检索结果-南通市图书馆

作者：周健华南农业大学

学位级别：硕士

猪骨骼肌生长发育的机制一直备受关注,骨骼肌作为猪体重占比最高的组织,其生长发育直接影响了猪的生产性能。骨骼肌的生长发育是一个相对复杂的生物学过程,其中包括肌细胞的形成与增殖、肌管和肌纤维的形成以及终末成熟阶段。随着生命... 详细信息

猪骨骼肌生长发育的机制一直备受关注,骨骼肌作为猪体重占比最高的组织,其生长发育直接影响了猪的生产性能。骨骼肌的生长发育是一个相对复杂的生物学过程,其中包括肌细胞的形成与增殖、肌管和肌纤维的形成以及终末成熟阶段。随着生命科学的发展,学术界对骨骼肌发育调控机制以及其中相关基因的调控作用有了深入的认识,但在猪骨骼肌生长发育调控机制研究中,仍然有许多与其发育过程相关的基因尚未被发掘。有研究报道,itgb6基因在猪骨骼肌发育过程中差异性表达,并且在表观遗传的修饰作用下调节着骨骼肌的发育。因此,为了深入研究itgb6基因对猪骨骼肌发育的调控作用,我们首先从一日龄仔猪中分离出了猪骨骼肌卫星细胞作为研究猪骨骼肌发育机制的模型;随后构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-itgb6,以及合成了itgb6基因的干涉片段,转染猪骨骼肌卫星细胞,通过CCK-8法、EdU染色、Western Blot和流式细胞术等技术研究了itgb6基因对猪骨骼肌卫星细胞增殖的调控作用。主要研究结果如下:(1)利用组织块消化法从一日龄仔猪的肌肉组织中分离出了原代猪骨骼肌卫星细胞并用差速贴壁法进行纯化。结果表明,分离出的猪骨骼肌卫星细胞增殖速度快,呈现出较强的肌源性特征,并且分化后显微镜下可观察到大量的肌管形成。(2)运用流式细胞术鉴定猪骨骼肌卫星细胞的纯度。结果显示,纯化后的猪骨骼肌卫星细胞中PAX7呈阳性的细胞到达98.5%,说明卫星细胞纯度较高,可用于后续实验。(3)对猪骨骼肌卫星细胞转染pcDNA3.1-EGFP鉴定其转染效率。转染后的GFP阳性细胞统计结果表明,猪骨骼肌卫星细胞的转染效率为41.2%。(4)使用CCK-8法和EdU染色法分析上调/下调itgb6基因的表达对猪骨骼肌卫星细胞增殖的影响。结果发现,上调itgb6基因的表达抑制了猪骨骼肌卫星细胞的增殖活性,下调itgb6基因的表达促进了猪骨骼肌卫星细胞的增殖活性。(5)使用Western Blot技术在蛋白水平分析上调/下调itgb6基因的表达对猪骨骼肌卫星细胞中细胞增殖标记蛋白Ki67表达量的影响。结果表明,上调itgb6基因的表达抑制了猪骨骼肌卫星细胞中Ki67的表达,下调itgb6基因的表达促进了猪骨骼肌卫星细胞中Ki67的表达。(6)使用流式细胞术分析上调/下调itgb6基因的表达对猪骨骼肌卫星细胞周期的影响。结果表明,上调itgb6基因的表达会降低猪骨骼肌卫星细胞中S期细胞的比率,下调itgb6基因的表达会提高猪骨骼肌卫星细胞中S期细胞的比率。综上所述,itgb6基因通过抑制细胞合成从而抑制骨骼肌细胞增殖,最终抑制骨骼肌的发育。

关键词：猪骨骼肌卫星细胞 itgb6 增殖细胞周期

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利用CRISPR/Cas9系统敲除itgb6基因对人结肠癌HT-29细胞生物学行为的影响

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实用医学杂志 2023年第5期39卷 585-590页

作者：薛栋孙祺邬君义佘军军李凡妮西安交通大学第一附属医院普通外科西安710061 西安交通大学第一附属医院人才高地科研平台西安710061

目的探讨整合素β6(itgb6)基因敲除后对人结肠癌HT-29细胞生物学行为的影响。方法通过CRISPR/Cas9技术构建itgb6敲除的HT-29细胞(itgb6-KO)作为敲除组,选择空白转染细胞作为对照组。通过Western blot法检测itgb6表达,通过MTT实验、平... 详细信息

