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id基因家族对乳腺癌作用的研究进展

中华普通外科杂志 2007年第2期22卷 159-160页

作者：杨海荡刘连新姜洪池哈尔滨医科大学第一临床医学院普通外科 150001

id（inhibitor of DNA binding and inhibitor of differentiation）基因属于编码HLH（helix—loop—helix）蛋白的基因家族中的一种，含有四个成员——id-1、id-2、id-3和id-4。本文将介绍id基因的概况，并介绍其在乳腺癌中的研究进展。

关键词：基因家族 id-1 乳腺癌 id基因 DNA

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氧化铁纳米颗粒对id基因表达的影响

氧化铁纳米颗粒对Id基因表达的影响

作者：邹晶露东南大学

学位级别：硕士

如今,氧化铁磁性纳米颗粒作为一种很有发展潜力的纳米材料,在生物医学领域有着很大的应用前景,如磁分离和纯化、磁转染、磁共振成像、肿瘤热疗、药物释放和组织修复等。由于大多数应用是通过大量的纳米颗粒递送到靶细胞中发挥作用,所以... 详细信息

如今,氧化铁磁性纳米颗粒作为一种很有发展潜力的纳米材料,在生物医学领域有着很大的应用前景,如磁分离和纯化、磁转染、磁共振成像、肿瘤热疗、药物释放和组织修复等。由于大多数应用是通过大量的纳米颗粒递送到靶细胞中发挥作用,所以在临床应用之前,应明确表征纳米颗粒潜在的细胞毒性。越来越多的研究开始关注纳米颗粒内化到细胞后的情况,它们的降解、生物相容性以及对细胞造成的影响。因此揭示铁纳米颗粒在分子水平上的生物效应很具价值。近年来,我们运用基因表达谱技术研究了DMSA修饰的Fe3O4纳米颗粒(简称FeNP)对细胞基因表达的影响。研究中,我们发现FeNP对id3基因的表达具有显著影响。由于id基因家族在细胞周期、生长、分化中起到重要的调控作用,我们希望针对FeNP对id家族基因表达的影响进行更深入的研究。本研究中,我们采用定量聚合酶链反应(qPC R)检测了不同剂量FeNP对体内外细胞中id基因表达的影响,具体工作如下：1.我们分别采用两种剂量FeNP (50、100μg/mL)对多种细胞系,包括小鼠巨噬细胞(RAW264.7)、小鼠肝癌细胞(Hepa1-6)、人单核细胞(THP-1)、人肝癌细胞(HepG2)、人正常肝脏细胞(HL-7702)和人宫颈癌细胞(HeLa)进行24 h处理。TEM观测及zeta电位检测结果显示FeNP具有良好的分散性及尺寸均一性。普鲁士蓝染色和比色法胞内铁含量定量检测发现,6种细胞系均能摄取这种纳米颗粒,但摄取量在细胞系间存在着差异,其中RAW264.7吞噬能力最高,而HepG2和HL7702细胞吞噬能力则较弱。铁含量定量检测还表明,细胞对FeNP的吞噬具有剂量依赖性。CCK-8细胞活力检测结果表明,本研究中所用剂量的FeNP与各种细胞系孵育24 h,对各种细胞系的细胞活力基本没有影响。表达谱芯片数据结果表明,经不同剂量FeNP处理后,id1、id2、id3在五种细胞系中(RAW264.7、Hepal-6、THP-1、HepG2和HL7702)表达基本都显著下调,id4则差异表达不明显。qPCR结果显示id3基因在所有细胞系中表达都显著下调(pid1基因在除了RAW264.7细胞以外所有细胞系中表达都显著下调,并且id2基因在Hepal-6、HepG2、HL7702和HeLa细胞中表达也基本都显著下调。结合芯片检测和qPCR检测的结果,id1、id2和id3基因在3个肝细胞系(Hepal-6、HepG2和HL7702)中表达都显著下调。2.我们将一种新型近红外荧光染料IRDye800CW标记在FeNP上,进一步观测了它在小鼠体内的分布及代谢清除过程,通过实时监测,找到了对处理活体后肝脏组织采样的最佳时间点,并采集了处理24 h后的肝脏。通过对各组织切片染色发现该纳米颗粒进入小鼠体内后主要分布在肝脏和脾脏中。小鼠尾静脉注射两个剂量(2和5 mg Fe/kg体重)的纳米颗粒后,我们又检测了所采集的肝组织中id基因的表达。结果显示,经过不同浓度FeNP处理后,id1、id2和id3基因在肝组织中表达都显著下调。另一个id基因,id4在经FeNP处理后的肝组织中表达也有显著的差异。以上这些结果表明,FeNP在体外、体内对id家族基因的表达都有着显著的影响。因id家族基因是一种重要的转录因子,纳米颗粒可能通过影响该转录因子家族的表达,进而对该转录因子调控的生物过程,如细胞生长、分化、凋亡及肿瘤发生等产生广泛的影响。本论文研究结果对这种纳米颗粒引起的id基因表达相关的细胞效应及id基因和铁的调节之间的密切关系提供新的见解。

