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il-34在胃腺癌中过表达并通过调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路影响胃腺癌细胞的增殖和凋亡

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IL-34在胃腺癌中过表达并通过调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路影响胃...

作者：麻丛丛承德医学院

学位级别：硕士

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,发病率、死亡率居高不下。胃癌常因早期症状不明显被患者忽视,当出现明显症状就诊时往往已处于中晚期,给胃癌的临床治疗增加难度。胃癌的发生发展是一个涉及多种调控机制的复杂过程,与细胞增殖和细胞凋亡密... 详细信息

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,发病率、死亡率居高不下。胃癌常因早期症状不明显被患者忽视,当出现明显症状就诊时往往已处于中晚期,给胃癌的临床治疗增加难度。胃癌的发生发展是一个涉及多种调控机制的复杂过程,与细胞增殖和细胞凋亡密切相关。细胞增殖过多和细胞凋亡减少会导致癌细胞生长失控,最终导致肿瘤的发生与发展。胃腺癌是胃癌最常见的病理类型,对胃癌的研究主要围绕胃腺癌展开。白介素-34(Interleukin 34,il-34)是白介素家族的重要促炎细胞因子,不仅与动脉粥样硬化、类风湿关节炎、肝纤维化等慢性炎症疾病密切相关,且与肿瘤的发生、发展联系密切。在胃腺癌中只有周红菊等人研究过il-34在患者血清中呈高表达,而il-34在胃腺癌组织和细胞株中的表达以及对细胞增殖和细胞凋亡的影响尚属未知,作用机制也还未明确。因此本研究采用免疫组化SP法、Western blot、RT-q PCR检测il-34在胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中的表达;并采用TDT-介导的d UTP缺口末端标记技术(TUNEL法)检测胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中细胞凋亡情况。采用Western blot检测il-34在人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1和胃腺癌细胞株MGC-803、SGC-7901、BGC-823、AGS中的蛋白表达,选取蛋白表达量最高的MGC-803和AGS细胞进行后续细胞实验。采用Western blot和RT-q PCR实验验证si-il-34在胃腺癌细胞中的转染效率;CCK8、平板集落形成实验和流式细胞术检测il-34对胃腺癌细胞增殖的影响;Hoechst33342染色、TUNEL染色以及流式细胞术检测il-34对胃腺癌细胞凋亡的影响;Western blot检测胃腺癌细胞中il-34对细胞周期蛋白、细胞凋亡蛋白及PI3K/AKT/NF-κB信号通路关键蛋白的调控。目的:研究il-34在胃腺癌组织中的表达情况及其与胃腺癌组织中细胞凋亡的关系并探讨il-34在胃腺癌细胞株中的表达,阐明il-34可能通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路影响胃腺癌细胞增殖和凋亡,为胃腺癌的临床诊断及分子靶向治疗提供新思路。方法:组织水平:收集经手术切除的人胃腺癌组织标本60例,癌旁正常胃黏膜组织标本50例,采取免疫组化SP法测定il-34的蛋白表达情况;选择TUNEL法检测60例胃腺癌组织和50例癌旁正常胃黏膜组织中的细胞凋亡情况,并分析胃腺癌中il-34蛋白表达与胃腺癌细胞凋亡的关系。另外收集10例新鲜胃腺癌组织标本和10例配对的癌旁正常胃黏膜组织标本,采用Western blot检测il-34的蛋白表达;采用RT-q PCR检测il-34的m RNA表达。细胞水平:采用Western blot检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1和胃腺癌细胞株MGC-803、SGC-7901、BGC-823和AGS中il-34的蛋白表达,选择蛋白表达量最高的两株细胞MGC-803和AGS进行后续实验。化学合成靶向il-34的2条si RNA序列(si-il-34-1、si-il-34-2)作为两个实验组,一段阴性核苷酸序列(si-NC)作为对照组,将三组分别转染胃腺癌MGC-803和AGS细胞:Western blot和RT-q PCR实验验证si-il-34在胃腺癌MGC-803和AGS细胞中的转染效率;CCK8和平板集落形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;Hoechst33342染色、TUNEL染色以及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9以及PI3K/AKT/NF-κB信号通路关键蛋白p110α、p85α、p-AKT、AKT、p-NF-κB p65和NF-κB p65的蛋白表达水平。结果:1组织水平实验结果:1.1免疫组化SP实验结果:il-34蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常胃黏膜组织(P0.05)。1.2 TUNEL实验显示:同癌旁正常胃黏膜组对比,胃腺癌组细胞凋亡指数(AI)明显降低(P0.05);1.3分析il-34蛋白表达与AI表达的关系:胃腺癌中il-34阳性表达组AI低于il-34阴性表达组AI,差异有统计学意义(Pil-34的蛋白表达与AI的表达呈负相关关系r=-0.31(P<0.05)。1

