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安徽医科大学学报 2019年第9期54卷 1333-1338页

作者：鲁梅芳黄浩刘小艳陈刘赠刘新华李洪安徽医科大学基础医学院组胚教研室合肥230032 安徽医科大学药学院合肥230032

目的探究肌腱蛋白C (TNC)对胃癌细胞SGC7901的锚定非依赖性生长的影响。方法采用免疫组化和Western blot分别检测胃癌组织和胃癌细胞系中TNC的表达;通过CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除SGC7901细胞中的TNC基因并用软琼脂生长实验观察SGC790... 详细信息

目的探究肌腱蛋白C (TNC)对胃癌细胞SGC7901的锚定非依赖性生长的影响。方法采用免疫组化和Western blot分别检测胃癌组织和胃癌细胞系中TNC的表达;通过CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除SGC7901细胞中的TNC基因并用软琼脂生长实验观察SGC7901和SGC7901^TNC-/-细胞的锚定非依赖性生长的情况;Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)用于分析细胞内促生长信号传导通路蛋白的表达情况。结果 TNC在检测的胃癌组织和细胞水平高表达;在SGC7901细胞中敲除TNC引起软琼脂实验中集落形成缺陷;对几种细胞内生长促进信号传导途径的分析表明,在SGC7901细胞中TNC基因敲除后,c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平降低;在SGC7901^TNC-/-细胞中,发现整合素β7(itgb7)在mRNA和蛋白质水平均显著下降。结论 TNC在胃癌中特别是SGC7901细胞中高表达,并且可能通过itgb7介导的信号通路调节SGC7901细胞的锚定非依赖性生长。

关键词：肌腱蛋白C itgb7 锚定非依赖性生长

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Tenascin-C对胃癌SGC7901细胞锚定非依赖性生长的影响

Tenascin-C对胃癌SGC7901细胞锚定非依赖性生长的影响

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作者：刘小艳安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:胃癌（gastric cancer GC）,是一种常见的消化系统肿瘤,其早期诊出率低,晚期预后不良,因此寻找可能的早期诊断和靶向治疗的标记物越来越重要。Tenascin C（TNC）是一种位于细胞外的糖蛋白,其产生于细胞增殖,迁移及器官形成等过程,... 详细信息

背景:胃癌（gastric cancer GC）,是一种常见的消化系统肿瘤,其早期诊出率低,晚期预后不良,因此寻找可能的早期诊断和靶向治疗的标记物越来越重要。Tenascin C（TNC）是一种位于细胞外的糖蛋白,其产生于细胞增殖,迁移及器官形成等过程,已经被作为不同癌症的潜在生物标志物而被广泛研究。然而迄今为止,TNC在GC及体外培养的胃癌细胞中扮演的角色及功能尚不清楚,本次实验将以此为目的进行初步的研究。目前已知TNC可以与表皮生长因子受体和整联蛋白相互作用调节许多细胞内信号分子如局部粘着斑激酶（Focal Adhesion Kinase,FAK）,细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）,丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）,蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）的活性,从而在细胞活动中发挥多种作用。本实验发现TNC在GC组织和胃癌细胞系中均有高表达,且TNC对胃癌SGC7901细胞的锚定独立性生长有重要的影响,itgb7可能也参与这一过程。目的:本实验主要研究内容1.检测TNC在胃癌组织样本及胃癌细胞系中的表达。2.敲除TNC对胃癌SGC7901细胞生长的影响。3.寻找可能涉及这一影响的生长通路。方法:1.运用免疫组织化学染色法检测胃癌病理组织样本及癌周正常组织样本中TNC的表达,蛋白质免疫印迹实验检测TNC在正常胃粘膜上皮细胞系及不同胃癌细胞系中的表达情况。2.在胃癌SGC7901细胞中敲除TNC基因,观察并分析软琼脂集落形成实验中集落的形成状况。3.敲除TNC后通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹实验检测整合素亚单位在胃癌SGC7901细胞内的表达情况。4.通过TNC补救实验观察已敲除TNC的胃癌SGC7901细胞的锚定生长情况。5.运用免疫共沉淀实验和GST-pull down实验探究整合素和TNC间是否有相互作用。结果:本实验显示TNC在胃癌组织中高表达,在SGC7901细胞中也有较高的表达量。通过多次重复试验发现敲除TNC后胃癌SGC7901细胞锚定独立性生长能力消失,同时TNC敲除后细胞增殖传导路径上常见的蛋白AKT,JNK磷酸化程度也发生了变化。另外,在TNC缺乏的胃癌细胞中整合素itgb7表达量发生明显下降,而表皮生长因子受体家族的表达量并无检测水平上的变化。蛋白相互作用实验结果显示itgb7和TNC之间有直接的相互作用。TNC敲除后的补救实验再次证实了其对胃癌SGC7901细胞锚定独立性生长的重要影响。本实验表明TNC可以介导胃癌细胞的锚定独立性生长,且在其中发挥不可或缺的作用。而itgb7在TNC丧失后的表达数量变化提示其可能在这一过程中发挥相关作用,具体机制仍需要进一步的研究。结论:TNC在胃癌组织和胃癌细胞系中高表达。在胃癌SGC7901细胞中TNC可以介导其锚定独立性生长,而itgb7与TNC间有相互作用,故其可能也参与了这一过程。TNC在胃癌组织中的高表达以及其对SGC7901细胞锚定非依赖性生长的作用,可以为寻找新的胃癌诊断和靶向治疗标记物提供新的可能性。

关键词： TNC EGFR Her2 Her3 Her4 itgb7 anchorage-independent growth

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