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胞外葡萄糖对ins-1细胞电压门控Na+通道活性的调控作用及其机制研究

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胞外葡萄糖对INS-1细胞电压门控Na+通道活性的调控作用及其机制研...

作者：陈冲江西科技师范大学

学位级别：硕士

研究背景/目的:胰岛β细胞功能的正常发挥对于维持机体葡萄糖稳态十分重要,β细胞通过分泌胰岛素响应机体内升高的葡萄糖水平,而在胰岛素分泌过程中,涉及电压门控离子通道参与的离子机制,比如钾通道(potassium channel/Kchannel)和钙通... 详细信息

研究背景/目的:胰岛β细胞功能的正常发挥对于维持机体葡萄糖稳态十分重要,β细胞通过分泌胰岛素响应机体内升高的葡萄糖水平,而在胰岛素分泌过程中,涉及电压门控离子通道参与的离子机制,比如钾通道(potassium channel/Kchannel)和钙通道(calcium channel/Cachannel),然而,在β细胞中,电压门控钠通道(voltage-gated sodium channel,VGSC/Na)在响应葡萄糖分泌胰岛素过程中,其生理功能尚不明确。本研究的目的是确定胞外葡萄糖对VGSC的调节作用。方法:运用全细胞膜片钳记录技术研究胰岛素分泌细胞系大鼠ins-1细胞胞外葡萄糖对VGSC电流(I)的影响,分别采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)和甲基噻唑基二苯基四氮唑法(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium Bromide assay,MTT)测定葡萄糖对胰岛素含量和细胞存活率的影响。结果:研究表明,胞外应用葡萄糖能显著抑制I幅度,且该抑制作用呈浓度依赖性。其中,18 mM浓度葡萄糖能有效抑制I幅度及其稳态激活过程,同时使得VGSC的稳态失活曲线向超极化方向移动,并且延长VGSC的复活时程,此外,18 mM葡萄糖能增强VGSC的活性依赖性衰减作用,降低活化通道的比例,此外,与低浓度(0.1μM和0.2μM)河豚毒素(tetrodotoxin,TTX,VGSC特异性阻断剂)作用一致,18 mM葡萄糖还能够部分抑制VGSC的活动,并促进胰岛素合成。结论:胞外应用高浓度葡萄糖能促进ins-1细胞中胰岛素的合成,其中相关机制涉及部分抑制I通道,研究结果表明,VGSC在调节机体血糖稳态中起着至关重要的作用。

关键词：葡萄糖电压门控性钠通道 ins-1细胞河豚毒素胰岛素

原花青素对STZ损伤ins-1细胞的保护和修复作用

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原花青素对STZ损伤INS-1细胞的保护和修复作用

作者：赵丽兰州大学

学位级别：硕士

原花青素(proanthocyanidins, PC)是广泛存在于水果、蔬菜、坚果、花和籽皮特别是葡萄籽中的一类多酚化合物,属于生物类黄酮,目前国内外大量研究表明,来自葡萄籽中的原花青素具有多种生理及药理活性,包括抗菌,抗病毒,抗炎,抗肿瘤,抗氧化... 详细信息