关键词：胃腺癌 il-34 细胞增殖细胞凋亡 PI3K/AKT/NF-κB信号通路

il-34在食管鳞癌中的预后价值及其生物学功能研究

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IL-34在食管鳞癌中的预后价值及其生物学功能研究

作者：张家乐华南理工大学

学位级别：硕士

背景与目的:食管癌(Esophageal Cancer,EC)是严重威胁人类健康的常见消化道肿瘤之一,在恶性肿瘤中发病率和死亡率排名分别位于第七位和第六位。食管鳞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)是食管癌最主要的组织类型。尽管手术... 详细信息

背景与目的:食管癌(Esophageal Cancer,EC)是严重威胁人类健康的常见消化道肿瘤之一,在恶性肿瘤中发病率和死亡率排名分别位于第七位和第六位。食管鳞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)是食管癌最主要的组织类型。尽管手术、放化疗、免疫治疗等联合手段在一定程度上改善了食管鳞癌患者的预后,但其五年生存率仍然很低。因此,发现更加有效的分子标志物对食管鳞癌的防治至关重要。白介素-34(Interleukin-34,il-34)是2008年新发现的一种细胞因子,在调节细胞增殖与分化、炎症、免疫等方面都发挥着重要作用。研究表明,il-34表达水平与多个肿瘤的预后相关,并且能够促进癌症进展。因此,本研究首先明确il-34在食管鳞癌组织和细胞中的表达情况,以及其与临床病理特征和患者生存预后之间的关系。其次,本研究将对il-34在食管鳞癌中的生物学功能及其分子机制进行初步探索。实验方法:1.采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR和免疫印迹实验分别检测il-34在食管鳞癌组织和细胞中的表达情况。2.对食管鳞癌组织芯片进行免疫组织化学染色,通过卡方检验、Kaplan-Meier分析和Cox回归模型来分析il-34的表达与食管鳞癌患者的临床病理特征及预后关系。3.通过慢病毒感染构建il-34稳定过表达食管鳞癌细胞株,采用Celigo细胞计数、CCK-8、克隆形成、划痕实验、transwell和流式细胞术来检测ECA-109和TE-1食管鳞癌细胞系在体外的增殖、迁移、侵袭及凋亡的变化情况。4.通过Western blot检测食管鳞癌细胞上皮-间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin,细胞周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1以及凋亡相关蛋白Bcl-2的变化。实验结果:1.相较于食管正常组织和细胞,食管鳞癌组织和细胞中的il-34高表达,并且其表达水平在化疗药物的刺激下进一步升高。2.卡方检验显示,il-34表达水平与食管鳞癌患者T分期、N分期和TNM分期呈正相关,而与年龄、性别和肿瘤位置无关。Kaplan-Meier分析显示,il-34高表达预示着食管鳞癌更短的总生存时间。Cox回归模型显示,il-34可以作为食管鳞癌患者预后的独立风险因子。3.体外功能实验显示,当il-34表达水平升高时,食管鳞癌细胞系ECA-109和TE-1的增殖、侵袭及迁移能力增强,而在相同浓度顺铂刺激下,凋亡率降低。4.过表达il-34后,食管鳞癌细胞系ECA-109和TE-1中上皮标志物E-cadherin表达降低,间质标志物N-cadherin和Vimentin,细胞周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1,抗凋亡相关分子Bcl-2表达上调。结论:il-34在食管鳞癌中高表达。il-34的高表达与患者临床病理特征以及生存时间相关,这提示il-34可能是食管鳞癌的潜在预后分子标志物。同时,il-34能够调控食管鳞癌的生物学功能,提示其可能成为治疗食管鳞癌的潜在靶点。

关键词：食管鳞癌 il-34 预后细胞侵袭增殖

阿尔茨海默病患者外周血il-34与Aβ42、P-tau181水平相关性研究

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阿尔茨海默病患者外周血IL-34与Aβ42、P-tau181水平相关性研究

