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Oyster is an effective transmission vehicle for Cryptosporidium infection in human

Asian Pacific Journal of Tropical Medicine 2016年第6期9卷 544-547页

作者： Chantira Sutthikornchai Supaluk Popruk Kamlang Chumpolbanchorn Woraporn Sukhumavasi Yaowalark Sukthana Department of Protozoology Faculty of Tropical Medicine Mahidol University Mahidol University International College Parasitology Unit Department of Pathology Faculty of Veterinary Science Chulalongkorn University

Objective: To determine the ability of oysters to trap and maintain viable Cryptosporidium oocysts, and the feasibility of Cryptosporidium multiplication in oysters’ organs. Methods: Seventy oysters were raised in experimentally seeded natural seawater for up to 3 months, with weekly oocysts inoculations. Cryptosporidium oocysts, viable and non-viable, as well as other stages were detected using two immunofluorescence vital staining techniques(SporoGlo and Merifluor~) with confocal microscopy. Viability rate at various times after inoculations were calculated. Results: Cryptosporidium oocysts were found most concentrated in oysters’ digestive organs than in gill and water inside the oysters. Oocysts numbers were 857.33 at 24 h after inoculation and strikingly decreased to 243.00 and 126.67 oocysts at 72 h and 7 days, respectively. The oocysts in oyster were also less viable over time; 70%, 60% and 30% viable at 24 hrs, 72 hrs and 7days after inoculation, respectively. At 77 days, the number of oocysts was very low and none was found at 84 days onwards. Although some oocysts were ruptured with released sporozoites, there was no evidence throughout the study of sporozoites multiplication to indicate that oyster is a biological host. Despite the significant reduction in oocysts number after 7 days of inoculation, the remained viable oocysts can still cause cryptosporidiosis. Conclusion: The findings confirm that Cryptosporidium parvum does not multiply in oyster, and is therefore not a biological host. Nevertheless, the results suggest that oyster can be an effective transmission vehicle for Cryptosporidium oocysts, especially within 24-72 h of contamination, with viable oocysts present at up to 7 days post infection. Unless consuming well-cooked oyster dishes, eating raw oyster remains a public health concern and at least 3 days of depuration in clean sea water prior to consumption is recommended.

关键词： Cryptosporidium Oysters ifat Crassostrea belcheri

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Monoclonal antibody based Dot-ELISA and indirect fluorescence antibody technique for detecting Edwardsiella ictaluri infection in yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco)

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Aquaculture and Fisheries 2017年第5期2卷 207-212页

作者： Ruijun Li Hua Huang Xianyu Zhang Shigen Ye Qiang Li Dalian Key Laboratory of Marine Animal Disease Control and Prevention Agriculture Department Key Laboratory of Mariculture&Stock Enhancement in North China's SeaDalian Ocean UniversityDalian 116023China Department of Ocean Technology College of Marine and Biology EngineeringYancheng Institute of TechnologyYancheng 224051China

Edwardsiella ictaluri is known as the etiological agent of Red-head disease of yellow catfish(Pelteobagrus fulvidraco),and is the cause of heavy economic losses in the aquaculture industry.In this study,a DotEnzyme Linked Immunosorbent Assay(Dot-ELISA)and an Indirect Fluorescence Antibody technique(ifat)for detecting Edwardsiella ictaluri were developed by using a monoclonal antibody,5D11.For DotELISA,the working dilutions of 5D11 and the secondary antisera(enzyme-labeled goat anti-mouse Ig)were 1:320 dilution and 1:3000 dilution,respectively.For ifat,the working dilutions of 5D11 and goatanti-mouse Ig conjugated with fluorescein isothiocyanate were as respectively 1:80 and 1:256.Both of the methods established were highly sensitivity(Minimum detectable concentration,5107 CFU/mL)and had a high degree of accuracy(positive rate was 100%for both artificial infected fish and spontaneous diseased Pelteobagrus fulvidraco).The two reliable methods developed have high potential for quick and efficient detection of Edwardsiella ictaluri in aquaculture production units.