原花青素(proanthocyanidins, PC)是广泛存在于水果、蔬菜、坚果、花和籽皮特别是葡萄籽中的一类多酚化合物,属于生物类黄酮,目前国内外大量研究表明,来自葡萄籽中的原花青素具有多种生理及药理活性,包括抗菌,抗病毒,抗炎,抗肿瘤,抗氧化,抗过敏以及心脏保护作用等,但是原花青素对ins-1细胞的影响尚未见报道。本实验通过体外细胞培养,观察原花青素对链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)所致大鼠胰岛素瘤细胞(ins-1细胞)损伤的保护和修复作用,为天然抗氧化物质预防和治疗糖尿病提供实验依据。将对数生长期的ins-1细胞用0.25%的胰蛋白酶消化制成1×105细胞/mL单细胞悬液,接种于细胞培养板,培养24小时后,随机进行分组,每组6个复孔：(1)正常对照组(2)STZ (3mmol/L)组：加入终浓度为3mmol/L的STZ溶液(3)PC组：加入不同浓度的PC溶液,使其终浓度分别为6.25μg/ml、2.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml(4)PC保护组：加入终浓度为3mmol/L的STZ溶液,同时加入不同浓度的PC溶液,使其终浓度分别为6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml(5)PC修复组：加入终浓度为3mmol/L的STZ溶液,培养6小时后加入不同浓度的PC溶液,使其终浓度分别为6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml(6)阿托品组：细胞中加入终浓度为1×10-6mol/L的阿托品(7)阿托品+原花青素组：细胞中加入终浓度为1×10-6mol/L的阿托品,同时加入不同浓度的PC溶液,使其终浓度分别为6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml(8)异搏定组：细胞中加入终浓度为1×10-7mol/L的异搏定(9)异搏定+原花青素组：细胞中加入终浓度为1×10-7mol/L异搏定,同时加入不同浓度的PC溶液,使其终浓度分别为6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml采用上述分组后,用噻唑蓝(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)法测定细胞增殖活性,放免法检测细胞上清液胰岛素含量,比色法检测细胞上清液丙二醛(malonaldehyde, MDA)的含量和总抗氧化能力(total antioxidant capacities, T-AOC),倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞术检测原花青素对ins-1细胞周期的影响。所有数据均采用SPSS16.0软件进行统计学分析,各项指标均以均数士标准差(x±s)表示,各组之间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),卡方检验(χ2-test)以Pins-1细胞的激发作用与正常对照组比较,8.4mmol/L～22.4mmol/L浓度的葡萄糖均明显促进ins-1细胞胰岛素的分泌,且与葡萄糖的浓度有关,其中16.8mmol/L是激发ins-1细胞的最佳浓度(Pins-1细胞增殖活力的影响与正常对照组比较,不同浓度原花青素作用12h、24h和48h能促进ins-1细胞的增殖活力(Pins-1细胞的增殖活力。与STZ组比较,原花青素(25μg/ml,50μg/ml,100μg/ml)对STZ抑制ins-1细胞的增殖活力有明显的保护和修复作用。3原花青素对ins-1细胞胰岛素分泌的影响与正常对照组比较,原花青素促进了胰岛素的分泌(Pins-1细胞MDA和T-AOC的影响与正常对照组比较,STZ组MDA生成明显升高,而T-AOC活力明显降低(Pins-1细胞损伤的保护和修护作用机制可能与抑制脂质过氧化物生成,提高总抗氧化能力有关。5原花青素对异搏定和阿托品抑制ins-1细胞胰岛素分泌的影响与正常对

关键词：原花青素链脲佐菌素 ins-1细胞胰岛素

芍药苷对STZ所致ins-1细胞损伤的影响

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芍药苷对STZ所致INS-1细胞损伤的影响

作者：任文辉兰州大学

学位级别：硕士

近年来研究资料显示,肥胖与胰岛素抵抗之间呈高度的相关性,并且是肥胖者发生2型糖尿病、高血压及脂质代谢紊乱等的重要原因。芍药苷(Paeoniflorin)是芍药的主要有效成分之一,现代医学认为芍药苷具有止痛、镇静、解痉、抗炎作用以及抗... 详细信息

