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异烟肼致大鼠肝损伤中长链RNA肺腺癌转移相关转录体1与IL-6/STAT3通路的关系研究

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国际药学研究杂志 2017年第3期44卷 267-272页

作者：王悦田慎谦牛琛李玉红朱凌妍任琦郑国颖冯福民华北理工大学公共卫生学院河北省煤矿卫生与安全重点实验室唐山063000

目的探讨异烟肼致大鼠肝损伤模型中长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录体1(MALAT1)表达与il-6/信号转导及转录激活因子3(stat3)的关系。方法 56只健康无特定病原体(SPF)级SD大鼠雌雄各半,随机分为实验组48只,给予异烟肼63 mg/(kg... 详细信息

目的探讨异烟肼致大鼠肝损伤模型中长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录体1(MALAT1)表达与il-6/信号转导及转录激活因子3(stat3)的关系。方法 56只健康无特定病原体(SPF)级SD大鼠雌雄各半,随机分为实验组48只,给予异烟肼63 mg/(kg·d)连续灌胃3、7、10、14、21和28 d,每天固定时间点1次,每个时间点大鼠8只;对照组8只,给予等容积蒸馏水。测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平;实时荧光定量PCR检测肝组织lnc RNA MALAT1、IL-6/STAT3 mRNA表达。结果随给药时间的延长,肝组织在7 d后出现病理损伤,其后越加严重;与正常对照组相比,lnc RNA MALAT1、IL-6/STAT3 mRNA,以及血浆ALT、AST的表达水平整体呈上升趋势(均PIL-6/STAT3 m RNA表达水平呈正相关(均PIL-6/STAT3 mRNA表达水平与ALT、AST含量呈正相关(均P为IL-6/STAT3信号通路激活相关。

关键词：异烟肼肝损伤大鼠 lncRNA 肺腺癌转移相关转录体1 IL-6/STAT3

鳖甲煎丸对肝癌细胞Bcl-2、Bax表达及IL-6/STAT3信号通路的影响

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时珍国医国药 2020年第2期31卷 277-279页

作者：孙阳陶雪莲徐放李明珠姜德友黑龙江中医药大学基础医学院黑龙江哈尔滨150040

目的探讨鳖甲煎丸对H22小鼠肝癌细胞的作用机制,并对其相关信号通路进行研究。方法制造H22肝癌移植瘤模型,对荷瘤鼠瘤重、胸腺指数进行检测;采用酶联免疫吸附测定(Elisa)法对荷瘤鼠血清il-6检测;免疫组织化学法检测H22细胞中stat5b蛋白... 详细信息

目的探讨鳖甲煎丸对H22小鼠肝癌细胞的作用机制,并对其相关信号通路进行研究。方法制造H22肝癌移植瘤模型,对荷瘤鼠瘤重、胸腺指数进行检测;采用酶联免疫吸附测定(Elisa)法对荷瘤鼠血清il-6检测;免疫组织化学法检测H22细胞中stat5b蛋白表达;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测鳖甲煎丸对H22细胞的Bcl-2、Bax和stat3 mRNA表达的影响,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Bax、Bcl-2、stat3和p-stat3的蛋白表达。结果与模型对照组相比,鳖甲煎丸降低H22荷瘤鼠瘤重(Pil-6的含量(Pstat3 mRNA和stat3、stat5b蛋白表达(Pstat3蛋白表达也下调(Pil-6/stat信号通路,发挥其抗肿瘤作用。

关键词：鳖甲煎丸 H22 Bax Bcl-2 IL-6/STAT3

淫羊藿苷通过IL-6/STAT3通路逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的作用机制研究

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实用癌症杂志 2023年第8期38卷 1233-1238页

作者：宁丞君王瑜胡邵霖河南省信阳市中心医院 464000

目的探讨淫羊藿苷(ICA)对A549/DDP细胞顺铂耐药的逆转作用及对白细胞介素-6(il-6)和信号传导子及转录激活子3(stat3)信号通路的调节。方法第4代对数生长期的A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组和ICA组,MTT法检测不同浓度ICA对细胞增殖率... 详细信息

