符合标准的病例。根据不同的临床特征分组比较细胞因子水平的差异,根据差异表达的临床特征总数确定关联性最强的细胞因子。采用慢病毒转染的方法构建DU145和PC3敲低il6的稳转细胞系。采用CCK8法,EDU法,克隆形成等方法检测细胞的增殖状态;采用Transwell实验,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;采用CCK8法检测多西他赛的杀伤。给予il6抑制剂LMT-28及il6重组蛋白进行功能试验,并使用EDU法,CCK8法等实验方法检测。结果:一共采用BPHvs M0vs M1,Gleason评分,T分期,N分期,M分期,M1期患者的危险分层及肿瘤负荷等7个临床特征。细胞因子il6在6个特征分组中具有显著性差异。敲低il6后及使用il6抑制剂LMT-28后,前列腺癌细胞的增殖,迁移,对多西他赛抵抗性均降低。结论:细胞因子il6与前列腺癌的恶性程度关联性最强,可能参与前列腺癌的进展。敲低il6后及使用il6抑制剂LMT-28后,前列腺癌细胞的增殖,迁移,对多西他赛抵抗性均降低。第一部分:血清细胞因子与患者临床病理特征关联性分析目的:描述良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)患者的临床特征和血清细胞因子水平,选出与临床特征关联性最强的细胞因子。方法:回顾性收集同济医院泌尿外科2020年至2022年接受检查或治疗的良性前列腺增生及前列腺癌患者共2000例的临床资料,筛选出197例符合标准的病例。根据不同的临床特征分组比较细胞因子水平的差异,根据差异表达的临床特征总数确定关联性最强的细胞因子。结果:一共采用BPHvs M0vs M1,Gleason评分,T分期,N分期,M分期,M1期患者的危险分层及肿瘤负荷等7个临床特征。细胞因子il6在6个特征分组中具有显著性差异。结论:细胞因子il6与前列腺癌的恶性程度关联性最强,可能参与前列腺癌的进展。第二部分:il6介导前列腺癌细胞进展及多西他赛抵抗的基础研究目的:细胞水平探索il6是否参与前列腺癌细胞的进展和是否介导多西他赛抵抗。方法:采用慢病毒转染的方法构建DU145和PC3敲低il6的稳转细胞系。采用CCK8法,EDU法,克隆形成等方法检测细胞的增殖状态;采用Transwell实验,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;采用CCK8法检测多西他赛的杀伤。给予il6抑制剂LMT-28及il6重组蛋白进行功能试验,并使用EDU法,CCK8法等实验方法检测。结果:敲低il6后及使用il6抑制剂LMT-28后,前列腺癌细胞的增殖,迁移,对多西他赛抵抗性均降低。结论:il6参与前列腺癌细胞的进展和多西他赛抵抗。

关键词： BPH 前列腺癌细胞因子 il6 多西他赛

原发性高尿酸血症血尿酸与TNFα、il6的关系的研究

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原发性高尿酸血症血尿酸与TNFα、IL6的关系的研究

作者：路巍青岛大学

学位级别：硕士

目的:观察高尿酸血症病人血清肿瘤坏死因子α(TNF α)与白细胞介素6(il6)水平变化,分析血尿酸与TNFα、il6、糖/胰岛素代谢、脂质代谢紊乱之间的相关关系,试探讨高尿酸血症与慢性炎性损伤的关系。方法:选择高尿酸血症病人116例为高尿... 详细信息