近年来研究资料显示,肥胖与胰岛素抵抗之间呈高度的相关性,并且是肥胖者发生2型糖尿病、高血压及脂质代谢紊乱等的重要原因。芍药苷(Paeoniflorin)是芍药的主要有效成分之一,现代医学认为芍药苷具有止痛、镇静、解痉、抗炎作用以及抗自由基损伤作用。我室前期所做的实验工作发现：白芍水提取液可以抑制去卵巢大鼠肥胖,改善脂代谢紊乱、清除体内过多自由基;离体实验证明芍药苷促进离体脂肪组织释放游离脂肪酸及降低丙二醛的含量,提高总抗氧化能力水平。而芍药苷是否对胰岛细胞有直接作用,国内外尚未见报道,所以本实验选择不同浓度的芍药苷观察其对胰岛细胞胰岛素释放的影响;同时用链脲佐菌素建立胰岛细胞损伤模型,通过观察芍药苷对损伤胰岛细胞的保护和修复作用,以研究芍药苷的作用机制,并初步探讨胰岛素释放的可能机制。选用大鼠胰岛素瘤细胞ins-1,细胞传代培养后,以1×105个/ml接种于96孔板,培养24h后,分别加入各浓度药物,作用12h。取细胞培养液测定细胞增殖活力和胰岛素、丙二醛、总抗氧化能力的水平。实验分为九组：①正常对照组;②芍药苷组(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L);③STZ组(损伤组);④芍药苷(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)+STZ组(芍药苷保护组);⑤STZ+芍药苷(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)组(芍药苷修复组);⑥阿托品组(10-6mol/L);⑦阿托品(10-6mol/L)+芍药苷(10-7mol/L)组;⑧异搏定组(10-7mol/L);⑨异搏定(10-7mol/L)+芍药苷(10-7mol/L)组。实验数据用均数±标准差(χ±S)表示,组间显著性差异采用单因素方差分析法,P细胞对葡萄糖的刺激反应与正常对照组相比,随着葡萄糖浓度的增加(5.6-16.8 mmol/L范围内),ins-1细胞分泌的胰岛素量也逐渐增加;但22.4mmol/L、33.6 mmol/L的葡萄糖则使胰岛素的分泌量随葡萄糖浓度的增加有所减少。 2.芍药苷对ins-1细胞增殖活力的影响与正常对照组相比,各浓度芍药苷对ins-1细胞的增殖活力无明显影响。 3.芍药苷对ins-1细胞胰岛素释放的影响与正常对照组相比,10-7mol/L, 10-6mol/L的芍药苷可分别不同程度的促进ins-1细胞释放胰岛素,而10-5mol/L的芍药苷对ins-1细胞释放胰岛素无明显的促进作用。 4.阻断剂对ins-1细胞胰岛素释放的影响与正常对照组相比,阿托品组对ins-1细胞胰岛素释放没有显著影响,阿托品+芍药苷组ins-1细胞胰岛素释放显著升高;与阿托品组相比,阿托品+芍药苷组对ins-1细胞胰岛素释放没有显著影响。与正常对照组相比,异搏定对ins-1细胞胰岛素释放没有显著影响,异搏定+芍药苷组ins-1细胞胰岛素释放显著升高;与异搏定组相比,异搏定+芍药苷组对ins-1细胞胰岛素释放没有显著影响。 5.芍药苷对STZ所致ins-1细胞损伤的保护和修复作用与正常对照组相比,STZ组ins-1细胞增殖活力明显降低,胰岛素释放明显减少,MDA含量升高,T-AOC下降。与STZ组相比,芍药苷保护组的胰岛素分泌量明显升高,MDA含量明显降低,T-AOC显著升高。而芍药苷修复组胰岛素释放没有明显变化,但MDA含量明显降低,T-AOC显著升高。 6.芍药苷对ins-1细胞形态学及细胞周期分布和凋亡的影响与正常对照组相比,STZ组细胞形态变圆,细胞悬浮于细胞液中;在STZ损伤ins-1细胞前后加入各浓度芍药苷,ins-1细胞形态与STZ组相比没有明显改变。正常对照组细胞分布为G1期48.930%,G2期3.386%,S期47.684%。STZ作用12h,细胞被阻滞在S期,G1期细胞减少,G2期无细胞分布。芍药苷+STZ共同作用12h,细胞仍然被阻滞在S期,G1期细胞减少,G2期无细胞分布。正常对照组的细胞凋亡率为0.247%。与正常对照组相比,STZ组的细胞凋亡率明显升高为0.743%。芍药苷+STZ共同作用12h,细胞凋亡率较STZ组显著回降,为0.441%。实验结果表明：ins-1细胞对葡萄糖的刺激具有良好的反应性;芍药苷可以促进ins-1细胞释放胰岛素,其作用可能部分经由细胞膜上的胆碱能M受体和L-型的Ca2+通道所介导;芍药苷对STZ损伤的ins-1细胞有一定的保护和修复作用,此作用可能与其提高ins-1细胞的抗氧化能力有关;芍药苷对ins-1细胞具有一定的抗凋亡作用。