作者：王朔大连医科大学

学位级别：硕士

目的:研究不同痴呆程度的阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者及健康对照组(NC)外周血中白介素34(Interleukin 34,il-34)、Aβ42(Amyloid-β42,Aβ42)、P-tau181(Phosphorylated microtubule-related protein Tau 181,P-tau181)水平,探讨阿尔茨海默病患者外周血中il-34与Aβ42、P-tau181水平的相关性。方法:本研究采用病例对照研究,选取2021年12月至2023年01月就诊于我院神经内科且符合2011年NIA-AA阿尔茨海默病诊断标准的患者:轻度AD24例、中度AD24例、重度AD24例,选取在我院就诊的认知能力正常的老年人33例作为正常对照组(NC)。所有受试者均进行神经心理评估,采用汉密尔顿焦虑/抑郁量表排除焦虑抑郁患者;简易精神状态评定量表(Mini-Mental State Examination,MMSE)和蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment Scale,Mo CA)评估受试者认知功能;临床痴呆评定量表(Clinical Dementia Rating Scale,CDR)判断痴呆严重程度;头颅3.0T核磁共振评估内侧颞叶萎缩程度(Medial temporal lobe atrophy,MTA);采集受试者空腹8-12小时后肘部静脉血,应用酶联免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆中il-34、Aβ42和P-Tau181水平。采用SPSS26.0软件进行数据统计分析,Spearman相关性分析血浆il-34与Aβ42、P-Tau181水平相关性。结果:1.轻度、中度阿尔茨海默病患者两组血浆Aβ42水平逐渐升高,重度阿尔茨海默病患者血浆中Aβ42水平下降,但是均高于正常对照组受试者血浆水平,除轻度与重度阿尔茨海默病患者血浆中Aβ42水平组间差异性没有统计学意义,其余各组间Aβ42水平差异性均存在统计学意义(pil-34水平随着认知能力下降逐渐下降,除中度、重度阿尔茨海默病患者血浆中il-34水平组间差异性没有统计学意义,其余各组间il-34水平差异性均存在统计学意义(pil-34和Aβ42、P-Tau181水平均具有相关性,且存在统计学意义(pil-34与Aβ42、P-tau181呈负相关。5.Aβ42、P-tau181单项指标及二者联合预测阿尔茨海默病的价值,P-tau181的曲线下面积大于Aβ42曲线下面积,Aβ42和P-tau181联合预测阿尔茨海默病的曲线面积大于单指标预测的面积,Aβ42和P-tau181联合预测阿尔茨海默病的价值最大。结论1.阿尔茨海默病患者血浆中Aβ42水平在阿尔茨海默病发展中于早期、中期呈上升趋势晚期下降,P-tau181水平随着认知障碍的加重逐渐升高,il-34水平则随着认知障碍的加重呈逐渐下降趋势。2.血浆il-34、Aβ42、P-Tau181水平与阿尔茨海默病患者的认知能力下降具有相关性。***患者血浆il-34水平与Aβ42、P-tau181水平具有相关性。

关键词：阿尔茨海默病血浆 il-34 Aβ42 P-Tau181

DDIT4 mediates the proliferation-promotive effect of il-34 in human monocytic leukemia cells

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Blood Science 2021年第2期3卷 48-56页

作者： Xiaoqian Lv Yuting Hu Lina Wang Dongyue Zhang Hao Wang Yibo Dai Xiaoxi Cui Guoguang Zheng State Key Laboratory of Experimental Hematology National Clinical Research Center for Blood DiseasesInstitute of Hematology&Blood Diseases HospitalChinese Academy of Medical Sciences&Peking Union Medical College288 Nanjing RoadTianjin 300020China

Interleukin 34(il-34)is a cytokine that shares the receptor with colony-stimulating factor 1(CSF-1).il-34 is involved in a broad range of pathologic processes including *** previously demonstrated that il-34 promoted the proliferation and colony formation of human acute monocytic leukemia(AMoL)***,the mechanism has not been ***,by analyzing the gene profiles of Molm13 and THP1 cells overexpressing il-34(Molm13-il-34 and THP1-il-34),upregulation of the DNA damageinducible transcript 4(DDIT4)was detected in both *** of DDIT4 effectively inhibited the proliferation,promoted apoptosis and colony formation in Molm13-il-34 and THP1-il-34 *** results suggest that DDIT4 mediates the proliferationpromotive effect of il-34 whereas does not mediate the promotive effect of il-34 on colony formation in AMoL cells.

关键词： il-34 DDIT4 Monocytic leukemia Proliferation

维生素D受体激动剂帕立骨化醇通过上调大鼠脊髓背角il-34改善开胸术后慢性疼痛

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维生素D受体激动剂帕立骨化醇通过上调大鼠脊髓背角IL-34改善开胸...

