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痛风宁颗粒对急性痛风性关节炎模型大鼠膝关节PGE-2、IL-8及IκB-α、ikk-α的影响

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福建中医药 2013年第3期44卷 55-57页

作者：苏友新陈宝军赵富强闫虎周必洪张庆张子怡福建中医药大学福建福州350122

目的从"TLR-ILR/NF-κB"通路下游的几个关键信号分子及其炎症效应产物探讨痛风宁颗粒的抗炎作用机制。方法采用随机数字表法将实验动物分为正常组、模型组、痛风宁组、痛风定组、塞来昔布组共5组;使用尿酸盐结晶制作急性痛风性关节炎大... 详细信息

目的从"TLR-ILR/NF-κB"通路下游的几个关键信号分子及其炎症效应产物探讨痛风宁颗粒的抗炎作用机制。方法采用随机数字表法将实验动物分为正常组、模型组、痛风宁组、痛风定组、塞来昔布组共5组;使用尿酸盐结晶制作急性痛风性关节炎大鼠模型;采用ELISA法检测大鼠膝关节液细胞因子PGE-2、IL-8的含量及免疫组化法检测关节滑膜组织IκB-α、ikk-α的表达情况。结果痛风宁颗粒降低发病关节液中PGE-2、IL-8的含量及病变关节滑膜组织ikk-α的表达,促进IκB-α表达,与模型组及痛风定组比较均有显著性差异(Pikk-α的表达,抑制PGE-2、IL-8的生成,从而达到对急性痛风性关节炎的抗炎作用。

关键词：痛风性关节炎痛风宁颗粒 IκB-α ikk-α PGE-2 IL-8 TLR-ILR/NF-κB

ikk-a-pEGFP、TRAF1-pDsRed、EGFP-pDsRed融合蛋白重组体的构建和表达

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IKK-a-pEGFP、TRAF1-pDsRed、EGFP-pDsRed融合蛋白重组体的构建和...

作者：方锴华中科技大学

学位级别：硕士

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α)主要由活化的T细胞、单核/巨噬细胞、NK细胞产生并分泌,具有多种不同的生物学功能。它以两种生物活性形式存在,即26kD的跨膜型TNF-α(transmembran TNF-α,TM-TNF-α)和17kD的分泌型TNF-α(se... 详细信息

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α)主要由活化的T细胞、单核/巨噬细胞、NK细胞产生并分泌,具有多种不同的生物学功能。它以两种生物活性形式存在,即26kD的跨膜型TNF-α(transmembran TNF-α,TM-TNF-α)和17kD的分泌型TNF-α(secreted TNF-α, S-TNF-α)。TM-TNF-α是S-TNF-α的前体,在TNF-α转换酶(TACE)的作用下,其胞外段被切割,脱落成S-TNF-α。近年来研究发现,TM-TNF-α和其受体结合后,不仅可以启动受体后的信号传导,即正向信号,而且能向自身所在的细胞传递信号,即“反向信号”(reverse signaling),并引起相应的生物学效应。本室的前期实验通过免疫共沉淀技术证实ikk-α和TRAF1分别可以与TM-TNF-α共沉淀下来,提示这两种信号分子有可能以直接或间接的方式与TM-TNF-α的胞浆段结合,传递反向信号。本实验主要通过基因工程技术从细胞中获取ikk-α和TRAF1全长编码基因,分别与可以发生荧光共振能量转移(FRET)的荧光蛋白对构建成融合蛋白,同时构建荧光共振能量转移检测用的阳性质粒,为通过荧光共振能量转移技术进一步研究它们在活体细胞内相互之间的作用奠定基础。本研究主要结果如下: 一. ikk-α-pEGFP、TRAF1-pDsRed、EGFP-pDsRed构建、克隆及鉴定 1.重组体的构建和克隆:提取Raji细胞总RNA进行逆转录,以cDNA为模板,用PCR扩增ikk-α和TRAF1目的基因;通过巢式PCR进行鉴定,以确认扩增片段的特异性。同时以pIRES-EGFP质粒为模板,经PCR扩增得到EGFP目的基因片断。以Xho I和EcoR I双酶切pEGFP-N3质粒和ikk-α目的基因,以EcoR I和SacII双酶切pDsRed-N1质粒和TRAF1及EGFP目的基因,并用T4 DNA连接酶连接,获得ikk-α-pEGFP、TRAF1-pDsRed及EGFP-pDsRed的重组体,然后将连接产物转化DH5α感受态细菌,挑选阳性克隆。 2.阳性克隆的鉴定:以菌落PCR初步筛选阳性克隆,再用上述限制性内切酶双酶切鉴定,结果显示三种重组体经酶切分别能得到2.2Kb、1.3Kb和720bp的目的片断,与连接的目的基因大小一致。进一步DNA测序分析,证实三个重组体均各包含ikk-α、TRAF1和EGFP的编码区,没有突变和移码。提示ikk-α-pEGFP、TRAF1-pDsRed及EGFP-pDsRed三个重组体已经构建成功。二. ikk-α-pEGFP、TRAF1-pDsRed、EGFP-pDsRed三个重组体在真核细胞表达与鉴定将三种重组体分别转染COS7细胞,可见ikk-α-pEGFP融合蛋白(绿色荧光)弥散分布在胞浆内,TRAF1-pDsRed融合蛋白(红色荧光)则局限在细胞亚区。而表达EGFP-pDsRed融合蛋白既能呈现绿色荧光,又可呈现红色荧光,主要分布在胞浆内。提示ikk-α-pEGFP、TRAF1-pDsRed、EGFP-pDsRed三种融合蛋白均在真核细胞中被成功表达。本实验成功地构建了ikk-α-pEGFP、TRAF1-pDsRed、EGFP-pDsRed三种重组体,且在真核细胞中得到表达,并证实ikk-α和TRAF1两种分子的胞内定位。为进一步用FRET技术研究两分子间及与TM-TNF-α胞内段之间的相互作用奠定基础。EGFP-pDsRed阳性质粒的构建也为FRET检测提供阳性参照。