关键词： FeNP id基因表达体内体外

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id基因在多种肺癌细胞中的表达及意义

现代生物医学进展 2006年第2期6卷 36-38,F0003页

作者：李晓莉赵艳滨孙立春李乐静哈尔滨医科大学附属肿瘤医院内科黑龙江哈尔滨150040

目的:研究id基因在肺癌和永生化支气管上皮细胞中的表达,探讨其在肺癌细胞中表达的意义。方法:利用半定量RT-PCR和Western blot方法检测多种肺癌和永生化支气管上皮细胞中id1-id4mRNA和id1-id4蛋白的表达。结果:A549、NCI-H460、NCI-H44... 详细信息

目的:研究id基因在肺癌和永生化支气管上皮细胞中的表达,探讨其在肺癌细胞中表达的意义。方法:利用半定量RT-PCR和Western blot方法检测多种肺癌和永生化支气管上皮细胞中id1-id4mRNA和id1-id4蛋白的表达。结果:A549、NCI-H460、NCI-H446、SK-MES-1、Anip973中id1-id3mRNA均高表达,id1相对表达较强;而AGZY和MP-184中未表达id1-id3mRNA;腺癌细胞均表达了id4mRNA,而NCI-H446、SK-MES-1未表达id4mRNA。A549,NCI-H460,NCI-H446,SK-MES-1,Anip 973中id1,id2,id3蛋白均高表达,A549,NCI-H446,Anip 973中id2的表达高于NCI-H460,SK-MES-1;A549,NCI-H460,Anip 973有id4的高表达,NCI-H446,SK-MES-1无id4的表达,id1-id4在AGZY和MP-184中均未表达。结论:4种id基因均作为癌基因在肺癌的发生发展中发挥作用,id1,id2,id3与肺癌细胞的恶性程度以及增殖和转移密切相关,id4可做为肺腺癌的检测标志物。

关键词：肺癌 id基因癌基因

反义id基因转染HT29细胞后TGF─α、βmRNA表达的研究

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解剖学报 1996年第4期27卷 345-348,T001页

作者：王永潮朱兆文陈德高曾灵芳李通北京师范大学细胞增殖及调控生物学开放实验室北京医科大学第一临床医院外科

为了探讨Ｉｄ基因的反义核酸对ＨＴ２９细胞生长和增殖的作用。本研究用反义Ｉｄ基因转染人结肠癌细胞株ＨＴ２９细胞后，发现ＨＴ２９细胞的生长受到抑制，３Ｈ－ＴｄＲ掺入率及软琼脂集落形成能力明显降低，ＴＧＦ－αｍＲＮＡ表达降... 详细信息