关键词： Edwardsiella ictaluri Monoclonal antibody Dot-ELISA ifat

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Different Patterns of Fluorescence in the Quantisation of anti-Leishmania Infantum Antibodies by Indirect Immuno-Fluorescent Antibody Test (ifat) in the Serological Diagnosis of Canine Leishmaniasis

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Open Journal of Veterinary Medicine 2017年第3期7卷 23-30页

作者： Pasquale Santoro Andrea Vellusi Università degli Studi di Napoli Federico II Dipartimento di Pediatria Napoli Italy Diagnostica di Laboratorio (Di.Lab.) S.r.l. Napoli Italy

Although Indirect Immuno-Fluorescent Antibody Test (ifat), performed employing “in house” prepared antigen, is considered by several authors as the golden standard for the quantisation of anti-leishmania antibodies in dogs, there is a lack of papers reporting a description of the different patterns of fluorescence that can be observed. An incorrect identification of patterns of fluorescence may be an important source of bias in the interpretation of results. Previous papers report different criteria to define as “positive” a specific pattern of fluorescence, namely: membrane fluorescence, homogeneous fluorescence of the body, or homogeneous fluorescence of the body plus flagellum. In this paper, we report a detailed description of preparation of slides and of the patterns of fluorescence that can be obtained employing “in house” prepared antigen. At least six main patterns of fluorescence may be observed: 1): homogeneous cytoplasmatic green fluorescence;2): membrane pattern, in which the fluorescence is mainly localized along the entire perimeter of the parasites;3): coarse-speckled cytoplasmatic fluorescence;4): flagellar pattern, in which the fluorescence is localized exclusively onto the flagellum;5): punctiform pattern, in which the fluorescence is localized exclusively at the basis of the flagellum;6): nuclear pattern, in which only the nucleus of the parasite shows a homogeneous green fluorescent. The significance of each pattern is discussed.

关键词： Leishmaniasis Leishmania Infantum ifat Dog Diagnostics Fluorescence Pattern

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The Serological Diagnosis of Canine Leishmaniasis: Commercial ELISA or in House ifat?

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Open Journal of Veterinary Medicine 2015年第2期5卷 30-34页

作者： Pasquale Santoro Andrea Vellusi Università degli Studi di Napoli Federico II - Dipartimento di Pediatria Napoli Italy Diagnostica di Laboratorio (Di.Lab.) S.r.l. Napoli Italy

The levels of anti-Leishmania infantum antibodies are relevant with the diagnosis and the followup of infected dogs. Both ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) and ifat (Indirect Immuno-Fluorescent Antibody Test) may be employed to estimate the antibody levels in dogs, but at present, the correlation between ELISA absorbance and ifat titer has not been investigated. In this paper, we compared the optical densities obtained with a commercial ELISA, Leiscan?(Laboratorios Dr. Esteve S.A.), versus the titers obtained by in house ifat. We measured ELISA absorbance of: 44 ifat negative samples coming from an endemic area;10 negative samples coming from a non endemic area;29 samples with an ifat titer between 1/40 and 1/80;10 samples with an ifat titer of 1/160;9 samples with an ifat titer of 1/320;10 samples with an ifat titer of 1/640;10 samples with an ifat titer ≥ of 1/1280. Results show that: a) there is a poor correlation between ifat titer and ELISA absorbance;b) Leiscan? is not able to distinguish between ifat negative samples and ifat titers up to 1:160;c) ifat negative samples from an endemic or non endemic area show different ELISA absorbance;d) the performance of the kit may be improved by the use of a more appropriate cut-off.

关键词： ELISA ifat Leishmania infantum

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应用表达微小隐孢子虫P23的重组干酪乳杆菌建立微小隐孢子虫ifat诊断方法

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畜牧兽医学报 2010年第10期41卷 1296-1300页

作者：格日勒图石泉王艳霞兰丽满达张和平内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室呼和浩特010018 内蒙古农业大学生命科学学院呼和浩特010018

本试验旨在建立ifat和间接ELISA方法作为微小隐孢子虫病诊断方法。应用DNA重组技术,构建原核表达载体pGEX-P23,经IPTG诱导表达出GST-P23融合蛋白,并进行纯化,将该重组融合蛋白作为包被抗原,建立ELISA诊断方法;同样构建重组载体pMG-P23,... 详细信息