目的探讨淫羊藿苷(ICA)对A549/DDP细胞顺铂耐药的逆转作用及对白细胞介素-6(il-6)和信号传导子及转录激活子3(stat3)信号通路的调节。方法第4代对数生长期的A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组和ICA组,MTT法检测不同浓度ICA对细胞增殖率的影响。采用不同浓度DDP及50、100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,MTT法检测ICA对A549/DDP细胞化疗敏感性的影响。采用4μg/mL DDP和50、100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell试验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR检测细胞中肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药蛋白(MRP) mRNA相对表达量,蛋白印迹法检测il-6、stat3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量。结果细胞增殖率随ICA浓度的增加而降低(Pil-6、stat3和Bcl-2蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率和Bax蛋白相对表达量升高。结论 ICA可增强A549/DDP细胞对DDP的敏感性,逆转耐药性,其可能是通过抑制IL-6/STAT3信号通路发挥作用。

关键词： A549/DDP细胞耐药 IL-6/STAT3 淫羊藿苷

马齿苋多糖对溃疡性结肠炎大鼠肠组织IL-6/STAT3及NF-κB的影响

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中国应用生理学杂志 2018年第3期34卷 263-267页

作者：范文涛王攀红王倩陕西中医药大学咸阳712046

目的:采用TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)复制溃疡性结肠炎大鼠模型,探索马齿苋多糖对溃疡性结肠炎大鼠肠组织il6/stat3及NF-κB的影响,明确IL-6/STAT3信号通路与慢性炎症性肠病发病的关系,为慢性溃疡性结肠炎的治疗寻找新靶点。方法:将40只S... 详细信息

目的:采用TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)复制溃疡性结肠炎大鼠模型,探索马齿苋多糖对溃疡性结肠炎大鼠肠组织il6/stat3及NF-κB的影响,明确IL-6/STAT3信号通路与慢性炎症性肠病发病的关系,为慢性溃疡性结肠炎的治疗寻找新靶点。方法:将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、美沙拉嗪组和马齿苋组(n=10)。采用TNBS诱导复制结肠炎模型,造模成功后第3天开始灌胃给药:美沙拉嗪组剂量为每次10 mg/kg,每日1次,连续3周;马齿苋组给予马齿苋多糖,每次10 ml/kg,每日1次,连续3周;模型组和对照组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续3周。收集大鼠结肠内容物称重,干燥后再次称重,取结肠组织作病理切片。采用ELISA试剂盒检测血清il-6、il-1β、TNF-α和核转录因子-kappa B(NF-κB)含量;免疫组化染色法测定结肠髓过氧化物酶(MPO);RT-PCR法检测信号转导和转录激活因子(stat3)、il-6的mRNA。结果:与模型组、美沙拉嗪组比较,马齿苋组大鼠排便状态明显改善,肠粘膜水肿减轻;血清il-6、s il-6Rα、gp130,肠组织MPO、NF-κB含量均降低(Pstat3、il-6mRNA的表达水平明显降低(P0.05)。结论:马齿苋多糖通过降低大鼠血清il-6、s il-6Rα、gp130含量及肠组织MPO、NF-κB水平,减轻s il-6Rα与il-6形成复合物所致的炎症反应;经IL-6/STAT3信号通路下调大鼠肠组织stat3和il-6的mRNA水平,从而抑制炎症的发生。

关键词：马齿苋多糖溃疡性结肠炎 IL-6/STAT3 NF-κB、大鼠

艾灸对疲劳大鼠额叶皮层IL-6/STAT3信号通路的影响

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艾灸对疲劳大鼠额叶皮层IL-6/STAT3信号通路的影响

作者：李天歌北京中医药大学

学位级别：硕士

[背景]运动性疲劳属于中医“劳倦”、“虚劳”等范畴。长期高强度训练造成的慢性运动性疲劳,会导致机体出现亚健康或疾病状态。消除运动性疲劳是医学研究的热点之一。临床实践表明,艾灸疗法是有效缓解运动性疲劳的手段之一,但其作用机... 详细信息