为了探讨Ｉｄ基因的反义核酸对ＨＴ２９细胞生长和增殖的作用。本研究用反义Ｉｄ基因转染人结肠癌细胞株ＨＴ２９细胞后，发现ＨＴ２９细胞的生长受到抑制，３Ｈ－ＴｄＲ掺入率及软琼脂集落形成能力明显降低，ＴＧＦ－αｍＲＮＡ表达降低，而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ升高。上述结果初步表明，Ｉｄ基因的反义核酸可抑制ＨＴ２９细胞的生长和增殖，为结直肠癌的基因治疗提供了一种新的可能的途径，ＴＧＦ－α。

关键词： id基因转染转化生长因子 α β mRNA 表达

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Mahoganoid基因的研究进展

国外医学（计划生育分册） 2005年第6期24卷 277-280页

作者：朱元熊承良沈士亮华中科技大学同济医学院计划生育研究所 430030 美国斯坦福大学医学遗传学教研室 94305

近年来,常染色体隐性基因Mahoganoid已成为科学家的研究热点之一。该基因编码蛋白Md具有特征的C3HC4RING结构域,基于这一结构,认为该蛋白可能是作为一种E3泛肽连接酶起作用。Mahoganoid基因在生物体内广泛分布,并具有多个等位基因,在色... 详细信息

近年来,常染色体隐性基因Mahoganoid已成为科学家的研究热点之一。该基因编码蛋白Md具有特征的C3HC4RING结构域,基于这一结构,认为该蛋白可能是作为一种E3泛肽连接酶起作用。Mahoganoid基因在生物体内广泛分布,并具有多个等位基因,在色素形成,体质量控制,神经系统退行性变及生殖系统方面都发挥重要的生理和病理作用。介绍Mahoganoid基因特点、基因表达、基因功能及分子作用机理。为以后的课题研究提供方向。

关键词： Mahoganoid(Md)基因功能基因突变发生机制 id基因基因编码蛋白分子作用机理隐性基因常染色体生物体内

乳腺浸润性导管癌超声表现与病理及id2、id3mRNA表达关系的研究

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中国医学影像技术 2009年第2期25卷 202-206页

作者：郑敏穆丹梅戴险峰郑淼魏晓冬刘磊杨木蕾哈尔滨医科大学第一临床医院超声科黑龙江哈尔滨150001 大庆油田总医院B超室黑龙江大庆163001 大庆油田总医院磁共振室黑龙江大庆163001

目的对照分析乳腺浸润性导管癌超声表现与病理改变的关系;尝试探讨id2mRNA及id3mRNA表达与idC超声表现之间的关系。方法应用实时荧光定量RT-PCR检测36例idC样本中id2mRNA及id3mRNA的表达.并与idC超声表现对照分析。结果id2mRNA在正常组... 详细信息

目的对照分析乳腺浸润性导管癌超声表现与病理改变的关系;尝试探讨id2mRNA及id3mRNA表达与idC超声表现之间的关系。方法应用实时荧光定量RT-PCR检测36例idC样本中id2mRNA及id3mRNA的表达.并与idC超声表现对照分析。结果id2mRNA在正常组织中表达高于癌组织(Pid3mRNA的表达相反(分别为Pid2mRNA的表达与idC超声征象之间无显著性意义(P均>0.05)。毛刺征及周边导管扩张组id3mRNA均呈高表达(P均idC声像图表现与病理组织学变化密切相关。idC的二维超声征象可在一定程度上反应id3mRNA的表达水平。

关键词：乳腺肿瘤超声检查病理组织学 id基因逆转录聚合酶链反应

id-1 mRNA在乳腺癌中的表达及与高频彩色多普勒超声表现和病理对照

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中国介入影像与治疗学 2010年第3期7卷 264-267页

作者：郑敏高岩王静闫军朱芳芳哈尔滨医科大学附属第一医院超声科黑龙江哈尔滨150001

目的研究id-1 mRNA在乳腺癌中的表达,探讨其与彩色多普勒高频超声表现及病理的关系。方法应用实时荧光定量RT-PCR检测80例乳腺癌样本中id-1 mRNA的表达,并与乳腺癌的高频彩色多普勒超声表现进行对照分析。结果id-1 mRNA在正常组织中表... 详细信息