关键词： EGFP DsRed ikk-α TRAF1 融合蛋白

金银花颗粒对调节兔耳痤疮模型NF-κB信号通路的实验研究

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中药药理与临床 2019年第2期35卷 88-92页

作者：李畅崔鸿峥王海琦陈双双锦州医科大学附属第三医院锦州121000 张掖市第二人民医院张掖734000

目的:观察金银花对兔耳痤疮模型的治疗效果,探讨其对NF-κB信号通路的调节作用。方法:于兔耳内侧涂抹煤焦油,每日1次,持续14日,至其形成痤疮,造模成功后随机分为空白组、模型组、金银花颗粒0.70g/kg、1.40g/kg、2.80g/kg组及异维A酸3.26... 详细信息

目的:观察金银花对兔耳痤疮模型的治疗效果,探讨其对NF-κB信号通路的调节作用。方法:于兔耳内侧涂抹煤焦油,每日1次,持续14日,至其形成痤疮,造模成功后随机分为空白组、模型组、金银花颗粒0.70g/kg、1.40g/kg、2.80g/kg组及异维A酸3.26mg/kg组。通过蛋白质免疫印迹检测NF-κB p65、ikk-α、ikk-β蛋白的表达;通过ELISA检测血清中IL-1β、TNF-α的含量变化。结果:同空白组比较,模型对照组血清IL-1β、TNF-α含量升高显著;同模型组比较,各给药组IL-1β、TNF-α含量均下降明显。兔耳组织NF-κB p65、ikk-α、ikk-β蛋白表达显著降低。结论:金银花颗粒治疗痤疮的疗效确切,在减少兔耳毛囊脂质栓塞,抑制皮脂腺导管上皮增生并减少炎症细胞的浸润。其机制为通过调节NF-κB信号通路来调控细胞内NF-κB p65、ikk-α、ikk-β蛋白浓度及血清TNF-α及IL-1β含量有关。

关键词：金银花颗粒痤疮 NF-κB p65 ikk-α ikk-β IL-1β TNF-α

金银花颗粒剂对调节兔耳痤疮NF-κB信号通路的实验研究

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金银花颗粒剂对调节兔耳痤疮NF-κB信号通路的实验研究

作者：李畅锦州医科大学

学位级别：硕士

目的观察金银花颗粒剂对兔耳痤疮模型的治疗效果,探讨金银花颗粒剂对NF-κB信号通路的调节作用。方法36只雄兔中随机选取6只为空白组后,其余兔耳内侧涂抹0.5ml煤焦油,每天1次,持续14d,使兔耳内侧形成痤疮模型,造模成功后,将雄兔随机分... 详细信息

