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沙格列汀通过miR-15a-5p/insr轴缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制研究

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安徽医科大学学报 2021年第7期56卷 1082-1088页

作者：吴美芬潘海燕黄兴丽刘裕晓武革广东医科大学附属医院内分泌科湛江524000

目的探讨沙格列汀通过miR-15a-5p/胰岛素受体(insr)轴缓解2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制。方法以insr为常用转录本ENST00000341500为输入,分别获取TargetScan、miRDB和miRWalk数据库中可能靶向insr的miRNA并取交集。随后荧光素酶实验... 详细信息

目的探讨沙格列汀通过miR-15a-5p/胰岛素受体(insr)轴缓解2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制。方法以insr为常用转录本ENST00000341500为输入,分别获取TargetScan、miRDB和miRWalk数据库中可能靶向insr的miRNA并取交集。随后荧光素酶实验验证靶向关系。构建胰岛素抵抗2型糖尿病(IR-T2DM)模型。随后对IR-T2DM大鼠进行阴性对照、miR-15a-5p mimic、miR-15a-5p inhibitor转染或沙格列汀处理,8周后处死大鼠获取股四头肌及外周血。对各组大鼠血压、血糖、脂代谢相关指标进行测定,同时测定稳态模型评估(HOMA)胰岛素抵抗指数(IRI)和胰岛素敏感指数(ISI)。定量-PCR检测各组大鼠骨骼肌中交集miRNA、insr、IRS-1和GLUT4 mRNA的表达。Western blot检测各组大鼠骨骼肌中insr、p-IRS-1和GLUT4蛋白表达。结果miR-15a-5p被选定为insr的靶向miRNA。与阴性对照组相比,IR-T2DM大鼠经miR-15a-5p inhibitor或沙格列汀处理后骨骼肌中insr、IRS-1和GLUT4表达、外周血中HDL-C浓度、BW、ISI升高(均Pinsr表达从而缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗。

关键词：沙格列汀 miR-15a-5p insr 2型糖尿病胰岛素抵抗

山羊insr基因可变剪接体在背最长肌中的表达模式

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畜牧兽医学报 2020年第8期51卷 1823-1832页

作者：张潇李利张红平四川农业大学动物科技学院成都611130

旨在对山羊胰岛素受体(insulin receptor,insr)基因进行可变剪接分析,研究其在背最长肌中的表达模式。本试验以简州大耳羊妊娠期胎儿(妊娠期第45、60和105天)及出生后第3天羔羊背最长肌为试验材料,基于转录组测序数据(accession number:... 详细信息

旨在对山羊胰岛素受体(insulin receptor,insr)基因进行可变剪接分析,研究其在背最长肌中的表达模式。本试验以简州大耳羊妊娠期胎儿(妊娠期第45、60和105天)及出生后第3天羔羊背最长肌为试验材料,基于转录组测序数据(accession number:SRR3567144)并利用Sanger测序验证,分析insr基因的可变剪接体类型及其在背最长肌中的表达差异,同时利用在线软件对不同可变剪接体进行生物信息学分析。结果显示,在山羊背最长肌中insr基因CDS区存在4种不同的可变剪接形式(insr1、insr2、insr3和insr4),其CDS长分别为4110、4146、4113和4149 bp,对应的氨基酸残基数分别为1369、1381、1370和1382个。山羊insr 4个可变剪接体之间的主要区别在于Exon 11(36 bp)跳跃和Exon 15部分(3 bp)缺失,这两种可变剪接模式在牛、猪、山羊、人、绵羊和小鼠间完全一致。这些可变剪接改变了山羊insr的Ser磷酸化位点和第二个FN3功能域,使所编码蛋白3D结构在两个区域发生明显改变。同时,各可变剪接体表达量在背最长肌发育的4个时期均无显著性差异(P>0.05),同一时期各可变剪接体表达量之间也无显著性差异(P>0.05)。insr基因序列和剪接模式在哺乳动物中高度保守,该研究结果将为深入揭示insr基因对动物肌肉发育的调控机制提供理论参考。

关键词：山羊 insr 可变剪接体表达模式

SOCS-3基因沉默对肥胖大鼠下丘脑insr mRNA表达的影响

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SOCS-3基因沉默对肥胖大鼠下丘脑InsR mRNA表达的影响

作者：李丹大连医科大学

学位级别：硕士

背景:儿童单纯性肥胖已呈逐年增加的趋势。肥胖症是心血管疾病、高血压、2型糖尿病、慢性炎症和胆石症等疾病的重要危险因素,严重威胁人类健康。研究发现肥胖者体内瘦素的水平与胰岛素水平明显高于正常人,说明肥胖者存在瘦素抵抗(leptin... 详细信息

