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过敏原对过敏性鼻炎患者外周血CD4^(+)Th17细胞il-18、il-18结合蛋白a和il-18受体α表达水平的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第1期44卷 50-57页

作者：王君灵湛萌萌杜恩明王思勤何韶衡郑州大学人民医院/河南省人民医院过敏反应科郑州450003 锦州医科大学附属第一医院变态反应与临床免疫研究中心锦州121001 河南省人民医院/河南省立眼科医院郑州450003

目的分析过敏性鼻炎(allergic rhinitis,Ar)患者外周血CD4^(+)Th17细胞中il-18、il-18结合蛋白a(il-18-binding protein a,il-18BPa)和il-18受体α(il-18 receptorα,il-18rα)的表达水平及过敏原对其表达的影响。方法选择2019年10月—2020年9月锦州医科大学附属第一医院过敏反应科门诊Ar患者45例和该医院体检中心体检者23例(健康对照组)为研究对象。根据皮肤点刺试验结果,将患者分为阳性组(Ar组,24例)和阴性组(nAr组,21例)。收集受试者血液样本,流式细胞术检测过敏原对CD4^(+)Th17细胞中il-18、il-18BPa和il-18rα蛋白质表达水平的影响。Bioplex检测血浆中il-17A水平,并分析其与il-18^(+)Th17细胞比例的相关性。结果与健康对照组比较,Ar组患者CD4^(+)Th17细胞和il-18^(+)Th17细胞比例均增加(Pil-18BPa+Th17细胞比例降低(Pil-18BPa的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)增加(Pil-18rα的MFI降低(Pr组患者CD4^(+)Th17细胞il-18BPa的MFI增加(Pil-18rα的MFI降低(Pr组患者比较,Ar组患者il-18^(+)Th17细胞比例(Pil-18rα的MFI均增加(Pr组患者il-18^(+)Th17和il-18BPa+Th17细胞比例增加(Pil-18和il-18rα(Pr组患者血浆il-17A水平升高(Pil-18^(+)Th17细胞比例中度相关(Pil-18和il-18rα参与Ar发病。

关键词：过敏性鼻炎 CD4^(+)Th17细胞 il-18 il-18rα 过敏原

原发免疫性血小板减少症(ITP)患者外周il-37的水平变化及其与T亚群、NK细胞的相关性研究

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中国实验血液学杂志 2019年第4期27卷 1201-1207页

作者：陈珍瞿文王化泉邢莉民吴玉红刘召云张洋刘惠董喜凤陶景莲邵宗鸿天津医科大学总医院血液科

目的:分析ITP患者外周血il-37表达水平变化及其与T亚群、NK细胞数的相关性,探讨其参与疾病发病的可能机制。方法:选取初诊组ITP患者45例,完全缓解组ITP患者32例及正常对照组22例。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定3组外周血血清中il-3... 详细信息

目的:分析ITP患者外周血il-37表达水平变化及其与T亚群、NK细胞数的相关性,探讨其参与疾病发病的可能机制。方法:选取初诊组ITP患者45例,完全缓解组ITP患者32例及正常对照组22例。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定3组外周血血清中il-37水平,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCr)测定3组外周单个核细胞内il-37、il-18、il-17mrNA相对表达水平,采用流式细胞术(FCM)检测3组il-18rα^+CD4^+T细胞比例,2组Tim-3+NK细胞比例。结果:初诊组ITP患者血清il-37水平高于缓解组患者及正常对照组(Pil-37mrNA表达水平高于缓解组及正常对照组(Pil-37mrNA表达水平高于正常对照组(Pil-18、il-17mrNA表达水平均明显高于缓解组及正常对照组(Pil-18rα^+CD4^+T细胞比例比缓解组和对照组增高,且差异具有统计学意义。初诊组的Tim-3+NK细胞比例比对照组低,且差异具有统计学意义(Pil-37水平和il-18rα^+CD4^+T细胞比例均与血小板数量呈负相关(r=-0.58;r=-0.48),与CD4^+T细胞数、NK细胞数呈负相关(r=-0.29;r=-0.28),与CD8+T细胞量呈正相关(r=0.329)。结论:il-37及其受体可能在ITP患者的CD4+T细胞和NK细胞发挥免疫调节作用,il-37可以成为免疫性血小板患者的治疗靶标。

关键词：原发免疫性血小板减少症 il-37 il-18 il-18rα NK细胞

il-18和il-18BP在骨髓增生异常综合征患者中的表达及意义研究

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IL-18和IL-18BP在骨髓增生异常综合征患者中的表达及意义研究