目的:观察高尿酸血症病人血清肿瘤坏死因子α(TNF α)与白细胞介素6(il6)水平变化,分析血尿酸与TNFα、il6、糖/胰岛素代谢、脂质代谢紊乱之间的相关关系,试探讨高尿酸血症与慢性炎性损伤的关系。方法:选择高尿酸血症病人116例为高尿酸血症组(HUA组),其中单纯高尿酸血症病人36例为HUA-1组,高尿酸血症并糖尿病病人30例为HUA-2组,高尿酸血症并冠心病高脂血症病人24例为HUA-3组,高尿酸血症并冠心病高脂血症同时合并糖尿病病人26例为HUA-4组,选择年龄、地域相匹配的健康体检者40例,无冠心病、糖尿病、高血压病史,血糖、血脂、血尿酸正常为正常对照组(CON组)。观察各组年龄、体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)情况,测定血清TNFα、il6水平及血清尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL C)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)含量。结果:HUA-1组在年龄、舒张压、TC、HDLC、FPG与对照组无明显差异的前提下,血清TNFα、il6水平明显高于正常对照组(Pil6水平也明显高于正常对照组(Pil6水平明显高于HUA-1组pil6水平呈正相关(r=0.634,P69,P<0.01),与血清TG、FPB、HOMAIR、WHR、FINS水平呈正相关(r=0.251-0.852,P<0.01),在以UA为因变量的多元逐步回归分析中,WHR、BMI、HDLC、FINS、TNFα进入回归方程(P<0.001)。结论:高尿酸与胰岛素抵抗关系密切,单纯高尿酸血症可引起炎性损伤,高尿酸血症并发糖脂代谢紊乱时会加重炎性损伤。

关键词：高尿酸血症 TNFα il6 炎性损伤

TSP1通过il6/JAK2/STAT3信号转导途径调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原产生

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TSP1通过IL6/JAK2/STAT3信号转导途径调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖...

作者：冯清蓝南方医科大学

学位级别：硕士

瘢痕疙瘩仅在人类中发病,是一种发病机制未知的良性纤维增生性病变,其特征是继发于皮肤损伤(如外伤,烧伤或手术)后成纤维细胞增殖和胶原蛋白过多沉积,瘢痕组织增生隆起,超出皮损边缘。过度增生的瘢痕组织不仅影响外观,带来疼痛和瘙痒,... 详细信息