背景:儿童单纯性肥胖已呈逐年增加的趋势。肥胖症是心血管疾病、高血压、2型糖尿病、慢性炎症和胆石症等疾病的重要危险因素,严重威胁人类健康。研究发现肥胖者体内瘦素的水平与胰岛素水平明显高于正常人,说明肥胖者存在瘦素抵抗(leptin resistance)和胰岛素抵抗(insulin resistance)[1]。胰岛素抵抗是指一定浓度的胰岛素没有达到预期的生理效应,表现为外周组织尤其是肌肉、脂肪组织对葡萄糖的摄取减少和抑制肝脏葡萄糖输出减少。胰岛素与瘦素(leptin)具有同一信号转导通路,即Janus激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(signal transduction activating transcription factor,STAT)通路。细胞因子信号转导抑制因子3(suppressors of cytokine signaling 3,SOCS-3)是JAK/STAT通路的主要负性调节因子。SOCS-3可参与多种细胞因子的信号转导。大量基础性研究结果表明肥胖动物模型存在血清胰岛素水平升高,胰岛素受体(insulin receptor,insr)表达下降和SOCS-3基因表达上调。因而SOCS-3表达上调可能参与了胰岛素抵抗的形成。RNA干扰( RNA interference,RNAi)作为抑制基因表达的新技术,目前已广泛用于哺乳动物的基因功能和疾病治疗研究[2]。因此,通过RNAi下调SOCS-3基因表达有可能使insr表达升高,可能对肥胖症的胰岛素抵抗有治疗作用。目的:模拟儿童,以生后5周(相当于幼年期)的SD大鼠为实验动物。通过RNA干扰技术建立SOCS-3表达下调模型,然后予以高脂饲料喂养,通过观察大鼠体重变化,检测下丘脑insr mRNA表达水平,探讨RNA干扰(RNAi)引起的下丘脑SOCS-3表达下调对insr mRNA的影响,从而对肥胖症的胰岛素抵抗是否有治疗作用。方法:(本实验前期已提取下丘脑RNA,并采用放射免疫法测定了胰岛素和C肽含量以及应用全自动生化分析仪检测了血糖含量)样品分为2组:(1)RNAi+高脂饮食组(RNAi+high-fat diet,RNAi+HFD)(n=10),即下丘脑注射SOCS-3 lenti,高脂饲料喂养(含20%猪油);(2)control lenti +高脂饮食组(control lenti + high-fat diet ,Con+HFD)(n=8),即下丘脑注射control lenti,高脂饲料喂养(含20%猪油);分别采用半定量RT-PCR(semi-quantitative RT-PCR)(以β-actin为内对照)和荧光定量PCR (fluorescent quantitative PCR)法(以GAPDH为内对照)检测两组大鼠下丘脑内insr mRNA表达。结果:1. RNAi+HFD组大鼠体重降低较Con+HFD组明显,8周末时两组间差别具有极显著性意义(pinsr mRNA表达(相对灰度值)明显高于Con+HFD组,两组间差别有统计学意义(pinsr mRNA表达高于Con+HFD组,两组间差别有统计学意义(pinsr mRNA表达升高,提示SOCS-3基因表达下调对肥胖症的胰岛素抵抗可能有治疗作用。

关键词：肥胖症胰岛素抵抗 insr RNA干扰 SOCS-3

bta-miR-27a-3p靶向insr在围产期奶牛脂肪肝发病中的作用研究

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bta-miR-27a-3p靶向INSR在围产期奶牛脂肪肝发病中的作用研究

作者：郑志然山东农业大学

学位级别：硕士

脂肪肝是奶牛围产期常发的一种营养代谢性疾病,其发病原因主要与脂肪过度动员、胰岛素抵抗(IR)等相关。胰岛素通过与细胞膜上的胰岛素受体(insr)结合后引发级联反应,发挥其生物学作用。已有研究表明,IR可能是奶牛脂肪肝发病过程中的中... 详细信息