[背景]运动性疲劳属于中医“劳倦”、“虚劳”等范畴。长期高强度训练造成的慢性运动性疲劳,会导致机体出现亚健康或疾病状态。消除运动性疲劳是医学研究的热点之一。临床实践表明,艾灸疗法是有效缓解运动性疲劳的手段之一,但其作用机制尚待深入阐明。高强度运动可引起机体促炎性细胞因子释放和一系列炎症反应,引起外周及脑内促炎细胞因子白细胞介素-6（il-6）升高,其中il-6是对运动影响较为深刻的细胞因子之一,并且中枢高浓度il-6等促炎细胞因子是诱发机体出现疲劳、精神运动性迟滞等症状的重要因素。中枢神经炎症反应在运动性疲劳发病中的作用日益受到关注。il-6/信号转导与转录激活因子3（stat3）信号通路在慢性炎症反应形成过程中具有重要的调控作用。小胶质细胞是介导神经炎症的主要效应细胞,其过度活化后会分泌大量促炎细胞因子,加重炎症反应。我们前期研究表明,艾灸足三里可调节运动性疲劳大鼠血清炎性细胞因子水平。本研究在前期工作基础上,探讨艾灸对运动性疲劳大鼠额叶皮层IL-6/STAT3信号通路和小胶质细胞活性的影响,来阐释艾灸对运动性疲劳中枢神经炎症的调节机制。[目的]本研究围绕IL-6/STAT3信号通路,观察艾灸对慢性运动性疲劳大鼠行为学,外周（血清、腓肠肌）及额叶皮层炎性细胞因子il-6和白细胞介素-10（il-10）,以及额叶皮层IL-6/STAT3信号通路及小胶质细胞活性的影响,揭示艾灸缓解运动性疲劳的作用机制。[方法]1.动物和分组:SPF级雄性SD大鼠30只,体重（200±20）g,随机分为正常组、模型组、艾灸组,每组10只。2.运动性疲劳大鼠模型制备方法:采用21天负重力竭游泳的方法制备运动性疲劳大鼠模型。以大鼠游泳动作明显失调,身体下沉至水底1Os仍无法返回至水面作为力竭标准。3.艾灸治疗方法:从造模第1天开始,于造模后采用自贴式小艾炷艾灸大鼠双侧足三里穴,每穴各灸3壮,隔日1次,共11次。4.行为学观察:（1）一般情况:观察大鼠的精神状态、活动情况、皮毛柔软度及光泽度等;（2）体重:观察造模第1天、7天、14天、21天的体重情况,以反映动物的整体情况;（3）力竭游泳实验:记录造模第1天、7天、14天、21天大鼠的力竭游泳时间,即从大鼠入水即刻开始至达到力竭标准的时间,以反映大鼠的疲劳程度。只对模型组与艾灸组进行此操作。（4）旷场实验:造模结束后,将大鼠放置于旷场仪内,记录5min内各组大鼠的水平及垂直移动距离。以反映动物的自主活动性。5.指标检测:（1）采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清、腓肠肌及额叶皮层il-6、il-10的含量;（2）采用Western Blot方法检测大鼠额叶皮层酪氨酸激酶2（JAK2）、磷酸化JAK2（p-JAK2）、stat3及磷酸化stat3（p-stat3）蛋白的表达;（3）采用免疫组化法检测小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白1（Iba-1）在额叶皮层的表达。6.统计方法:采用SPSS20.0软件进行统计,数据均以均数±标准差（X±SD）形式呈现。分别采用单因素方差分析、t检验对数据进行统计处理,以P＜0.05作为差异有统计学意义的标准。[结果]1.艾灸对大鼠行为学的影响:（1）一般情况:正常组大鼠神态自然,四肢灵活,行动敏捷,皮毛光滑整洁,眼睛透亮有神。模型组大鼠神情倦怠,反应迟缓,眼睛呆滞无神、毛发粗糙并有少许脱落。艾灸组大鼠精神状态较好,活动自如,毛发略粗糙但尚有光泽,提示艾灸对运动性疲劳模型大鼠有良好的整体改善作用。（2）体重:造模第1天,各组大鼠之间体重差异无统计学意义（P＞0.05）。造模第7天、14天和第21天,模型组大鼠体重较正常组显著下降（均P＜0.05）;与模型组比较,艾灸组大鼠体重有增加趋势,但差异无统计学意义（均P＞0.05）。（3）力竭游泳时间:造模第1天和第7天,模型组与艾灸组比较,两组大鼠力竭游泳时间差异无统计学意义（P＞0.05）;造模第14天和第21天,艾灸组大鼠力竭游泳时间较模型组显著延长（P＜0.05,P＞＜0.01）。（4）旷场实验:各组大鼠之间旷场实验水平及垂直移动距离差异无统计学意义（P＞0.05）。2.艾灸对大鼠血清、腓肠肌及额叶皮层il-6含量的影响:与正常组比较,模型组血清、腓肠肌、额叶皮层il-6含量显著升高（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01）;与模型组比较,艾灸组腓肠肌和额叶皮层il-6含量显著减少（均P＜0.05）,血清il-6含量有减少趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）。3.艾灸对大鼠血清、腓肠肌及额叶皮层il-10含量的影响:与正常组比较,模型组血清、腓肠肌、额叶皮层il-10含量显著减少（P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01）;与模型组比较,艾灸组血清和额叶皮层il-10含量显著升高（均P＜0.05）,腓肠肌il-10含量有上升趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）。4.艾灸对大鼠额叶皮层JAK2、p-JA