瘢痕疙瘩仅在人类中发病,是一种发病机制未知的良性纤维增生性病变,其特征是继发于皮肤损伤(如外伤,烧伤或手术)后成纤维细胞增殖和胶原蛋白过多沉积,瘢痕组织增生隆起,超出皮损边缘。过度增生的瘢痕组织不仅影响外观,带来疼痛和瘙痒,还会引起患者的身心疾病。尽管瘢痕疙瘩本质上不是恶性的,但它是真皮的纤维性肿瘤,在漫长的伤口愈合过程中形成,到目前为止,还没有令人满意的治疗方法来治疗这种纤维增生性疾病。TSP1是一种多功能蛋白,既以分泌型蛋白存在,又以不溶性细胞外基质分子形式存在。它可以调节伤口愈合的进程,以及促进众多纤维化疾病的发生。因此阐明TSP1在瘢痕疙瘩中的作用及相关分子机制,有助于阐明瘢痕疙瘩的发病机制,为瘢痕疙瘩的临床治疗找到更好的方法。目的:1.明确TSP1在瘢痕疙瘩与正常皮肤中的差异表达情况;2.探究TSP1对于瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、细胞外基质产生的影响;3.探索TSP1对于瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、细胞外基质产生的作用机制;方法:1.收集瘢痕疙瘩组织和正常皮肤组织,制作石蜡切片和培养原代成纤维细胞。免疫组织化学染色和RT-PCR检测TSP1在正常组织和瘢痕组织差异表达、RT-PCR和Western blot检测TSP1在正常皮肤成纤维细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞中的差异表达;2.分别构建低表达TSP1的瘢痕疙瘩成纤维细胞和用外源性TSP1分子处理正常皮肤纤维细胞,通过EDU、Western blot等检测方法检测成纤维细胞增殖的变化、胶原I的表达变化;3.对低表达TSP1的瘢痕疙瘩成纤维细胞进行RNA-seq,通过差异基因富集,聚类分析等方式分析TSP1敲低对于瘢痕疙瘩成纤维细胞影响,通过GSEA分析富集TSP1敲低后引起的瘢痕疙瘩成纤维细胞基因集的变化;4.通过RT-PCR、Elisa、Western blot等方法检测低表达TSP1的瘢痕疙瘩成纤维细胞以及用外源性TSP1分子处理正常皮肤纤维细胞中的il6/JAK2/STAT3信号转导通路激活状况;用外源性il6分子刺激低表达TSP1的瘢痕疙瘩成纤维细胞检测JAK2/STAT3通路的回复情况;用外源性TSP1分子和JAK2抑制剂同时处理正常皮肤成纤维细胞,检测JAK2抑制剂对于TSP1引起的il6/JAK2/STAT3激活是否具有抑制作用。评估il6/JAK2/STAT3信号转导通路在TSP1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原分泌中的作用;5.通过免疫组化、RT-PCR等检测方法检测il6在瘢痕疙瘩和正常皮肤中的表达情况,通过免疫组化检测p-STAT3瘢痕疙瘩和正常皮肤中的表达情况,分析il6、p-STAT3和TSP1的表达是否具有相关性结果:1.组织化学染色和RTqpcr实验结果显示:与正常皮肤相比,TSP1在瘢痕疙瘩中表达上调;TSP1在KF中蛋白表达上调;2.敲低TSP1能使KF的增殖和胶原I表达明显下降;外源性TSP1分子可以引起NF的增殖和胶原I表达上调;*** seq分析敲低TSP1后KF的基因表达情况火山图和差异基因的聚类分析发现,敲低TSP1后的KF存基因的差异表达,并且GSEA富集到il6/JAK2/STAT3 基因集;***-PCR、Elisa、Western blot结果显示敲低TSP1明显降低KF中il6的表达及其下游JAK2/STAT3通路的激活,而外源性TSP1分子能引起NF中il6的表达增加和该通路的激活;用外源性il6刺激敲低TSP1的KF,结果发现il6能恢复TSP1敲低带来的细胞增殖和胶原I减少,并且重新激活JAK2/STAT3通路;同时,用JAK2抑制剂和TSP1同时刺激NF,结果发现JAK2抑制剂能抑制TSP1带来影响,包括细胞增殖、胶原I和STAT3信号的增加;5.免疫组化、RT-PCR等检结果显示il6在瘢痕疙瘩中表达增加,免疫组化结果显示p-STAT3在瘢痕疙瘩中表达增加,相关性分析得出il6、p-STAT3和TSP1的表达具有正相关性:结论瘢痕疙瘩中异常高表达的TSP1能通过il6/JAK/STAT3信号转导通路促进成纤维细胞的增殖和胶原分泌,这可能是TSP1促进瘢痕疙瘩产生的机制。

关键词： TSP1 瘢痕疙瘩 il6 胶原成纤维细胞

癌相关成纤维细胞通过IL6诱导唾液腺腺样囊性癌细胞发生上皮间质...

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作者：冉妍大连医科大学

学位级别：硕士

唾液腺腺样囊性癌(Salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)是上皮来源的恶性肿瘤,虽生长缓慢,但侵袭性强,易发生远处转移。本课题组已有研究证实SACC中存在癌相关成纤维细胞(Cancer associated fibroblasts,CAFs)。并且,CAFs可... 详细信息