目的探讨整合素β6(itgb6)基因敲除后对人结肠癌HT-29细胞生物学行为的影响。方法通过CRISPR/Cas9技术构建itgb6敲除的HT-29细胞(itgb6-KO)作为敲除组,选择空白转染细胞作为对照组。通过Western blot法检测itgb6表达,通过MTT实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验检测敲除itgb6基因对HT-29细胞的增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力的影响。结果 Western blot和DNA测序结果显示CRISPR/Cas9技术有效敲除itgb6基因。MTT实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验显示敲除itgb6基因能够抑制HT-29细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力(P itgb6基因的结肠癌HT-29细胞系,itgb6敲除后HT-29细胞恶性生物学行为受到抑制,itgb6基因有望成为结肠癌治疗的潜在靶点。

关键词：结肠癌 itgb6 CRISPR/Cas9 克隆增殖侵袭

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基于生物信息学胰腺癌关键基因的筛选和itgb6在胰腺癌中的表达及机制

基于生物信息学胰腺癌关键基因的筛选和ITGB6在胰腺癌中的表达及...

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作者：任天宇江苏大学

学位级别：硕士

目的:从公共数据库下载分析数据,运用生物信息学的方法,筛选与胰腺癌发生和预后相关的关键基因,初步探寻相关基因在胰腺癌中的作用机制;挑选预后相关的itgb6基因,分析其与胰腺癌临床病理特征的关系,研究itgb6在胰腺癌中的作用机制,研究I... 详细信息

目的:从公共数据库下载分析数据,运用生物信息学的方法,筛选与胰腺癌发生和预后相关的关键基因,初步探寻相关基因在胰腺癌中的作用机制;挑选预后相关的itgb6基因,分析其与胰腺癌临床病理特征的关系,研究itgb6在胰腺癌中的作用机制,研究itgb6下调表达对胰腺癌AsPC-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:在GEO数据库中查找数据集,采用在线工具GEO2R分析得到差异基因;然后使用DAVID数据库进行GO富集分析差异基因的主要分子功能和生物学行为,运用KEGG信号途径富集分析差异基因作用的信号通路;运用String和Cytoscape构建PPI网络得到关键基因,在GEPIA数据库提取其中影响胰腺癌预后的基因,同时使用DGIdb探索药物基因相互作用,初步预测胰腺癌潜在的靶向治疗药物。结合Oncomine和GEPIA分析itgb6基因在各种肿瘤中的表达情况;从TCGA下载胰腺癌临床信息的数据,研究itgb6对胰腺癌临床病理特征的影响;再构建itgb6相关基因的PPI网络,运用metascape分析itgb6的分子机制;在TIMER数据库中探索itgb6表达与免疫浸润细胞之间的相关性;最后,用RT-PCR法筛选itgb6高表达的胰腺癌细胞系,用慢病毒感染并下调AsPC-1细胞系中itgb6的表达,运用RT-PCR验证下调效率;MTT法分析下调itgb6对AsPC-1细胞增殖的影响;Annexin V-APC单染法检测下调itgb6对AsPC-1细胞凋亡的影响;PI-FACS细胞周期检测法检测下调itgb6对AsPC-1细胞周期的影响。结果:在GSE15471,GSE28735,GSE16515共三个数据集中筛选出72个差异基因,包括52个上调基因和20个下调基因。富集分析发现差异基因主要作用于胚层细胞分化,细胞粘附,ECM-受体相互作用,PI3K-Akt信号通路等途径。确定了十个关键节点基因,FN1,EGF,ALB,COL1A1,ITGA2,KRT19,COL11A1,THBS2,itgb6和MMP12。通过生存分析,发现了两个对胰腺癌预后有影响的基因,即ITGA2和itgb6。还鉴定出8种治疗胰腺癌患者的潜在药物。在Oncomine和GEPIA中验证发现,itgb6在胰腺癌中均为高表达,以itgb6为核心的蛋白网络富集分析发现,itgb6在整合素介导的细胞粘附、胶原结合、异型细胞间粘附、调节转化生长因子-β分泌等过程发挥作用。分析胰腺癌患者临床病理资料显示,itgb6的高表达与胰腺癌患者的N分期、肿瘤G分级显著相关。免疫资源评估发现itgb6表达与CD8﹢T细胞,中性粒细胞,树突状细胞有显著相关性。细胞功能学实验表明下调itgb6基因可抑制胰腺癌AsPC-1细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G2/M期。结论:通过生物信息方法共确定了十个关键基因,差异基因涉及的信号通路可以帮助我们加深对胰腺癌发病机制的了解。ITGA2和itgb6与胰腺癌的预后密切相关,这为靶向治疗提供理论依据。itgb6基因在胰腺癌中表达水平增高,可通过影响细胞周期促进胰腺癌的增殖侵袭,其是胰腺癌潜在的重要生物标志物。