作者：冉柠源天津医科大学

学位级别：硕士

背景及目的:骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndrome,MDS)是由造血干细胞恶性克隆引起的血液系统疾病,其主要特点为外周血细胞一系或多系减少、骨髓无效或病态造血,可转化为急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia,AML)。目前MDS... 详细信息

背景及目的:骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndrome,MDS)是由造血干细胞恶性克隆引起的血液系统疾病,其主要特点为外周血细胞一系或多系减少、骨髓无效或病态造血,可转化为急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia,AML)。目前MDS发病机制尚不明确,但发现免疫因素在MDS发生发展中起着至关重要的作用。本研究通过检测MDS患者骨髓上清白介素18(Interleukin-18,il-18)、白介素 18 结合蛋白(Interleukin-18 Binding Protien,il-18BP)的水平及 CD8+T 细胞和 NK 细胞上白介素 18 受体α(Interleukin-18 receptor α,il-18rα)的表达水平及其功能因子的分泌,并与健康对照者和AML患者进行比较,探讨il-18和il-18BP在MDS发生、发展及预后中的作用,旨在为MDS的免疫治疗提供新的思路。实验方法:收集来自2020年7月至2021年3月天津医科大学总医院血液科收治的MDS患者、AML患者及健康对照志愿者。第一部分:应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA法)分别测定43例MDS患者骨髓上清中il-18、il-18BP的表达水平,并与14例AML患者和16例健康对照者进行比较。进一步分析MDS患者骨髓上清中il-18及il-18BP与染色体核型、原始细胞数量、IPSS评分、IPSS-r评分及WPSS评分的相关性,探讨il-18和il-18BP在MDS患者疾病严重程度中的价值。第二部分:应用流式细胞术检测22例MDS患者骨髓CD8+T细胞和NK细胞含量及其表面il-18rα的表达、CD8+T细胞及NK细胞的功能及CD8+T细胞表面免疫检查点的表达水平,并与13例AML患者和25例健康对照者进行比较。进一步分析il-18和il-18BP与CD8+T细胞和NK细胞功能及CD8+T细胞表面免疫检查点的相关性,判断il-18及il-18BP与MDS患者免疫状态的相关性。实验结果:第一部分:(1)il-18在MDS患者和AML患者的表达水平均显著高于健康对照者(211.30±23.97 vs 84.97±16.20)pg/ml(Pil-18BP在MDS患者和AML患者的表达水平均显著高于健康对照者(33148.86±1850.46 vs 21795.97±1964.44)pg/ml(Pil-18在 MDS 患者显著高于健康对照者(38.40±3.95 vs 22.84±4.66)pg/ml(Pil-18与il-18BP呈显著正相关(r=0.38,P=0.012),il-18 与游离 il-18 呈正相关(r=0.82,Pil-18BP 与游离 il-18 呈负相关(r=-0.42,P=0.008)。(3)MDS患者相对低危组il-18的表达水平显著高于相对高危组(260.17±38.00 vs 172.62±28.95)pg/ml(Pil-18 的表达水平显著高于相对高危组(49.29±6.79 vs 29.78±3.88)pg/ml(Pil-18水平与骨髓原始细胞(r=-0.35,P=0.028)、IPSS 评分(r=-0.36,P=0.018)、IPSS-r评分(r=-0.37,P=0.016)及WPSS评分(r=-0.31,P=0.042)呈明显负相关。游离il-18 水平与骨髓原始细胞(r=-0.33,P=0.045)、IPSS 评分(r=-0.35,P=0.022)、IPSS-r 评分(r=-0.37,P=0.014)及 WPSS 评分(r=-0.32,P=0.04)呈明显负相关。第二部分:(1)MDS患者和AML患者骨髓CD8+T/Lym%显著低于健康对照者(7.89±1.01 vs 11.39±0.93)%(Pil-18rα表达水平低于健康对照者(57.44±3.28 vs 69.32±3.00)%(P<0.01)、(56.67±3.74 vs 69.32±3.00)%(P<0.05),但 MDS 患者和AML患者之间无明显差异