关键词：艾灸额叶皮层 IL-6/STAT3 小胶质细胞运动性疲劳

C/EBPβ在寻常型银屑病皮损中表达及对IL-6/STAT3信号通路影响的研究

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C/EBPβ在寻常型银屑病皮损中表达及对IL-6/STAT3信号通路影响的...

作者：柳莉丹安徽医科大学

学位级别：硕士

背景及目的:银屑病是一种多基因参与的红斑鳞屑性皮肤病,通过免疫介导最后引起角质形成细胞发生增殖的慢性炎症免疫性疾病,伴有遗传倾向,对其发病机制的研究依旧是皮肤科的研究热点。转录因子CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ),研究表明其... 详细信息

背景及目的:银屑病是一种多基因参与的红斑鳞屑性皮肤病,通过免疫介导最后引起角质形成细胞发生增殖的慢性炎症免疫性疾病,伴有遗传倾向,对其发病机制的研究依旧是皮肤科的研究热点。转录因子CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ),研究表明其与stat3均为被白介素-6(Interleukin-6,il-6)刺激后活化,继而从细胞表面转移到胞核参与基因的转录。C/EBPβ是受il-6刺激后被Ras依赖性MAP激酶级联磷酸化和激活,而stat3直接由与受体的细胞质部分相关的JAK激酶酪氨酸磷酸化,并转位至细胞核并激活转录(JAK-stat途径)[1]。C/EBPβ在小鼠和人表皮中高度表达,在维持皮肤角质形成细胞有序的分化过程中起着重要作用[2-4],而在银屑病异常增生和分化角质形成细胞中C/EBPβ如何表达,国内外尚未见明确的报道。本研究旨在:1.研究寻常型银屑病患者皮损中C/EBPβ的表达和分布情况,明确C/EBPβ是否参与银屑病皮损的形成;2.研究银屑病皮损中C/EBPβ蛋白与银屑病皮损面积炎症指数(PASI)的相关性,明确C/EBPβ与银屑病病情严重程度的关系;3.研究皮损中C/EBPβ与stat3、p stat3差异表达的相关性,探究C/EBPβ是否影响IL-6/STAT3信号通路。方法:1.临床样本研究:15例符合寻常型银屑病患者均为2016年6月至2017年1月我院皮肤科门诊病人,10例正常人为我院整形外科行整形手术者,收集银屑病患者皮损组织(实验组)和正常人皮肤组织(对照组)。2.探究C/EBPβ参与银屑病皮损形成的研究:选取实验组及对照组皮肤组织,通过免疫组织化学染色检测C/EBPβ、stat3、p stat3蛋白表达及分布;通过Westeron blot、PT-PCR法检测实验组及对照组皮肤组织中C/EBPβ蛋白、m RNA表达并分析其表达的差异性。3.C/EBPβ与银屑病病情严重程度的关系:通过Westeron blot检测实验组皮损组织中C/EBPβ蛋白表达,并分析其与银屑病面积和严重指数评分(PASI评分)的相关性。4.探究C/EBPβ是否影响信号通路IL-6/STAT3表达的研究:通过蛋白免疫印记试验检测银屑病皮损组织中C/EBPβ、p stat3蛋白表达,并分析C/EBPβ与p stat3蛋白表达的相关性。结果:1.一般资料:15例寻常型银屑病患者中,男9例女6例;年龄17-54岁,平均(35.867±12.949)岁;病程3月-10年,平均(6.75±6.28)年;PASI评分为2.4-18.8分。10例正常对照组,男5例,女5例;年龄20-40岁,平均(26.70±6.583)岁。寻常型银屑病患者与正常对照者在性别(X2=0.244,P>0.05)、年龄构成(P>0.05)上无统计学差异。2.免疫组化结果:在正常对照组中C/EBPβ丰富表达于表皮各层细胞的胞核,而寻常型银屑病皮损中C/EBPβ表达明显减少,表达细胞以棘层上部为主;银屑病皮损中stat3、p stat3广泛分布于表皮各层细胞胞核、核周及胞浆,而正常对照组表达明显较少;3.Westeron blot、PT-PCR结果:银屑病患者皮损中C/EBPβ蛋白(0.843±0.41)、m RNA(0.479±0.307)表达水平较正常对照组C/EBPβ蛋白(1.15±0.26)、m RNA(0.732±0.126)降低(Pstat3蛋白(0.28±0.065)表达水平较正常对照组p stat3蛋白(0.177±0.034)升高(P661,Pstat3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.629,Pstat3呈负相关,推测C/EBPβ可能影响IL-6/STAT3信号通路来参与银屑病的发病。