作者：杨廷舜中南大学

学位级别：硕士

目的:探讨维生素D受体激动剂帕立骨化醇在大鼠开胸术后慢性疼痛中的作用及脊髓机制。方法:实验分为两个阶段。第一阶段,探讨帕立骨化醇是否能缓解慢性开胸术后疼痛(Chronic pain after thoracotomy,CPTP)。将雄性SD大鼠随机分为4组,Sha... 详细信息

目的:探讨维生素D受体激动剂帕立骨化醇在大鼠开胸术后慢性疼痛中的作用及脊髓机制。方法:实验分为两个阶段。第一阶段,探讨帕立骨化醇是否能缓解慢性开胸术后疼痛(Chronic pain after thoracotomy,CPTP)。将雄性SD大鼠随机分为4组,Sham组仅切开皮肤及胸膜,Sham+Pari组切开皮肤及胸膜+腹腔内注射帕立骨化醇,Surgery组行开胸手术并牵拉肋骨,Surgery+Pari组行开胸手术牵拉肋骨+腹腔内注射帕立骨化醇。第二阶段,为确定帕立骨化醇是否通过上调白细胞介素34(Interleukin-34,il-34)的表达改善CPTP,将雄性SD大鼠随机分为4组,Sham组仅切开皮肤和胸膜,Surgery组开胸并肋骨拉伸,Surgery+Vehicle组开胸并肋骨牵张+术前2周鞘内注射AAV-GFP对照病毒,Surgery+il34组开胸并肋骨牵张+术前2周鞘内注射AAV-il-34-GFP病毒。机械痛和冷痛试验用于评估大鼠的疼痛程度。RT-PCR和WB检测大鼠脊髓背角维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)表达情况,荧光染色定位大鼠脊髓背角VDR表达细胞。RT-PCR检测il-34、TNF-α、il-1β、M1小胶质细胞标志物CD86和M2小胶质细胞标志物CD206的表达情况,免疫荧光判断小胶质细胞的活化情况。Ch IP-PCR检测VDR转录因子在il-34基因启动子区的富集量。结果:1.机械痛阈和冷痛阈结果:术后1天各组均出现急性疼痛,术后第3天Sham组和Sham+Pari组的急性疼痛基本恢复至术前水平;术后第14天及第28天,Surgery组和Surgery+Pari组痛阈均明显低于Sham组和Sham+Pari组(Pil-1β和M1型小胶质细胞标记物CD86水平显著增高(Pil-34、M2型小胶质细胞标记物CD206水平以及CD206/CD86比值相较于Sham组降低(Pil-34启动子区域的结合位点,行Ch IP-PCR检测VDR在il-34基因启动子区的富集量,发现VDR能够直接调控il-34基因的表达,且Surgery+Pari组VDR的富集量相比于Surgery组明显增高(Pil-34过表达腺相关病毒,发现与Surgery组相比,过表达il-34能明显减轻大鼠开胸术后慢性疼痛(Pil34组炎症因子TNF-α、il-1β和M1型小胶质细胞标记物CD86水平较Surgery组及Surgery+Vehicle组明显降低(Pil34组M2型小胶质细胞标记物CD206水平以及CD206/CD86比值增高(Pil-34,抑制脊髓背角神经炎症,从而改善大鼠开胸术后慢性疼痛。图11幅,表1个,参考文献50篇

关键词：胸科手术术后慢性疼痛脊髓背角维生素D受体神经炎症小胶质细胞 il-34

il-34基因敲除对小鼠肠黏膜通透性的影响

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国际消化病杂志 2022年第2期42卷 120-125页

作者：丁琴李文文刘渊上海交通大学附属第六人民医院消化内科 200233

目的探究il-34基因敲除对小鼠肠黏膜通透性的影响及相关机制。方法选取20只6周龄SPF级雄性C57BL/6野生型(WT)小鼠作为研究对象,采用随机数表法分为WT组(WT小鼠)和KO组(il-34^(-/-)小鼠),每组10只。通过连续称量记录14周两组的体质量,观... 详细信息

目的探究il-34基因敲除对小鼠肠黏膜通透性的影响及相关机制。方法选取20只6周龄SPF级雄性C57BL/6野生型(WT)小鼠作为研究对象,采用随机数表法分为WT组(WT小鼠)和KO组(il-34^(-/-)小鼠),每组10只。通过连续称量记录14周两组的体质量,观察il-34基因敲除对小鼠体质量的影响。采用H-E染色法观察两组小鼠结肠的病理改变。采用免疫组织化学染色法、实时荧光定量PCR(real-time qPCR)法检测两组小鼠结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达。利用异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)评估il-34基因敲除后对小鼠肠黏膜通透性的影响。在Caco-2细胞(人结直肠腺癌细胞)中观察il-34对ZO-1和Occludin表达的影响。结果KO组与WT组在14周内体质量的变化情况差异无统计学意义。H-E染色结果显示,WT组和KO组的结肠均无明显损伤表现。免疫组织化学染色结果显示,与WT组比较,KO组结肠组织中ZO-1和Occludin的表达水平均较低(P均il-34可上调Caco-2细胞中ZO-1和Occludin的表达。结论il-34基因敲除可增高结肠黏膜的通透性,这可能是通过调控结肠组织中ZO-1和Occludin的表达实现的。