关键词：骨髓增生异常综合征游离免疫检查点 il-18 il-18BP il-18rα

il18rα在雌性山羊肠系膜后神经节和腰段背根节的表达

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IL18Rα在雌性山羊肠系膜后神经节和腰段背根节的表达

作者：王红梅西北农林科技大学

学位级别：硕士

免疫是机体识别和排除抗原性异物的一种重要功能,而作为孕育新生命的雌性生殖系统的局部免疫状态受到神经、内分泌等多种因素的调控。为了探究TH1型细胞因子是否通过交感神经和感觉神经这两种途径调节雌性生殖系统的生理状态,而这些细... 详细信息

免疫是机体识别和排除抗原性异物的一种重要功能,而作为孕育新生命的雌性生殖系统的局部免疫状态受到神经、内分泌等多种因素的调控。为了探究TH1型细胞因子是否通过交感神经和感觉神经这两种途径调节雌性生殖系统的生理状态,而这些细胞因子必须与其受体结合后才能发挥生物学活性。因此本实验采用分子生物学和蛋白组学的方法探究了il18rα在雌性山羊肠系膜后神经节和腰段背根节的表达及定位情况,证实了il18可以通过直接或间接的途径作用于内脏感觉传入和交感传出神经元,从而影响子宫的生殖生理活动,为研究雌性生殖系统的神经免疫调节提供形态学证据。本研究获得的主要试验结果如下:1.本研究充分利用分子生物学手段以牛、猪、人的il18rαcDNA序列为种子,首次从山羊腰段背根节和肠系膜后神经节中克隆出了447 bp的山羊il18rα基因部分cDNA序列,其中第5到第445个的核苷酸编码148个氨基酸。2.利用生物信息学软件将山羊il18rα部分基因序列和氨基酸序列与其他物种分别进行同源性比对,其中氨基酸的同源性比对后发现,该段氨基酸序列与牛、猪、人类等物种都有极高的相似度分别达到100%、90%、88%;基因序列的同源性比对结果显示,与牛、猪、人的il18rα的同源性分别到达91%、88%、87%。3.以克隆得到的il18rα部分基因为模板,进行体外反转录制备特异性的寡核苷酸探针。运用原位杂交技术检测了雌性山羊肠系膜后神经节和腰段背根节中il18rαmrNA的表达及定位,结果显示在肠系膜后神经节中的il18rαmrNA主要定位于神经元胞质、卫星细胞以及神经元间的组织细胞中;在腰段背根节中,il18rαmrNA在神经元核膜、神经元胞质、卫星细胞、神经胶质细胞和有髓神经纤维中均有表达。4.并且运用Western Blot和免疫组织化学SP法从蛋白水平验证了il18rα在雌性山羊肠系膜后神经节和腰段背根节中存在及定位。结果发现与其mrNA的表达定位基本保持一致,在肠系膜后神经节中il18rα主要存在于神经元胞质、卫星细胞、一些神经胶质细胞以及神经元间也存在一些阳性颗粒,在腰段背根节中il18rα在神经元核膜、神经元胞质、卫星细胞、神经胶质细胞和有髓神经纤维均呈现阳性表达,而在核仁为阴性。

关键词： il-18rα 肠系膜后神经节腰段背根节雌性山羊

ITP患者外周血il-37的水平变化及其与T亚群、NK细胞的相关性研究

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ITP患者外周血IL-37的水平变化及其与T亚群、NK细胞的相关性研究

作者：陈珍天津医科大学

学位级别：硕士

原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种以血小板过度破坏和(或)血小板生成减少为特点的自身免疫性性疾病。近年研究表明在ITP疾病致病过程中,细胞免疫功能异常占有重要位置,其中T细胞介导对血小板自身抗原免疫失耐受和NK数量缺乏、功能不足... 详细信息