唾液腺腺样囊性癌(Salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)是上皮来源的恶性肿瘤,虽生长缓慢,但侵袭性强,易发生远处转移。本课题组已有研究证实SACC中存在癌相关成纤维细胞(Cancer associated fibroblasts,CAFs)。并且,CAFs可以促进SACC的侵袭。有研究表明,上皮间质转化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)是癌细胞增强侵袭性的重要机制。目的:本研究的主要目的为揭示CAFs是否通过诱导SACC发生EMT而增强其侵袭性,以及SACC发生EMT的分子机制。材料和方法:本研究所用SACC细胞系包括SACC-83和SACC-LM,CAFs细胞为从SACC肿瘤组织内提取的两株原代细胞,分别命名为CAF-A1和CAF-A2。将收集的一天的不含血清的CAFs的条件培养液(Conditional medium,CM)体外诱导SACC细胞,倒置显微镜观察前后SACC细胞形态学的变化。划痕实验考察CAF-A1-CM和CAF-A2-CM诱导SACC前后细胞迁移能力的变化。收集诱导前后的SACC细胞蛋白,用蛋白免疫印记实验(Western blot)检验EMT标记物的表达,具体包括E钙粘蛋白(E-cadherin)、N钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vitmentin),,进行统计学分析。采用微流控芯片方法检测细胞的侵袭性,在一侧细胞培养通道内加入SACC细胞,另一侧刺激诱导通道分别加入CAF-A1-CM和CAF-A2-CM,中间为基质胶(Matrigel),分别观察细胞在24、48、72 h拍照,记录通道内细胞侵袭状况,用Image-Pro Plus测量侵袭距离和面积,进行统计学分析。筛选CAFs中高表达的细胞因子,检测其对SACC侵袭能力的影响。用筛选出的该细胞因子体外诱导SACC细胞,观察细胞诱导前后形态学变化,蛋白免疫印记实验检测肿瘤细胞诱导前后标志物变化。结果:CAF-A1和CAF-A2的CM体外诱导SACC-83和SACC-LM细胞三天后,观察细胞形态发生变化,结果发现细胞间粘附降低,细胞排列稍分散,并且有呈纤维状生长的趋势。细胞划痕实验证实,与空白培养液培养的SACC相比CAF-CM诱导后SACC-83和SACC-LM的迁移能力明显增加,提示CAF-CM可增加SACC的迁移能力。微流控芯片侵袭实验中,对照组和诱导组SACC细胞侵袭的面积和距离有显著差异,CAF-CM诱导组SACC-83和SACC-LM的侵袭面积和距离较对照组有显著增加,数据有统计学意义。蛋白免疫印记实验表明,SACC-83和SACC-LM在经过CAF-CM体外诱导后,上皮标志物E-cadherin下调,间质标志物N-cadherin和Vitmentin上调,差异有统计学意义。因此,从细胞形态学变化、迁移和侵袭能力增加、标志物改变等结果提示CAF-CM可诱导SACC-83和SACC-LM发生EMT。我们进一步发现CAFs中il6高表达,并且细胞因子il6体外诱导SACC-83和SACC-LM后,细胞发生形态学变化,如细胞间粘附降低、且长出细长凸起,有纤维状细胞生长的趋势;蛋白免疫印记实验检测上皮标志物下调,间质标记物上调,结果有统计学意义。上述结果提示il6可促进SACC发生EMT。结论:本研究表明CAFs可以诱导SACC细胞发生EMT,进而促进SACC的侵袭。CAFs可能是通过il-6诱导SACC发生EMT。

关键词：唾液腺腺样囊性癌癌相关成纤维细胞上皮间质转化 il6 侵袭

表达犬il12和il6基因重组狂犬病病毒生物学特性的研究

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表达犬IL12和IL6基因重组狂犬病病毒生物学特性的研究

作者：吴玉婷华南农业大学

学位级别：硕士

狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的侵中枢神经系统(CNS)的一种人兽共患病。一旦感染发病,死亡率几乎为100%。目前没有有效的治疗措施,暴露前后免疫是预防该病的主要途径,因此研发出高效而低成本的疫苗尤为重要。il... 详细信息

狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的侵中枢神经系统(CNS)的一种人兽共患病。一旦感染发病,死亡率几乎为100%。目前没有有效的治疗措施,暴露前后免疫是预防该病的主要途径,因此研发出高效而低成本的疫苗尤为重要。il6(Interleukin 6)是一种高度多功能的细胞因子,不仅在免疫细胞中,而且在其他细胞如中枢神经系统细胞中具有多效性作用。il12(Interleukin 12)通过促进Th1型细胞因子应答,增强NK/LAK细胞裂解活性,增强特异性CTL应答,并诱导IFN-γ产生,而促进细胞介导的免疫反应。为了探索il6和il12同时在狂犬病病毒中过表达对病毒生物学特性的影响,本研究选用重组病毒rHEP-dG,rHEP-dG-Cail12和rHEP-dG-Cail6-12进行研究。接着对重组病毒rHEP-dG-Cail12和rHEP-dG-Cail6-12的生物学特性进行研究。结果显示,两毒株都可以在NA细胞上稳定增殖,且培养滴度都高于亲代病毒rHEP-dG。抽提第11代rHEP-dG-Cail12和第7代rHEP-dG-Cail6-12病毒的RNA,扩增il12和il6基因,未发现突变。病毒的生长曲线显示,当MOI=0.01时,rHEP-dG-Cail12、rHEP-dG-Cail6-12和rHEP-dG保持着相似的生长特性;当MOI=1时,rHEP-dG-Cail6-12在任何时间点的滴度都明显高于rHEP-dG。扩散实验和病毒对细胞的活性实验显示,从48 h开始,rHEP-dG-Cail12和rHEP-dG-Cail6-12的扩散能力强于rHEP-dG;第4 d,rHEP-dG-Cail12和rHEP-dG-Cail6-12病毒组细胞活性低于rHEP-dG。对NA细胞的凋亡实验显示,rHEP-dG-Cail12和rHEP-dG-Cail6-12都抑制细胞凋亡。western blot结果显示两毒株(rHEP-dG-Cail12和rHEP-dG-Cail6-12)M蛋白和G蛋白表达量前期第2d低于rHEP-dG,而后期第3d rHEP-dG-Cail12高于rHEP-dG。荧光定量PCR实验显示,rHEP-dG-Cail12病毒基因组RNA水平高于rHEP-dG。当MOI=0.01时,各结构基因的mRNA水平呈现出动态变化,当MOI=1时,rHEP-dG-Cail12和rHEP-dG-Cail6-12在感染初期0.5d各结构基因的mRNA水平低于rHEP-dG,0.5d后显著高于rHEP-dG。致病性实验显示,狂犬病病毒rHEP-dG、rHEP-dG-Cail12和rHEP-dG-Cail6-12对6-7周龄的成年小鼠都无致病性且对体重的影响无显著性差异。3日龄乳鼠的LD实验中,rHEP-dG-Cail12和rHEP-dG-Cail6-12的致病性均要低于rHEP-dG。免疫原性实验显示,三株重组病毒免疫的小鼠都能产生抗狂犬病的抗体。攻毒保护实验显示,对颅内注射三株病毒21 d后诱导的抗体抵抗狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-24攻击的小鼠保护率为100%,肌肉注射病毒60 d后诱导的抗体抵抗CVS-24攻击的小鼠保护率均为80%。综上所述,重组狂犬病病毒rHEP-dG-Cail12和rHEP-dG-Cail6-12的滴度提高,复制能力、转录水平和蛋白的表达发生不同程度的变化,病毒接种3日龄乳鼠其致病性降低,具有作为新型基因工程疫苗的潜质,本研究为犬的新型狂犬疫苗的研制奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒 il6 il12 生物学特性

KRT17/YAP/il6轴在弥散型胃癌转移中的调控作用

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KRT17/YAP/IL6轴在弥散型胃癌转移中的调控作用

作者：李梦杰浙江大学

学位级别：硕士

2018年的统计结果显示,在全球范围内,胃癌是导致癌症死亡的第三大原因,胃癌的发病率在所有癌症中排名第五。胃癌在组织学上分为肠型和弥散型。肠型胃癌具有腺体的生长方式,具有明显的组织结构。相比之下,弥散型胃癌不具有明显的组织结构... 详细信息