关键词：芍药苷 ins-1细胞 STZ 抗氧化能力阿托品异搏定

氯化镉对大鼠胰岛瘤ins-1细胞自噬和凋亡的影响

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氯化镉对大鼠胰岛瘤INS-1细胞自噬和凋亡的影响

作者：李娜济南大学

学位级别：硕士

背景当前心血管疾病、癌症和糖尿病已成为导致人类死亡的前三位死亡原因。其中环境污染为糖尿病发病的重要诱因。环境污染近年来日趋严重，同时糖尿病的发病率也逐年增加，而镉在重金属环境污染物中很常见并具有代表性。目前评估镉对... 详细信息

背景当前心血管疾病、癌症和糖尿病已成为导致人类死亡的前三位死亡原因。其中环境污染为糖尿病发病的重要诱因。环境污染近年来日趋严重，同时糖尿病的发病率也逐年增加，而镉在重金属环境污染物中很常见并具有代表性。目前评估镉对健康的影响及建立作用于不同器官系统的浓度-反应模型的研究较多，如镉与癌症、肾脏和肝脏损伤、骨质疏松或软化、生殖系统影响的研究较广泛，而其与胰腺或糖尿病的研究甚少。与此同时，近年来自噬研究成为热点，其与免疫、炎症、感染、肿瘤、衰老及心血管病、肝脏疾病、肌肉疾病、神经退行变等领域的研究广泛，目前已有研究证实自噬亦与糖尿病和胰岛细胞相关，但研究较少，具体机制尚不清楚。自噬与糖尿病和胰岛细胞的关系及调控机制的研究可对开发临床治疗相关药物和为糖尿病及其并发症的防治提供新的思路有重要意义。本课题用不同浓度的氯化镉(CdCl)干预体外培养的大鼠胰岛瘤细胞ins-1，并通过各种实验室方法检测其凋亡及自噬情况，从整体上研究氯化镉对胰岛细胞自噬、凋亡的影响，可为揭示镉对胰岛功能的损伤机理提供新的证据，而有关分子机制的揭示也可为修复胰岛损伤寻找新的治疗靶点。目的研究典型持久性有毒污染物CdCl对大鼠胰岛瘤ins-1细胞自噬和凋亡的影响及二者的关系，同时探索可能的分子机制和参与因素。方法取处于对数期的ins-1细胞用于实验，分别用0、0.01、0.1、1μmol/L CdCl处理细胞，48h后用Hochest染色法在显微镜下观察细胞形态变化，用磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测CdCl对ins-1细胞增殖的影响;用2’,7’-二氯荧光素二乙酸盐(DCFH-DA)作为荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的水平变化;应用Western blot检测细胞自噬体膜上自噬标志分子-微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、凋亡标志蛋白-聚腺苷二磷酸核糖多聚酶(PARP)的切割带变化及检测(哺乳动物)雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的70KD的磷酸化的核糖体S6激酶(p70)、p70的磷酸化形式p-p70的变化，以明确CdCl是否可诱导的ins-1细胞产生自噬及其是否通过mTOR依赖的信号通路;将ins-1细胞的自噬必需基因7(Atg7)通过siRNA介导的RNA干扰手段进行沉默，然后以1μmol/L CdCl处理细胞，48h后应用Western blot检测细胞中Atg7、LC3-Ⅱ、PARP切割带，以确定CdCl所诱导的自噬对ins-1细胞凋亡的影响;先用400μmol/L的活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理ins-1细胞，1h后加入1μmol/L CdCl，48h后应用SRB染色法探明NAC处理后对ins-1细胞增殖是否有保护作用，Western blot检测LC3-Ⅱ蛋白、PARP切割蛋白，以确定CdCl是否通过刺激活性氧的产生诱导ins-1细胞的自噬和凋亡。结果 0.1、1μmol/L CdCl干预24h后，细胞皱缩，变小变圆，凋亡增加，与对照组比较，存活率明显降低(P＜0.05);与对照组相比，各浓度组LC3-Ⅱ和PARP切割带蛋白水平均增加，LC3-Ⅱ呈时间和剂量依赖性，PARP切割带呈时间依赖性，p70、p-p70蛋白水平无明显变化;与阴性对照组相比，Atg7siRNA组Atg7蛋白水平显著降低，与阴性对照+CdCl组相比，Atg7siRNA+CdCl组LC3-Ⅱ蛋白水平明显下降，而PARP切割带蛋白水平变化则与之相反;与对照组相比，各浓度组活性氧产生均明显增多，呈剂量依赖性;与CdCl组相比，NAC+CdCl组存活率明显增加(P＜0.05)，LC3-Ⅱ、PARP切割带蛋白水平均下降。结论 CdCl可能通过刺激活性氧的增加而诱导ins-1细胞自噬和凋亡，且自噬是凋亡的抑制因素。