原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种以血小板过度破坏和(或)血小板生成减少为特点的自身免疫性性疾病。近年研究表明在ITP疾病致病过程中,细胞免疫功能异常占有重要位置,其中T细胞介导对血小板自身抗原免疫失耐受和NK数量缺乏、功能不足是ITP发病的重要原因。相关学者研究指出CD4T淋巴细胞、CD8T淋巴细胞和NK细胞在ITP发生中起到一定作用。il-37是一种新型炎性抑制因子,在人类多种组织中都有表达,而在健康人的组织中表达较低,提示il-37在非炎症或轻度炎症中不起作用,其在严重的炎症时增加表达来抑制过度的免疫反应。随着对其研究的逐渐深入,发现il-37在多种自身免疫相关性疾病中起重要作用。最新研究在体外证明il-37可影响T淋巴细胞活化、增殖和NK功能。但现阶段临床有关ITP患者外周血il-37表达及水平变化与CD4T细胞、CD8T细胞和NK细胞关系的研究尚未涉及,本文研究观察了ITP患者外周血il-37的水平变化,并探讨了其与NK细胞及T亚群的相关性。目的:1.检测ITP患者外周血中il-37的含量;2.检测ITP患者外周单个核细胞的il-37、il-18、il-17mrNA表达量;3.检测ITP患者外周血CD4T细胞上il-18rα的表达量;4.检测ITP患者外周血NK细胞上Tim-3的表达量;5.探讨il-37、il-18、il-18rα参与疾病发病的可能机制。方法:选取初诊组ITP患者45例、完全缓解组ITP患者32例及正常对照组22例。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定3组外周血血清中il-37含量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCr)测定3组外周单个核细胞内il-37、il-10、il-17 mrNA相对表达水平。采用流式细胞术(FCM)检测3组il-18rαCD4T细胞比例,初诊组及对照组Tim-3NK细胞比例。结果:初诊组ITP患者血清il-37含量高于对照组ITP患者,差异具有统计学意义(311.9±248.6vs11.9±10.9;pil-37含量高于缓解组ITP患者,差异具有统计学意义(311.9±248.6vs30.4±20.4;pil-37含量高于对照组ITP患者,差异具有统计学意义(30.4±20.4vs11.9±10.9;pil-37mrNA、il-18mrNA、il-17mrNA相对表达量高于对照组及缓解组,差异具有统计学意义(pil-37mrNA、il-18mrNA、il-17mrNA相对表达量高于对照组,差异具有统计学意义(pil-18rαCD4T细胞比例高于对照组,差异具有统计学意义(5.5±1.7vs1.96±0.79 pil-18rαCD4T细胞比例高于缓解组,差异具有统计学意义(5.5±1.7vs2.47±0.98 pil-18rαCD4T细胞比例高于对照组,差异无统计学意义(2.47±0.98vs1.96±0.79p>0.05)。初诊组ITP患者Tim-3NK细胞比例低于对照组,差异具有统计学意义(2.16±0.96 vs6.33±0.85;pil-37含量高于对照组及缓解组;***患者发病时外周血中il-37、il-18、il-17表达升高,初诊组外周血中il-37、il-18、il-17高于对照组及缓解组;3.患者中,il-18rαCD4T细胞比例升高,Tim-3NK细胞比例降低;4.在ITP中,血清il-37水平和il-18rαCD4T细胞比例均与血小板数量相关,且血清il-37与CD4T细胞数、NK细胞数负相关;***患者外周血单个核细胞中,il-37mrNA表达量和il-17mrNA、il-18mrNA呈正相关;6.在ITP中il-37及其受体可能影响CD4T细胞和NK细胞功能而发挥免疫调节作用,il-37可以成为免疫性血小板减少症的治疗靶标。

关键词：原发免疫性血小板减少症 il-37 il-18 il-18rα NK细胞

白细胞介素18受体α与β真核表达载体构建及白细胞介素18受体β稳定表达细胞株的建立

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第28期12卷 5482-5485页

作者：陈燕赵振东北京大学医学部基础医学院免疫系北京市100083

目的:构建人白细胞介素18受体il-18rα,β真核表达载体pcDNA3.1-zeocin/il-18rαpcDNA3.0/il-18rβ,并将pcDNA3.0/il-18rβ稳定转染293细胞,构建il-18rβ稳定表达细胞株,用于建立il-18信号转导的体外细胞模型。方法:实验于2006-06/2007-05在北京大学医学部免疫系实验室完成。扩增并克隆人il-18rα和il-18rβcDNA,构建真核表达载体pcDNA3.1-zeocin/il-18rα,pcDNA3.0/il-18rβ。将pcDNA3.0/il-18rβ转染293细胞,经G418筛选建立起稳定表达il-18rβ的细胞株,Western-blot方法检测稳定细胞株il-18rβ的表达,挑选表达较高的细胞转染il-18rα,通过NF-κB依赖的Luciferase检测il-18信号转导通路的建立。结果:成功构建了il-18rα和il-18rβ的真核表达载体,il-18rβ的基因稳定转染到了293细胞中并获得了表达,通过瞬时转染il-18rα真核表达载体,在293细胞中建立了il-18信号转导的体外细胞模型。结论:成功建立起了il-18诱导NF-κB活化的体外细胞模型,为进一步研究il-18信号转导途径奠定了基础。

关键词： il-18rα il—18rβ 293细胞稳定细胞株信号转导