关键词：寻常型银屑病 C/EBPβ IL-6/STAT3

miRNA-26b靶向IL-6/STAT3信号通路诱导肝癌细胞自噬的实验研究

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临床肿瘤学杂志 2018年第7期23卷 593-597页

作者：夏婷胡衡朱群安熊勰解放军第九四医院肿瘤科南昌330001 南昌大学附属三三四医院放疗科 330024

目的探讨miRNA-26b(miR-26b)在肝癌细胞自噬调控中的作用及可能分子机制。方法采用荧光定量PCR(QPCR)检测人正常肝细胞系HL-7702和人肝癌细胞系Hep G2、Hep-3B、Bel-7402及SSMC-7721中miRNA-26b的表达情况。双荧光素酶基因报告实验评价m... 详细信息

目的探讨miRNA-26b(miR-26b)在肝癌细胞自噬调控中的作用及可能分子机制。方法采用荧光定量PCR(QPCR)检测人正常肝细胞系HL-7702和人肝癌细胞系Hep G2、Hep-3B、Bel-7402及SSMC-7721中miRNA-26b的表达情况。双荧光素酶基因报告实验评价miR-26b对il-6的靶向调控作用。向Hep G2细胞转染miR-26b模拟物mimics(转染组)和阴性对照NC(阴性对照组),Western blotting检测两组IL-6/STAT3信号通路以及自噬相关蛋白的表达。向Hep G2细胞转染il-6 siRNA1和il-6 siRNA2,Western blotting检测干扰il-6后stat3激活及自噬相关蛋白表达。结果 Hep G2、Hep-3B、Bel-7402细胞系中miR-26b表达水平分别为0.34±0.063、0.69±0.092、0.57±0.086,显著低于正常肝细胞系HL-7702的1.15±0.189,差异具有统计学意义(P6b可抑制野生型il-6 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型il-63’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。转染miR-26b mimics后il-6、p-stat3相对表达量显著降低(P3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(Pil-6导致p-stat3相对表达量显著降低(P3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(P6b靶向抑制IL-6/STAT3信号通路的激活,进而诱导肝癌细胞自噬发生。

关键词：肝细胞癌 miRNA-26b IL-6/STAT3 自噬

IL-6/STAT3信号通路参与调节胃癌中CD44v6的表达及其临床意义

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IL-6/STAT3信号通路参与调节胃癌中CD44v6的表达及其临床意义

作者：许媛媛南京大学

学位级别：硕士

背景和目的:CD44v6,作为肿瘤干细胞标记分子参与了人类多种肿瘤的发生、进展和转移。然而,在胃癌中有关CD44v6的研究较少,并且存在争议。因此,我们研究并分析了临床标本中CD44v6的表达及其临床意义,并且进一步探索CD44v6参与胃癌的分子... 详细信息