关键词：氯化镉 ins-1细胞自噬凋亡活性氧

1-甲基乙内酰脲抑制ins-1细胞增殖及胰岛素分泌的研究

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1-甲基乙内酰脲抑制INS-1细胞增殖及胰岛素分泌的研究

作者：贺铖南华大学

学位级别：硕士

目的:探索1-甲基乙内酰脲能否抑制大鼠胰岛素瘤ins-1细胞增殖及激素分泌的作用,探讨其可能的机制,并与生长抑素类似物奥曲肽进行比较方法:采取体外培养的大鼠胰岛素瘤ins-1细胞株。分别用不同浓度的1-甲基乙内酰脲及奥曲肽处理72小时后... 详细信息

目的:探索1-甲基乙内酰脲能否抑制大鼠胰岛素瘤ins-1细胞增殖及激素分泌的作用,探讨其可能的机制,并与生长抑素类似物奥曲肽进行比较方法:采取体外培养的大鼠胰岛素瘤ins-1细胞株。分别用不同浓度的1-甲基乙内酰脲及奥曲肽处理72小时后,通过CCK-8实验检测各组细胞增殖抑制率,做出生长曲线图,并与空白对照组进行比较。FCM流式细胞仪检测各组细胞凋亡及细胞周期分布;放射免疫分析法测定各组细胞胰岛素分泌水平;Western Blot检测各组细胞内cAMP及PKA的表达。结果:***-8实验结果显示:不同浓度的1-甲基乙内酰脲以及奥曲肽处理细胞72h后,均能抑制大鼠胰岛素瘤ins-1细胞的增殖,并且抑制效果随着浓度的增大逐渐增强。***及细胞凋亡检测结果显示:相比于空白对照组,1-甲基乙内酰脲、奥曲肽各个浓度组的ins-1细胞凋亡率明显上升,差异有统计学意义(p1-甲基乙内酰脲、奥曲肽各个浓度组细胞处于G0/G1期的细胞比率均高于正常对照组。3.放射免疫分析测定结果显示:相比于空白对照组,1-甲基乙内酰脲及奥曲肽各实验组浓度下均能抑制ins-1细胞分泌胰岛素,且其抑制效果呈浓度依赖关系,随着浓度的增加,抑制效果增强。*** Blot检测结果显示:与空白对照组相比,1-甲基乙内酰脲及奥曲肽处理ins-1细胞后,其细胞内cAMP及PKA均明显下调,差异具有显著性(p1.1-甲基乙内酰脲对体外培养的大鼠胰岛素瘤ins-1细胞具有抑制细胞增殖的作用,其机制可能与其诱导细胞凋亡及影响细胞周期有关。2.1-甲基乙内酰脲可以抑制ins-1细胞分泌胰岛素,其抑制激素分泌的作用具有剂量依赖性。1-甲基乙内酰脲抑制胰岛素分泌可能与其抑制了cAMP-PKA通路有关。