脂肪肝是奶牛围产期常发的一种营养代谢性疾病,其发病原因主要与脂肪过度动员、胰岛素抵抗(IR)等相关。胰岛素通过与细胞膜上的胰岛素受体(insr)结合后引发级联反应,发挥其生物学作用。已有研究表明,IR可能是奶牛脂肪肝发病过程中的中心环节。因此,深入研究insr及胰岛素信号通路在脂肪肝奶牛糖脂代谢中的作用机制对防治奶牛脂肪肝尤为重要。miRNA可以通过分解靶基因的m RNA或阻碍m RNA翻译来调控基因表达。人医和小鼠上的研究发现,miR-27a-3p参与了肝细胞葡萄糖摄取利用、甘油三酯(TG)合成等糖脂代谢过程。但是截至目前,鲜有文献报道miR-27a-3p在奶牛肝细胞糖脂代谢中的生物学功能。因此,本试验拟通过体内试验和体外试验相结合的方法,探究miR-27a-3p及其靶基因在奶牛肝脏糖脂代谢中的调控作用,以期从内源性调控角度部分揭示奶牛脂肪肝的分子发病机制。在体内试验中,对脂肪肝奶牛进行了血液生化指标检测和肝组织样本TG含量检测,测定了肝组织内insr和PI3K-AKT胰岛素信号通路关键基因表达量,同时检测了与insr基因密切联系的miRNA表达量。在体外试验中,通过向奶牛肝细胞中分别转染miR-27a-3p模拟物和抑制剂来达到miR-27a-3p在细胞水平的过表达和抑制,利用q RT-PCR和Western blot技术检测insr及PI3K-AKT胰岛素信号通路相关基因的表达变化,并借助双荧光素酶报告基因分析进行靶向关系验证;然后使用油酸钠建立脂肪肝细胞模型,观察miR-27a-3p inhibitor是否可以抵抗油酸钠对肝细胞造成的损伤;最后向奶牛肝细胞中转染insr的si RNA并检验下游信号通路的活性。主要试验结果如下:(1)脂肪肝奶牛体内发生了糖脂代谢紊乱,肝脏内insr表达减少,p-PI3K蛋白表达显著下降(Pinsr表达量(Pinsr表达量(Pinsr的3’UTR能够被miR-27a-3p直接靶向并起到显著调控作用(Pinsr为miR-27a-3p的靶基因。(3)不同浓度的油酸钠(0,0.25,0.50和1.00 mmol/L)处理奶牛肝细胞24 h。油红O染色结果显示,油酸钠浓度为0.50 mmol/L时,肝细胞出现明显脂质沉积,且细胞状态良好。另外,与油酸钠单独处理组相比,“油酸钠+inhibitor”组肝细胞内脂滴缩小,脂质蓄积程度减弱,同时insr表达显著增加(Pinsr-Bos-4156可以显著降低insr蛋白表达(Pinsr敲低后导致PI3K-AKT胰岛素信号通路活性下降,引起肝细胞内糖原合成减少,脂解增多。结果表明,insr是连接miR-27a-3p和下游PI3K-AKT胰岛素信号通路的重要中介。综上所述,本试验证实了奶牛发生脂肪肝时,肝内insr表达下降并伴有PI3KAKT胰岛素信号受损;miR-27a-3p通过靶向insr影响了PI3K-AKT胰岛素信号通路传导,进而调控糖脂代谢关键基因GSK-3β和HSL,参与奶牛肝细胞糖脂代谢过程。这表明,miR-27a-3p在未来可作为检测奶牛脂肪肝的潜在生物标志物和治疗位点,对诊断和治疗奶牛脂肪肝具有一定的应用价值。

关键词：脂肪肝 miR-27a-3p insr PI3K-AKT胰岛素信号通路

miR-424-5p通过insr基因对奶山羊乳脂代谢的调控作用研究

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miR-424-5p通过INSR基因对奶山羊乳脂代谢的调控作用研究

作者：韩蕾颖洁西北农林科技大学

学位级别：硕士

乳腺是哺乳动物泌乳的主要器官,脂肪酸代谢在泌乳过程中非常活跃。Micro RNAs(miRNAs)是一类长度为18-24个核苷酸的内源性非编码RNA,能通过靶基因参与细胞生命活动的调控,包括脂质代谢过程。miR-424-5p在奶山羊不同泌乳时期表达量差异显... 详细信息