背景和目的:CD44v6,作为肿瘤干细胞标记分子参与了人类多种肿瘤的发生、进展和转移。然而,在胃癌中有关CD44v6的研究较少,并且存在争议。因此,我们研究并分析了临床标本中CD44v6的表达及其临床意义,并且进一步探索CD44v6参与胃癌的分子机制。方法:免疫组织化学的方法分别检测22例正常胃黏膜组织,41例癌前病变胃黏膜组织(低级别和高级别上皮内瘤变),23例胃早癌组织,80例进展期胃癌组织中CD44v6、p-stat3的表达情况,分析CD44v6、p-stat3的表达和患者临床病理因素、术后生存时间之间的关系;采用WesternBlot方法检测新鲜胃癌组织及癌旁组织中CD44v6、p-stat3表达水平。接下来,分别采用Western Blot、荧光定量PCR的方法检测正常胃细胞GES-1及胃癌细胞株MKN-45、N87、AGS、HGC-27中CD44v6的蛋白和mRNA的表达水平。CCK-8实验、集落形成实验检测细胞的增殖能力、Transwell chambers用于细胞的侵袭和转移实验,研究CD44v6在胃癌细胞中的功能。最后,通过stat3小干扰RNA,AG490,il-6处理HGC-27和AGS进一步研究相关机制。结果:CD44v6和p-stat3在胃癌组织中的表达均高于早癌、癌前及正常组织,具有统计学意义(p6与肿瘤的分化、淋巴结转移、TNM分期、生存预后存在相关性(p6参与了细胞的增殖。在胃癌细胞HGC-27、AGS中,CD44v6参与了胃癌的侵袭和转移。接下来,对CD44v6的表达机制探索研究,发现在蛋白水平上,il/6-stat3信号通路参与调节胃癌中CD44v6的表达。stat3小干扰作用胃癌细胞后,CD44v6的表达下降。即使在il-6存在时,stat3抑制剂AG490通过抑制stat3的活化从而下调CD44v6的表达。结论:CD44v6的表达随着慢性胃炎、癌前病变、早期癌变、胃癌这一发展过程大体呈现逐渐增高的趋势。高表达CD44v6的胃癌患者比低表达CD44v6的胃癌患者预后更差。CD44v6参与了胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。IL-6/STAT3信号通路诱导了 CD44v6的表达。靶向stat3介导的CD44v6的上调或许是治疗胃癌的新的有效的方法。

关键词：胃癌肿瘤干细胞 CD44v6 IL-6/STAT3

GPER 蛋白介导子宫内膜癌中IL-6/STAT3信号通路的激活

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GPER 蛋白介导子宫内膜癌中IL-6/STAT3信号通路的激活

作者：刘雪洁河北医科大学

学位级别：硕士

目的:子宫内膜癌是发生于子宫内的一种上皮性恶性肿瘤,为女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一。根据临床及病理观察结果将子宫内膜癌分为:Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型为雌激素依赖型癌,最常见的病理类型为子宫内膜样腺癌,这种类型大多数伴有前期... 详细信息