关键词： il-34 黏膜通透性紧密连接蛋白

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il-34与2型糖尿病疾病活动的相关性研究

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第11期 35-37页

作者：徐芳泰州市人民医院检验科江苏泰州225300

初步探讨il-34与2型糖尿病的相关性。方法分别检测2型糖尿病实验组(DM组)和对照组(NGT组)的il-34、il-6、il-12以及糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(Chol),统计分析比较两组间的差异性,统计分析il-34与其他相关指标的相... 详细信息

初步探讨il-34与2型糖尿病的相关性。方法分别检测2型糖尿病实验组(DM组)和对照组(NGT组)的il-34、il-6、il-12以及糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(Chol),统计分析比较两组间的差异性,统计分析il-34与其他相关指标的相关性。结果实验组il-34高于对照组,差异有统计学意义(Pil-6、il-12无统计学差异(P>0.05);il-34与HbA1c(r=0.448,Pil-34与2型糖尿病有相关性。

关键词： il-34 糖尿病 il-6 il-12

il-34对Th17细胞及其细胞因子在慢性鼻-鼻窦炎调节机制中的研究前景

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中国医学文摘（耳鼻咽喉科学） 2023年第2期38卷 124-126页

作者：范卫华杨琳红佳木斯大学附属第一医院黑龙江佳木斯154000

慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)是一种慢性炎症性疾病,由多种炎性细胞参与,其病程大于12周,主要临床表现为黏性或黏脓性鼻涕、鼻塞、头痛、嗅觉丧失或减退,使得患者的生活质量受到了很大的变化。目前临床上一般将CRS分为慢... 详细信息

慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)是一种慢性炎症性疾病,由多种炎性细胞参与,其病程大于12周,主要临床表现为黏性或黏脓性鼻涕、鼻塞、头痛、嗅觉丧失或减退,使得患者的生活质量受到了很大的变化。目前临床上一般将CRS分为慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)和慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP)。在炎症反应过程中,辅助性T淋巴细胞(Th)类细胞因子是最主要的一类细胞因子,Th细胞及其所产生的细胞因子在其炎症的发展过程中都起到了关键性的作用。CRS的发病机制目前为止还未完全阐释清楚,本文将对il-34(interleukin-34,il-34)、Th17细胞极其相关细胞因子在慢性鼻-鼻窦炎发病机制中的研究前景做一综述。

关键词：慢性鼻-鼻窦炎 il-34 il-6 Th17

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慢性阻塞性肺疾病患者血清il-34水平变化与肺功能的相关性

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中国实验诊断学 2022年第11期26卷 1673-1676页

作者：李永强石志鹏黄冬薇王雪妮胡亚惠吴玉婷南部战区总医院呼吸与危重症医学科广东广州510010

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清il-34水平变化与患者肺功能的关系。方法选取2018年1月至2019年12月南部战区总医院收治的COPD患者106例,分为COPD急性加重组(57例)和COPD稳定组(49例)。另选取体检健康者50例纳入对照组。采集血... 详细信息

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清il-34水平变化与患者肺功能的关系。方法选取2018年1月至2019年12月南部战区总医院收治的COPD患者106例,分为COPD急性加重组(57例)和COPD稳定组(49例)。另选取体检健康者50例纳入对照组。采集血清样本,分别检测3组血清样本中il-34的表达及肺炎衣原体特异性IgG、IgM、IgA抗体滴度,同步测定COPD患者肺功能,分析il-34表达变化及其与COPD患者肺功能的关系。结果与COPD稳定组及对照组相比,COPD急性加重组血清il-34水平显著升高(Pil-34表达与COPD患者FEV1%pred、FEV1/FVC及MMEF%pred呈负相关(Pil-34诊断COPD急性加重组的曲线下面积为0.841(95%CI:0.753-0.982),诊断敏感度为92.07%,特异度为85.63%;il-34诊断COPD稳定组的曲线下面积为0.769(95%CI:0.685-0.935),诊断敏感度为88.73%,特异度为79.45%。结论il-34在COPD患者血清中表达上调,且其表达水平与COPD患者肺功能相关,可能是COPD临床诊断及病情严重程度评估的新指标。

关键词：慢性阻塞性肺疾病 il-34 肺功能

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