2018年的统计结果显示,在全球范围内,胃癌是导致癌症死亡的第三大原因,胃癌的发病率在所有癌症中排名第五。胃癌在组织学上分为肠型和弥散型。肠型胃癌具有腺体的生长方式,具有明显的组织结构。相比之下,弥散型胃癌不具有明显的组织结构,弥散型胃癌细胞呈弥散型生长,缺乏细胞间的相互连接。弥散型胃癌在早期时更易出现淋巴结转移（7.3%）,高于早期肠型胃癌的淋巴结转移率（1.1%）,另外,肠型胃癌的五年生存率可以达到39.7%,但弥散型胃癌的五年生存率仅有18.3%,因此,相对于肠型胃癌,弥散型胃癌容易转移且预后较差。目前关于弥散型胃癌的发病机理及恶性进展的机制尚不清楚,缺少深入的研究。现代大规模测序研究发现,编码钙粘附蛋白E（E-cadherin）的CDH1基因的突变,是弥散型胃癌的重要特征及潜在的起始因素之一,约33%-50%的散发性弥散型胃癌中存在CDH1的体细胞突变。然而,弥散型胃癌中CDH1异常的调控机制也不清楚。因此,深入探究弥散型胃癌的发生发展机制对于弥散型胃癌的临床诊断及治疗具有重要意义。前期,我们通过对6例胃癌病人的癌与癌旁组织进行m RNA表达谱芯片分析,筛选胃癌相关基因,发现编码角蛋白17（Keratin17,KRT17）的基因KRT17可能参与胃癌的发生发展过程。有意思的是,无论通过TCGA或GSE62254数据库分析其m RNA水平,还是通过组织芯片分析其蛋白水平,相较于肠型胃癌,KRT17在弥散型胃癌中显著低表达。并且仅在弥散型胃癌中,KRT17的低表达与较差的预后显著相关。另外我们发现KRT17的表达与弥散型胃癌的特征分子CDH1的表达具有显著正相关关系。这些结果均提示KRT17的异常低表达可能在弥散型胃癌发生发展中扮演重要角色。我们利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建了KRT17敲除的胃癌细胞系,观测其生物学行为。体外实验发现,KRT17敲除能够显著下调胃癌细胞E-cadherin的表达,改变细胞的形态,促进胃癌细胞的上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）,提高胃癌细胞的干性和迁移侵袭能力。另外,体内数据也显示,KRT17敲除后能够显著促进胃癌细胞的转移能力。提示KRT17敲除通过促进胃癌细胞的EMT进程,从而提高胃癌细胞的干性能力、迁移侵袭能力和转移能力。关于KRT17敲除促进胃癌细胞EMT进程的机制探索,我们发现KRT17敲除后能够显著促进胃癌细胞中的Yes-相关蛋白（Yes-associated protein,YAP）入核,激活YAP通路。进一步研究发现,KRT17敲除能够上调YAP靶基因的表达,其中变化较为显著的基因是白介素6（Interleukin 6,il6）,提示il6可能介导了KRT17敲除细胞中EMT、干性和转移能力的改变。我们进一步在KRT17敲除的细胞系中敲低il6,发现il6的敲低能够逆转KRT17敲除细胞系的EMT进程,并且能够抑制KRT17敲除细胞系中干性和转移能力提升,提示KRT17敲除所导致的表型是通过激活YAP通路诱导il6的表达所介导的。综上所述,我们的研究揭示了胃癌细胞中KRT17的低表达可下调E-cadherin的表达水平,促进胃癌细胞的EMT进程、干性能力和转移能力提升。机制上,KRT17的低表达可能通过激活YAP通路诱导il6的表达,从而调控弥散型胃癌的恶性进展。本研究的结果表明KRT17低表达可能是弥散型胃癌发生发展的因素之一,研究提出的KRT17/YAP/il6轴有助于我们理解弥散型胃癌的发病机理和转移的机制,并可能作为弥散型胃癌诊断和治疗的靶点。

关键词：弥散型胃癌 KRT17 EMT 干性转移 YAP il6