目的研究id-1 mRNA在乳腺癌中的表达,探讨其与彩色多普勒高频超声表现及病理的关系。方法应用实时荧光定量RT-PCR检测80例乳腺癌样本中id-1 mRNA的表达,并与乳腺癌的高频彩色多普勒超声表现进行对照分析。结果id-1 mRNA在正常组织中表达低于癌组织(Pid-1 mRNA均呈高表达(Pid-1mRNA的表达高于0～Ⅰ级(Pid-1 mRNA的表达。

关键词：乳腺肿瘤超声检查,多普勒,彩色病理学 id基因反转录聚合酶链反应

分化抑制因子id在若干种癌及永生性细胞中的表达

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中国生物工程杂志 2004年第3期24卷 59-62,72页

作者：刘欣曾少举何大澄彭安王永潮首都医科大学基础医学院细胞遗传教研室北京100054 北京师范大学教育部细胞增殖及调控生物学重点实验室北京100875

利用半定量RT PCR方法对 1 7种细胞的id基因表达进行了检测 ,发现在CD34+阳性干细胞增殖过程中 ,id1由不表达到适度表达 ,而id2由中等程度表达到高表达。id3、id4的表达在扩增前后变化不大。说明id1和id2在脐带造血细胞扩增过程中可能... 详细信息

利用半定量RT PCR方法对 1 7种细胞的id基因表达进行了检测 ,发现在CD34+阳性干细胞增殖过程中 ,id1由不表达到适度表达 ,而id2由中等程度表达到高表达。id3、id4的表达在扩增前后变化不大。说明id1和id2在脐带造血细胞扩增过程中可能参与作用。在 2种肺癌、2种肠癌及一种肝癌、乳腺癌细胞中id1～id4的表达呈现一定的规律 ,对于同一类癌细胞株其表达基本相同或相似 ,而不同类癌细胞株其表达则相差较大 ,说明对某一类细胞株 ,id1～id4有相对稳定的作用。实验对深入认识id基因的作用。

关键词： id基因分化抑制因子癌细胞 RT-PCR 表达永生性细胞

id1/id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞生物学的作用

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Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞生物学的作用

作者：孙丽丽南方医科大学

学位级别：硕士

[研究背景] 分化抑制因子(inhibitor of DNA differentiation, id) id蛋白可与碱性螺旋-环-螺旋(Basic helix-loop-helix)转录因子作用,形成非活性异二聚体,阻止bHLH与靶基因DNA上的E启动子结合,间接地抑制分化相关基因的表达,影响肿瘤... 详细信息