乳腺是哺乳动物泌乳的主要器官,脂肪酸代谢在泌乳过程中非常活跃。Micro RNAs(miRNAs)是一类长度为18-24个核苷酸的内源性非编码RNA,能通过靶基因参与细胞生命活动的调控,包括脂质代谢过程。miR-424-5p在奶山羊不同泌乳时期表达量差异显著,但目前尚无关于miR-424-5p调控奶山羊乳腺脂质代谢的研究报道,因此奶山羊miR-424-5p的转录调控研究对反刍动物脂质合成的机制具有重要意义。本研究以奶山羊乳腺上皮细胞为研究材料,探究miR-424-5p对细胞脂肪酸代谢的调控作用;利用生物信息学及双荧光素酶报告系统预测并验证了miR-424-5p直接靶向insr基因的3`UTR发挥调控作用;采用过表达质粒和si RNA干扰的方法探究靶基因insr对乳腺上皮细胞脂质代谢的影响,从而揭示miR-424-5p通过insr调控奶山羊乳脂代谢的分子机制。主要研究结果如下:***-424-5p对乳腺上皮细胞脂肪酸代谢的影响。过表达miR-424-5p显著上调乳腺上皮细胞甘油三酯和脂滴的积累,脂肪酸代谢相关基因FASN的m RNA表达水平显著下调(P0.05),脂肪酸延伸相关基因ELOVL6 m RNA表达显著上调;表明miR-424-5p能够参与乳腺上皮细胞脂代谢的调控过程。2.生物信息学分析显示insr基因是miR-424-5p的靶基因之一,过表达或抑制miR-424-5p可导致insr基因m RNA表达水平显著降低或升高(Pinsr基因的表达。3.根据Gen Bank中山羊insr基因预测序列设计PCR引物,克隆得到山羊insr基因的CDS序列。序列长度为4110 bp,编码1369个氨基酸,蛋白分子量为154.75KDa,主要位于细胞膜上。同源性分析结果显示,奶山羊insr与山羊亲缘关系最近,其次是绵羊,与小鼠亲缘关系最远。4.通过pcDNA3.1-insr重组质粒上调乳腺上皮细胞中的insr基因m RNA和蛋白表达水平,细胞内甘油三酯含量和脂滴积累降低(Pinsr显著上调了Akt和m TOR蛋白的磷酸化水平(Pinsr基因通过激活Akt/m TOR信号通路抑制乳腺上皮细胞脂质的合成。5.利用siRNA技术干扰insr基因mRNA和蛋白的表达水平,细胞内甘油三酯含量和脂滴积累增加(P0.05);干扰insr显著下调了Akt、m TOR蛋白的磷酸化水平(Pinsr通过影响Akt/m TOR信号途径促进乳腺上皮细胞脂质合成。以上研究结果表明,miR-424-5p通过insr基因调控山羊乳腺上皮细胞乳脂代谢过程。本研究为miRNA对奶山羊乳腺上皮细胞脂肪酸代谢的调控网络和作用机制提供了理论和试验依据。

关键词： miR-424-5p insr 山羊乳腺上皮细胞乳脂代谢

穴位埋线对肥胖大鼠下丘脑弓状核insr蛋白表达的影响

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中华中医药学刊 2012年第8期30卷 1822-1825页

作者：姜军作衣运玲刘志诚大连大学附属新华医院针灸科辽宁大连116021 大连医科大学护理系辽宁大连116027 南京中医药大学针灸研究所江苏南京210029

目的:穴位埋线对肥胖大鼠弓状核胰岛素受体(insr)蛋白表达的影响。方法:采用穴位埋线治疗15日为1个疗程。结果:穴位埋线治疗后患者的各肥胖指标均明显下降,对弓状核胰岛素受体蛋白表达有提高作用。结论:穴位埋线减肥的中枢疗效是非常明... 详细信息

目的:穴位埋线对肥胖大鼠弓状核胰岛素受体(insr)蛋白表达的影响。方法:采用穴位埋线治疗15日为1个疗程。结果:穴位埋线治疗后患者的各肥胖指标均明显下降,对弓状核胰岛素受体蛋白表达有提高作用。结论:穴位埋线减肥的中枢疗效是非常明显的。说明穴位埋线是单纯性肥胖病有效的治疗手段之一。

关键词：穴位埋线肥胖大鼠 insr 蛋白表达

电针联合饮食控制对胰岛素抵抗模型大鼠insr和P90^(rsk)蛋白表达的影响

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长春中医药大学学报 2015年第4期31卷 676-679页

作者：唐念珍唐成林唐思诗杨辉张毅田源袁海洲曹净高睿琦重庆医科大学中医药学院重庆400016 重庆医科大学第一临床学院重庆400016

目的研究电针联合饮食控制对胰岛素抵抗模型大鼠insr和P90rsk蛋白表达的影响,探讨其增强胰岛素抵抗模型大鼠对胰岛素敏感性的机制。方法 SD雄性大鼠70只,随机分为普食组(n=10)和高脂高糖组(n=60),分别给予普通饮食及高脂高糖饮食。8周... 详细信息