关键词：胰腺癌生物信息学关键基因预后 itgb6

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休眠肺腺癌细胞来源的外泌体激活癌相关成纤维细胞的机制研究

休眠肺腺癌细胞来源的外泌体激活癌相关成纤维细胞的机制研究

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作者：冯祥中南大学

学位级别：硕士

目的:探究休眠肺腺癌细胞来源的外泌体激活癌相关成纤维细胞重构细胞外基质的作用机制,为破解肿瘤休眠机制提供新的思路。方法:(1)顺铂大剂量冲击诱导A549细胞构建休眠肺腺癌细胞模型。(2)沉淀法提取A549细胞和休眠A549细胞来源的外泌体... 详细信息

目的:探究休眠肺腺癌细胞来源的外泌体激活癌相关成纤维细胞重构细胞外基质的作用机制,为破解肿瘤休眠机制提供新的思路。方法:(1)顺铂大剂量冲击诱导A549细胞构建休眠肺腺癌细胞模型。(2)沉淀法提取A549细胞和休眠A549细胞来源的外泌体。(3)皮下接种A549-luciferase细胞构建荷瘤裸鼠模型,给予外泌体瘤内注射,通过小鼠活体成像系统评估各组裸鼠模型的肿瘤转移情况。(4)Western blot检测癌相关成纤维细胞标志物,Q-PCR检测基质相关基因的表达,Transwell实验和体外基质模型评估孵育外泌体后成纤维细胞的侵袭能力和胶原收缩能力。(5)利用RNA测序,筛选关键分子,建立过表达或敲低关键分子的成纤维细胞,通过Transwell实验和体外基质模型,验证关键分子对癌相关成纤维细胞活化的影响。(6)利用外泌体蛋白质组学,筛选并验证休眠A549细胞来源的外泌体关键蛋白参与激活癌相关成纤维细胞。(7)利用GEPIA数据库进行生存分析。结果:(1)A549细胞和休眠A549细胞来源的外泌体促进肺癌转移。(2)孵育休眠A549细胞来源的外泌体后,成纤维细胞α-SMA表达上调,TGFB1、COL1A1和COL3A1表达上调,COL4A1表达下调,胶原收缩能力增强,侵袭能力增强。(3)敲低KLF10抑制成纤维细胞的侵袭能力和胶原收缩能力,过表达KLF10后成纤维细胞的相关能力回复。(4)KLF10通过磷酸化Smad2正反馈激活TGF-β信号通路,诱导癌相关成纤维细胞活化。(5)休眠A549细胞外泌体来源的itgb6激活TGF-β信号通路和KLF10正反馈回路。过表达itgb6后成纤维细胞的侵袭能力增强。(6)itgb6高表达的非小细胞肺癌患者具有更差的无病生存期。结论:(1)肺腺癌细胞和休眠肺腺癌细胞来源的外泌体均能促进肺癌的转移。(2)休眠肺腺癌细胞外泌体来源的itgb6通过激活TGF-β通路和KLF10正反馈回路,诱导癌相关成纤维细胞活化。(3)itgb6可能作为预测非小细胞肺癌患者术后复发与转移的标志物。图24幅,表7个,参考文献64篇

关键词：肺癌休眠癌相关成纤维细胞外泌体细胞外基质重构 TGF-β通路 itgb6

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