目的观察金银花颗粒剂对兔耳痤疮模型的治疗效果,探讨金银花颗粒剂对NF-κB信号通路的调节作用。方法36只雄兔中随机选取6只为空白组后,其余兔耳内侧涂抹0.5ml煤焦油,每天1次,持续14d,使兔耳内侧形成痤疮模型,造模成功后,将雄兔随机分为异维A酸组,金银花颗粒剂高剂量组,金银花颗粒剂中剂量组,金银花颗粒剂低剂量组和模型组。给药组的雄兔分别给予14d灌胃治疗。治疗结束后,采取HE染色在显微镜下观察比较,并在治疗周期内肉眼观察兔耳组织内侧皮肤变化;采取蛋白免疫印迹法检测ikk-α、ikk-β、NF-κBp65蛋白的表达;采取ELISA检测血清中IL-1β、TNF-α的含量变化。判断其治疗的效果。结果模型组雄兔血清TNF-α、IL-1β含量和组织NF-κBp65、ikk-α、ikk-β蛋白表达显著高于空白组(Pikk-α、ikk-β蛋白表达显著下调(Pikk-α、ikk-β蛋白表达显著下调(Pikk-α、ikk-β蛋白表达和血清TNF-α及IL-1β含量来调节NF-κB信号通路,对痤疮进行治疗。

关键词：痤疮金银花 NF-κBp65 IL-1β ikk-α ikk-β TNF-α

血管平滑肌细胞5-羟色胺受体1B基因差异表达对NF-κB通路活化的影响

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血管平滑肌细胞5-羟色胺受体1B基因差异表达对NF-κB通路活化的影...

作者：曹旭钦昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]探讨重组质粒对血管平滑肌细胞增殖的影响和血管平滑肌细胞NF-κB通路活化的影响因素。[方法]制作重组的5-HT1B质粒,构建具有不同5-HT1B受控表达水平的血管平滑肌细胞模型。根据各自不同的干扰水平将细胞模型分成:完全空白对照组... 详细信息

[目的]探讨重组质粒对血管平滑肌细胞增殖的影响和血管平滑肌细胞NF-κB通路活化的影响因素。[方法]制作重组的5-HT1B质粒,构建具有不同5-HT1B受控表达水平的血管平滑肌细胞模型。根据各自不同的干扰水平将细胞模型分成:完全空白对照组、高剂量脂质体组(20ul)、低剂量脂质体组(5ul)和5HT1B质粒组,待培养条件稳定后利用蛋白免疫印迹法测定各组VSMC的p42/44MAPK、PKC、ikk-α蛋白表达量,采用Tanon GIS图像分析软件分析各蛋白的表达水平。[结果]血管平滑肌细胞培养及转染鉴定:用荧光显微镜(×400)下观察5HT1B重组质粒转染VSMC48h后,发现绿色荧光位于胞浆中,说明重组质粒已成功转染进入人VSMC;高剂量脂质体处理的VSMC细胞内ikk-α蛋白的表达被抑制(pikk-α蛋白水平无统计学差异(p>0.05);未经任何处理的VSMC细胞内的PKC蛋白的表达量与高剂量处理的VSMC细胞内PKC表达无统计学差异(p>0.05),但低剂量脂质体处理组的PKC表达显著增加(pikk-α蛋白的实验组有低于各组的趋势,5HTIB受体可能不参与血管平滑肌细胞NF-κB通路活化;发现高剂量脂质体组的ikkα和MAPK蛋白水平均被显著抑制,推测脂质体浓度可能影响NF-κB通路和MAPK通路的活化。

关键词： 5HT1B NF-κB通路炎症 ikk-α

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肾癌中Card9的表达及作用机制研究

中华腔镜泌尿外科杂志（电子版） 2013年第5期7卷 58-61页

作者：毕良宽周楠刘成陆福鼎玄绪军林天歆韩金利黄海张彩霞董文刘皓黄健许可慰中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院妇产科广州510120

目的探讨肾癌中Card9表达水平及其调节机制。方法免疫组化法及Western blotting法检测肾癌细胞、正常细胞、肾癌组织和癌旁组织中Card9表达情况;MTT法检测抑制Card9表达后对肾癌细胞增殖的影响,同时Western blotting法检测抑制Card9对I... 详细信息

目的探讨肾癌中Card9表达水平及其调节机制。方法免疫组化法及Western blotting法检测肾癌细胞、正常细胞、肾癌组织和癌旁组织中Card9表达情况;MTT法检测抑制Card9表达后对肾癌细胞增殖的影响,同时Western blotting法检测抑制Card9对ikk-α表达及磷酸化的影响。结果免疫组化及Western blotting检测发现肾癌细胞及组织中Card9表达明显增高;MTT法检测发现抑制Card9的表达可以明显抑制肾癌细胞的增殖,Western blotting结果表明抑制肾癌细胞内Card9的表达可以抑制ikk-α表达及磷酸化。结论 Card9在肾癌内高表达,参与调节肾癌细胞增殖和ikk-α表达及磷酸化;其可能是肾癌的潜在治疗靶点之一。

关键词：肾癌 Card9 ikk-α NF-κB