关键词： 1-甲基乙内酰脲奥曲肽 ins-1细胞胰岛素分泌

蓝刺头多糖B对ins-1细胞氧化损伤、凋亡及胰岛素分泌影响的研究

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蓝刺头多糖B对INS-1细胞氧化损伤、凋亡及胰岛素分泌影响的研究

作者：王岩内蒙古农业大学

学位级别：硕士

前期试验证明蓝刺头多糖B(ETPB),对糖尿病模型动物具有改善胰腺损伤,提高胰岛素分泌、改善胰岛素抵抗的作用。本试验通过培养ins-1胰岛β细胞,探究ETPB直接作用于胰岛β细胞,对细胞氧化损伤、凋亡及胰岛素分泌功能的影响及机理;为ETPB对... 详细信息

前期试验证明蓝刺头多糖B(ETPB),对糖尿病模型动物具有改善胰腺损伤,提高胰岛素分泌、改善胰岛素抵抗的作用。本试验通过培养ins-1胰岛β细胞,探究ETPB直接作用于胰岛β细胞,对细胞氧化损伤、凋亡及胰岛素分泌功能的影响及机理;为ETPB对2型糖尿病防控的相关研究提供理论依据。结果显示:1、ETPB使用MTT法确定最大安全浓度为250μg/mL,ETPB作用48h后与H0模型组相比可提高细胞存活率(P细胞少于模型组;使用RT-qPCR检测mRNA表达,ETPB可提高Bcl-2表达(Pins-1细胞氧化损伤的作用。2、ETPB可通过调控线粒体凋亡通路相关基因从而抑制由H0引起的细胞凋亡。3、ETPB可促进ins-1细胞胰岛素分泌,提高PDX-1、IRS-2表达。

关键词：蓝刺头多糖B ins-1细胞氧化损伤凋亡胰岛素

不同脂肪酸对ins-1细胞TXNIP表达的影响及其机制

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不同脂肪酸对INS-1细胞TXNIP表达的影响及其机制

作者：张倩山西医科大学

学位级别：硕士

研究背景:糖尿病的患病率逐年上升,目前已成为严重威胁人类健康的疾病之一,胰岛β细胞凋亡增加是糖尿病发生、发展的关键因素[1]。近年来有研究表明,2型糖尿病患者体内长期高水平的游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs),特别是饱和脂肪酸... 详细信息