[研究背景] 分化抑制因子(inhibitor of DNA differentiation, id) id蛋白可与碱性螺旋-环-螺旋(Basic helix-loop-helix)转录因子作用,形成非活性异二聚体,阻止bHLH与靶基因DNA上的E启动子结合,间接地抑制分化相关基因的表达,影响肿瘤细胞的生长、血管形成、侵袭及转移能力,其中id1/id3具有许多重叠效益,在促进肿瘤细胞增殖和侵袭转移方面具有协同作用,被认为是与肿瘤侵袭性相关的上游调控基因。近年来,基因治疗、靶向治疗作为肿瘤治疗的新生代模式日益受到重视。但目前对于子宫内膜癌的治疗还没有发现特有效的特异性标志物,对于生长转移的分子机理也缺乏一定的了解。关于id1/id3基因与子宫内膜癌发生、发展及侵袭转移的关系还没有相关研究。我们希望借此研究子宫内膜癌生物学行为的发生、发展及浸润转移机制,寻找一种新的治疗策略。 [研究目的] 检测id1/id3在子宫内膜癌组织中的表达情况。利用RNA干扰技术构建id1/id3双敲低腺病毒并感染人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B和RL-952,通过观察idl/id3双敲低后,对MMP2, CXCR4和P21在基因水平和蛋白水平的影响,推测idl/id3与P21、MMP2和CXCR4的关系,以及是否参与它们介导的细胞存活、细胞增殖或趋化相关信号转导通路,研究子宫内膜癌细胞的浸润、增生及转移的机制。重点探讨双敲低idl/id3基因对子宫内膜癌细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力及粘附能力的影响,阐明idl/id3基因在子宫内膜癌生长转移中的生物学作用,检验干扰idl/id3是否可以有效治疗子宫内膜癌,为临床诊断和治疗提供理论依据。 [研究方法] 1. Western blot检测id1、id3在子宫内膜癌组织内表达：将随机挑选的南方医科大学南方医院妇产科2011年6月-2011年10月住院手术的4例子宫内膜癌患者新鲜组织及相应的癌旁组织提取全蛋白,根据BCA蛋白定量试剂盒进行定量,测定其在562nm处的吸收值(A562)。计算各浓度蛋白标准的平均吸光度,绘制标准曲线,计算回归方程。提取的总蛋白,加入2xSDS蛋白上样缓冲液(按1：1比例),100℃煮沸5min,-20℃保存备用。Western blot方法检测后观察凝胶图像,应用Adobe Photoshop图像软件扫描Western blot凝胶图片,得到相应灰度值,观察4例子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的idl/id3的表达。 2. qRT-PCR检测不同腺病毒载体感染子宫内膜癌HEC-1-B和RL-952细胞株后id1、id3、MNP2、CXCR4. P21mRNA水平：实验将两株细胞各分为未处理细胞组(简写control)、空白病毒组(vector)、启动子病毒组(promoter)、id1/id3双敲低组(RNAi)。对四组细胞进行提取RNA、去基因组、纯度检测和电泳检测、逆转录及定量PCR操作。采用△△CT法对荧光定量PCR结果进行定量分析,计算idl/id3双敲低后MMP2、CXCR4、P21的表达抑制率。 3. Western blot检测不同腺病毒载体感染子宫内膜癌HEC-1-B和RL-952细胞株后idl、id3、MMP2、CXCR4、P21蛋白表达量：对每株细胞的各四组细胞提取全蛋白,具体步骤同前。4.噻唑蓝(MTT)比色实验检测不同重组腺病毒载体感染子宫内膜癌细胞株RL-952和HEC-1-B后对细胞增殖能力的影响：对RL-952及HEC-1-B细胞株各四组细胞加入MTT后,以空白对照孔调零,酶联免疫监测仪上490nm测定各孔光吸收值(D值)。各组取三孔平均值,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。实验重复3次。 5.移行小室(Transwell)侵袭实验检测不同重组腺病毒载体感染子宫内膜癌细胞株RL-952和HEC-1-B后对细胞侵袭能力的影响,一般随机选取6个高倍视野计数穿过膜的细胞数。 6.细胞划痕实验检测不同重组腺病毒载体感染子宫内膜癌细胞株RL-952和HEC-1-B后对细胞迁移能力的影响：按0h,6h,12h,24h,48h取样,以未处理的细胞为对照,拍照后使用phoshop的标尺测量致伤区域的像素。7.细胞粘附实验检测不同重组腺病毒载体感染子宫内膜癌细胞株RL-952和HEC-1-B后对细胞粘附能力的影响：细胞拍照后经过MTS法处理,每小组做6个复孔。 8.统计学处理采用SPSS14.0统计软件包进行分析。数据以均数±标准差表示,4例子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中id1/id3表达的比较采用两独立样本t检验,其余实验组间比较采用ANOVA单因素方差分析,两两比较采用Tamhane’s T2检验;检验水准a=0.05。以P<0.05

关键词： id基因子宫内膜癌 RNA干扰腺病毒增殖侵袭迁移粘附