目的:子宫内膜癌是发生于子宫内的一种上皮性恶性肿瘤,为女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一。根据临床及病理观察结果将子宫内膜癌分为:Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型为雌激素依赖型癌,最常见的病理类型为子宫内膜样腺癌,这种类型大多数伴有前期子宫内膜增生和(或)子宫内膜上皮内瘤变,在持续单一雌激素刺激下产生。Ⅱ型为非激素依赖型癌,与临床雌激素刺激无关,主要源自萎缩或静止的子宫内膜,最常见的病理类型包括浆液性乳头状腺癌、透明细胞癌和癌肉瘤。Ⅱ型子宫内膜癌细胞异型性大,进展快,易出现深肌层浸润及淋巴结转移。关于Ⅱ型子宫内膜癌的信号传导通路是国内外研究热点,雌激素如何导致Ⅱ型子宫内膜癌的发生尚需深入研究。G蛋白偶联雌激素受体(G-protein coupled estrogen receptor,GPER)是一种膜结合的雌激素结合蛋白,其作用方式与经典的雌激素受体不同,主要通过介导雌激素作用活化其下游的快速非基因组信号通路(non-genomic signaling),其中包括MAPK/ERK、PI3K/AKT、c AMP、钙离子流动等发挥细胞生长、迁移、侵袭、血管形成等恶性生物学效应。由于能够与雌激素及其相关化合物结合介导快速非基因组效应,广泛参与调节身体各项生理活动,其结构、定位、相关信号转导通路以及与雌激素相关疾病的关系引起了研究者们的广泛关注。炎症微环境是肿瘤的重要特征之一,il-6(interleukin-6)最早是由Muraguch等命名为T细胞替代因子,既可由淋巴细胞(如T细胞、B细胞)分泌,也可由非淋巴细胞(如成纤维细胞、巨噬细胞等)分泌。许多抗原和非抗原性物质也可诱导、刺激il-6的分泌,如细菌内毒素、一些中药单体和细胞因子等。信号转导和转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,stat3)是一类双功能分子,既可以传导细胞信号,又可以激活基因转录。il-6激活其下游的stat3,诱导和维持肿瘤的炎症微环境,促进肿瘤的发生发展。研究表明,Ⅰ、Ⅱ型子宫内膜癌患者血清中的il-6均处于高水平,Ⅱ型子宫内膜癌高于Ⅰ型,提示IL-6/STAT3通路可能在Ⅱ型子宫内膜癌的基因调控中发挥重要作用。有研究证明了雌激素能够通过MAPK/ERK信号通路促进细胞中il-6的表达,故研究者推测,子宫内膜癌中可能存在GPER蛋白对IL-6/STAT3炎症信号通路的调控作用。本研究选用雌激素受体阳性表达的子宫内膜癌Ishikawa细胞、雌激素受体低表达的HEC-1A细胞、雌激素受体阴性的KLE细胞为研究对象,在体外试验中用17-β雌二醇(E2)、GPER特异性激动剂(G1)、GPER特异性拮抗剂(G15)处理细胞,检测其细胞培养上清中il-6含量及GPER、P-ERK、P-stat3的蛋白表达水平,从而探讨GPER蛋白对IL-6/STAT3信号通路的调控及该调控通路在子宫内膜癌发生发展的作用及可能的机制。方法:1细胞培育:人子宫内膜癌细胞株Ishikawa,以含有10%新生牛血清的1640培养基培养;HEC-1A、KLE细胞株,以含有10%新生牛血清的Mc Coys 5A培养基培养。两种培养基中各加浓度为100U/ml的青霉素及链霉素的双抗,培养于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱内。以0.25%胰蛋白酶消化传代,细胞呈单层贴壁生长。2 ELISA法检测细胞上清中il-6的分泌量。待培养瓶中细胞生长至80%0%后,更换无牛血清培养基培养24h,分别用E2、G1及G15处理Ishikawa、HEC-1A、KLE三种细胞24h,调整终浓度达10-6mol/L,各组DMSO量至一致,最后得到对照组、E2处理组、G1处理组、E2+G15处理组、G1+G15处理组。收集细胞上清液,保存于-80℃冰箱,按ELISA试剂盒操作说明书检测样本。实验重复3次。3 Western Blot方法检测17-β雌二醇(E2)、GPER特异性激动剂(G1)、GPER特异性拮抗剂(G15)作用下的三种子宫内膜癌细胞中GPER、P-ERK、P-stat3的蛋白表达。结果:1 E2及GPER特异性激动剂G1通过活化膜性雌激素受体GPER促进Ishikawa、HEC-1A、KLE细胞表达il-6。ELISA法检测E2及G1对三种细胞上清液中il-6的促分泌作用。结果显示,药物处理24h后,Ishikawa细胞中,E2及G1均促进了细胞上清中il-6的分泌量,其中E2作用较G1显著(Pil-6的分泌量,其中G1作用较E2显著(Pil-6的表达。2 GPER特异性拮抗剂G15对子Ishikawa、HEC-1A、KLE细胞中il-6的抑制作用。ELISA结果显示E2+G15组、G

关键词：子宫内膜癌雌激素 GPER P-ERK IL-6/STAT3 G1 G15