研究背景:糖尿病的患病率逐年上升,目前已成为严重威胁人类健康的疾病之一,胰岛β细胞凋亡增加是糖尿病发生、发展的关键因素[1]。近年来有研究表明,2型糖尿病患者体内长期高水平的游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs),特别是饱和脂肪酸可以引起胰岛素抵抗、胰岛β细胞功能紊乱,以及β细胞凋亡的增加,进而加重糖尿病[2-4]。硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin interacting protein,TXNIP)又名VDUP1(Vitamin D(3)up-regulated protein 1)和TBP2(Thioredoxin-binding protein-2),属于α抑制蛋白家族,是目前发现的唯一内源性的硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)结合抑制蛋白,在糖尿病各组织中其表达均显著升高,已有大量研究证明高糖可引起TXNIP表达明显升高,并介导β细胞功能损伤和凋亡[5-7]。但是,作为糖尿病主要损伤因素之一的游离脂肪酸,其对TXNIP表达的影响,以及不同饱和程度的游离脂肪酸对TXNIP表达的可能差别目前尚不清楚。因此本课题旨在研究不同饱和程度的脂肪酸对ins-1胰岛细胞TXNIP表达的影响,并分析其可能机制。目的:1.使用不同饱和程度的游离脂肪酸孵育ins-1细胞,观察不同类型脂肪酸对ins-1胰岛细胞凋亡及TXNIP表达的影响。2.分析脂肪酸调节TXNIP表达的可能机制。方法:1.实验分组:将正常培养的ins-1细胞分为四组:分别是正常对照组(含0.55%fatty acid free-BSA的RPMI1640培养基)、饱和脂肪酸-软脂酸组(0.5 mmol/L软脂酸+0.55%fatty acid free-BSA)、单不饱和脂肪酸-棕榈油酸组(0.5 mmol/L棕榈油酸+0.55%fatty acid free-BSA)、多不饱和脂肪酸-DHA 组(0.5 mmol/L DHA+0.55%fatty acid free-BSA),均于培养24 h后收集细胞进行指标测定。2.采用Real-time PCR方法测定FFAs处理后ins-1细胞TXNIP mRNA表达量。3.采用 Western blot方法检测FFAs处理后 ins-1 细胞 TXNIP、Cleaved caspase-3、Caspase-3、ChREBP、FOXO1、p-NF-KB 蛋白表达。4.采用免疫荧光技术检测FFAs处理后ins-1细胞中ChREBP蛋白表达。5.使用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测ins-1细胞凋亡情况。结果:1.不同饱和程度的FFAs对ins-1细胞TXNIP表达的影响不同。与对照组相比,饱和脂肪酸软脂酸组TXNIP mRNA和蛋白表达均显著上调,而不饱和脂肪酸棕榈油酸组和DHA组ins-1细胞TXNIP表达均没有明显的改变(见图1)。如图2所示,软脂酸引起的TXNIP的蛋白表达从18 h开始增加,并于24 h达到最高。36 h时,软脂酸诱导的TXNIP表达降低到原蛋白水平。而棕榈油酸和DHA在12 h、18 h、24 h、36 h不同的时间点对TXNIP表达与对照组相比均无统计学差异。***由于其饱和程度的不同对ins-1细胞凋亡也具有不同的影响。如图3所示,软脂酸组Cleaved caspase-3/caspase-3的比值与对照组相比明显增加。棕榈油酸组和DHA组Cleaved caspase-3/caspase-3比值与对照组相比无显著性差异。流式细胞术结果显示,软脂酸组ins-1细胞的凋亡指数明显增加,而棕榈油酸组和DHA组对ins-1细胞凋亡的影响与对照组相比无统计学差异(见图4)。3.软脂酸对转录因子ChREBP和FOXO1蛋白表达的影响。使用Western blot和免疫荧光方法研究发现,与对照组相比软脂酸组ChREBP蛋白表达显著上调,转录因子FOXO1蛋白表达降低。(见图5-6)4.软脂酸调节ins-1细胞TXNIP蛋白表达与NF-κB磷酸化相关。与对照组相比,软脂酸组p-NF-κB p65蛋白表达量明显增加(见图7)。加入NF-κB抑制剂PDTC后,与不加抑制剂组相比,软脂酸孵育后引起的TXNIP mRNA和蛋白水平的上调受到明显的抑制(见图8)。同样,使用一种多肽类的NF-κB抑制剂SN50也可降低软脂酸诱导的TXNIP表达上调(见图9)。同时发现,PDTC能够显著降低软脂酸诱导的ChREBP表达上调(见图10),而对软脂酸下调FOXO1的表达没有影响(见图11)。5.p38 MAPK参与软脂酸诱导的TXNIP表达上调。与不加抑制剂组相比,使用p38 MAPK抑制剂SB203580可显著抑制软脂酸处理后引起的ins-1细胞TXNIP mRNA和