目的研究电针联合饮食控制对胰岛素抵抗模型大鼠insr和P90rsk蛋白表达的影响,探讨其增强胰岛素抵抗模型大鼠对胰岛素敏感性的机制。方法 SD雄性大鼠70只,随机分为普食组(n=10)和高脂高糖组(n=60),分别给予普通饮食及高脂高糖饮食。8周后选取40只成功造模的大鼠随机分为:HFHCD 1、HFHCD 2、EA 1、EA 2组(n=10)。HFHCD 1组和EA 1组高脂高糖饮食,HFHCD 2组和EA 2组普食。EA组针刺1次/d,20 min/次,共14 d。观察大鼠体质量、血糖和胰岛素变化情况,Western blot检测各组大鼠insr和P90rsk的蛋白表达量。结果 insr和P90rsk蛋白表达:HFHCD组较CD组明显降低(Pinsr和P90rsk蛋白表达水平,从而恢复胰岛素信号的正常传导,增强胰岛素敏感性。

关键词：针灸疗法饮食控制胰岛素抵抗 insr P90^rsk

insr/IGF1R靶向NF-κB通路调控舌鳞癌增殖与转移的研究

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INSR/IGF1R靶向NF-κB通路调控舌鳞癌增殖与转移的研究

APP17肽对2型糖尿病KK小鼠海马神经元超微结构和insr、IRS-1的影响

第十四次中国口腔颌面外科学术会议

作者：何倩婷孙菁菁中山大学附属第一医院口腔颌面外科

研究目的:探讨ISNR和IGF1R在舌鳞状细胞癌的发生与转移中所起到的作用及相关机制。研究方法:免疫组化检测insr/IGF1R在正常舌黏膜组织、舌鳞癌组织中的表达情况。体外实验CCK-8法检测、transwell实验检测沉默或过表达insr/IGF1R后对舌... 详细信息

研究目的:探讨ISNR和IGF1R在舌鳞状细胞癌的发生与转移中所起到的作用及相关机制。研究方法:免疫组化检测insr/IGF1R在正常舌黏膜组织、舌鳞癌组织中的表达情况。体外实验CCK-8法检测、transwell实验检测沉默或过表达insr/IGF1R后对舌鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。体内实验检测沉默insr/IGF1R对舌鳞癌细胞在体内成瘤能力和肺转移能力的影响。构建含p65 NF-κB启动子(转录起始位点上游>2000bp)荧光素酶报告基因质粒,双荧光素酶报告基因检测insr/IGF1R是否对NF-κB存在调控作用。研究结果:insr和IGF1R在舌鳞癌中的表达显著高于正常舌黏膜中的表达,并在舌鳞癌的发生、发展及预后中起重要作用。体内、体外实验显示:沉默insr/IGF1R后可抑制舌鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因分析显示:p65 NF-κB是由insr/IGF1R的转录激活调节。研究结论:insr/IGF1R在舌鳞癌发生、发展及预后中起到重要的作用。insr/IGF1R促进舌鳞癌体内外增殖、侵袭及转移的能力。insr/IGF1R通过NF-κB通路调控舌鳞癌增殖与侵袭的能力。

关键词： insr IGF1R 增殖侵袭转移舌鳞状细胞癌

来源： cnki会议评论

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首都医科大学学报 2002年第2期23卷 115-118页

作者：庄晓明赵志炜姬志娟赵咏梅盛树力首都医科大学附属北京复兴医院内分泌科首都医科大学宣武医院

为观察APP1 7肽对糖尿病KKAy小鼠 (以下简称KK小鼠 )脑海马神经元部分信号转导蛋白表达的影响 ,并探讨APP1 7肽对神经元的营养作用 ,将KK小鼠分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和APP1 7肽治疗组(DM +APP1 7P组 ,给予APP1 7肽皮... 详细信息

为观察APP1 7肽对糖尿病KKAy小鼠 (以下简称KK小鼠 )脑海马神经元部分信号转导蛋白表达的影响 ,并探讨APP1 7肽对神经元的营养作用 ,将KK小鼠分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和APP1 7肽治疗组(DM +APP1 7P组 ,给予APP1 7肽皮下注射 )。 1 2周后将 3组小鼠处死 ,心脏取血测血糖和血浆胰岛素 ;灌注固定后 ,取海马送电镜检查并作免疫组织化学染色。结果显示 :①DM组与DM +APP1 7P组的血糖、胰岛素水平比C组显著升高 (P insr)、胰岛素受体底物 1 (IRS 1 )的表达低于C组和DM +APP1 7P组 (P <0 .0 5 ) ;③海马超微结构显示DM组海马神经元线粒体肿胀 ,未见凋亡的神经元 ,DM +APP1 7P组和C组神经元基本正常。提示 :APP1 7肽作为神经营养因子能激活信息转导通路 ,从而对神经元凋亡有改善作用。

关键词： APP17肽 2型糖尿病信号转导通路神经元超微结构动物实验海马区 insr IRS-1