关键词：游离脂肪酸软脂酸硫氧还蛋白相互作用蛋白 ins-1细胞

牛磺熊脱氧胆酸对棕榈酸诱导的ins-1细胞凋亡的保护作用

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牛磺熊脱氧胆酸对棕榈酸诱导的INS-1细胞凋亡的保护作用

作者：李杰南京医科大学

学位级别：硕士

目的:(1)观察棕榈酸对大鼠胰岛素瘤株ins-1细胞凋亡的作用。(2)观察牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)对棕榈酸诱导的大鼠胰岛素瘤株ins-1细胞凋亡的影响。(3)探讨牛磺熊脱氧胆酸阻断棕榈酸诱导大鼠胰岛素瘤株ins-1细胞凋亡的机制。方法:(1)分别用... 详细信息

目的:(1)观察棕榈酸对大鼠胰岛素瘤株ins-1细胞凋亡的作用。(2)观察牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)对棕榈酸诱导的大鼠胰岛素瘤株ins-1细胞凋亡的影响。(3)探讨牛磺熊脱氧胆酸阻断棕榈酸诱导大鼠胰岛素瘤株ins-1细胞凋亡的机制。方法:(1)分别用浓度为0.25mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L的棕榈酸处理培养的大鼠胰岛素瘤株ins-1细胞12h,以噻唑兰(MTT)法检测细胞毒性作用。(2)用棕榈酸(0.5 mmol/L)加不同浓度的TUDCA(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)培养大鼠胰岛素瘤株ins-1细胞12h,以噻唑兰(MTT)法检测细胞毒性作用。(3)流式细胞术检测ins-1细胞的凋亡。(4)半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测凋亡相关基因Bax/Bcl-2。结果:(1)棕榈酸处理大鼠胰岛素瘤株ins-1细胞12h,在0.5-1.0mmol/L的浓度范围内,抑制细胞活性,并能诱导ins-1细胞凋亡(Pins-1细胞12h后,当TUDCA浓度为50-100μmol/L时,与棕榈酸组相比,ins-1细胞活性上升(P细胞凋亡减少(Pins-1细胞12h后,当棕榈酸浓度增加,Bax基因的表达逐渐增高(P细胞凋亡。

关键词：牛磺熊脱氧胆酸棕榈酸 ins-1细胞凋亡凋亡相关基因

牛磺熊脱氧胆酸在棕榈酸诱导的ins-1细胞凋亡中的作用

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生态毒理学报 2010年第3期5卷 407-413页

作者：李杰茅晓东刘翠萍刘超南京医科大学第一附属医院内分泌科南京210029 南京市市级机关医院南京210016

为观察牛磺熊脱氧胆酸(Tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)对棕榈酸(Palmitate)诱导的ins-1细胞凋亡的影响,分别用不同浓度棕榈酸(0.25mmol·L-1、0.5mmol·L-1、1.0mmol·L-1),棕榈酸(0.5mmol·L-1)+不同浓度TUDCA(25μmol·L-1、50μmol·L-1、100μmol·L-1)培养ins-1细胞12h,用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR技术检测凋亡相关基因Bax/Bcl-2的表达.结果表明,与空白对照组比较,棕榈酸组(浓度≥0.5mmol·L-1)ins-1细胞凋亡率显著上升(p1时,与棕榈酸组相比,ins-1细胞凋亡率显著下降(p1)ins-1细胞凋亡相关基因Bax表达显著上升(pins-1细胞凋亡,对ins-1细胞发挥保护作用.而凋亡促进基因Bax的表达下调,凋亡抑制基因Bcl-2的表达上调可能是其作用机制之一.

关键词：牛磺熊脱氧胆酸棕榈酸 ins-1细胞凋亡