本试验旨在建立ifat和间接ELISA方法作为微小隐孢子虫病诊断方法。应用DNA重组技术,构建原核表达载体pGEX-P23,经IPTG诱导表达出GST-P23融合蛋白,并进行纯化,将该重组融合蛋白作为包被抗原,建立ELISA诊断方法;同样构建重组载体pMG-P23,用电转化方法将其转入干酪乳杆菌中,称为重组活干酪乳杆菌(含pMG-P23),以此为已知抗原,建立ifat诊断方法。应用ELISA和ifat方法检测来自内蒙古地区的508份牛血清、187份绵羊血清和197份山羊血清:其中ELISA方法在各种动物血清中阳性率依次分别为0.59%、5.88%和4.57%,而ifat方法则为0.19%、5.88%和4.57%。2种检测方法阳性符合率在牛血清样品中为33.33%,在绵羊和山羊中则均为100%。试验结果表明,重组抗原P23具有良好的反应原性,2种诊断方法的结果基本吻合,显示出良好的一致性和敏感性,可在微小隐孢子虫病的诊断实践中推广应用。

关键词：微小隐孢子虫重组干酪乳杆菌 P23重组抗原 ELISA ifat

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中国流行性出血热病毒宿主动物六种鼠肺抗原的特异性鉴定

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中国医学科学院学报 1984年第6期6卷 429-432页

作者：陈化新出血热防治研究协作组

从中国EHF疫区经初步筛选所获自然携带EHF病毒的6种鼠肺抗原,用ifat、EHF 病人双份血清、免疫荧光阻断试验、单份EHF恢复期血清、非EHF病人及正常人血清鉴定其特异性,结果证明它们都是 EHF病毒抗原。

关键词：病毒抗原 ifat 病人特异性双份血清成双血清 EHF 中华人民共和国

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ifat和McAb-LAT诊断囊虫病的研究

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中国寄生虫病防治杂志 1998年第3期11卷 184-186页

作者：武峰崔晶晋雪香王中全河南医科大学寄生虫学教研室

本文采用猪囊尾蚴冰冻切片抗原间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）和抗猪囊尾蚴单克隆抗体胶乳凝集试验（ＭｃＡｂ－ＬＡＴ）对囊虫病患者进行特异性抗体和抗原的检测，囊虫病患者抗体检出率为８３．７１％，分型抗体检测，混合型及脑型检出... 详细信息

本文采用猪囊尾蚴冰冻切片抗原间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）和抗猪囊尾蚴单克隆抗体胶乳凝集试验（ＭｃＡｂ－ＬＡＴ）对囊虫病患者进行特异性抗体和抗原的检测，囊虫病患者抗体检出率为８３．７１％，分型抗体检测，混合型及脑型检出率明显高于皮肌型（Ｐ＜０．０１）；患者循环抗原的检出率为７３．０５％，脑型患者囊虫活动期的循环抗原的阳性率明显高于囊虫钙化期（Ｐ＜０．０１），药物治疗３个月以上患者循环抗原的阳性率降为４４．１１％。ＩＦＡＴ和ＭｃＡｂ－ＬＡＴ在囊虫病临床诊断中具有较高价值。

关键词： ifat LAT 囊虫病免疫诊断

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ifat在丝虫病血清流行病学监测中的应用研究

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中国寄生虫病防治杂志 1995年第1期8卷 4-6页

作者：邹义洲白晓蓉唐来仪方宇欧阳厚坤段绩辉李正祥湖南省卫生防疫站

用马来丝虫成虫冰冻切片抗原作间接荧光抗体试验（ＩＰＡＴ），以１：２０稀释样本检测丝虫抗体的阳性符合率为９７．５０％，假阳性率为２．４４％。在２８２名流动人口中抗体阳性率为１６．３１％（４６／２８２）。自１９８７年以来... 详细信息

用马来丝虫成虫冰冻切片抗原作间接荧光抗体试验（ＩＰＡＴ），以１：２０稀释样本检测丝虫抗体的阳性符合率为９７．５０％，假阳性率为２．４４％。在２８２名流动人口中抗体阳性率为１６．３１％（４６／２８２）。自１９８７年以来我省抽样进行血清流行病学调查，人群丝虫抗体水平逐年下降，１９９２年对２１个县市１０７９８人份血样检测，显示基本消灭丝虫病８～１１年后人群抗体平均阳性率为３．１８％，ＧＭＲＴ为２５．５９，已接近非流行区健康人水平（２．４４％）．结果表明丝虫病流行区经海群生防治后的效果是稳定的，ＩＦＡＴ用于现场监测能反映丝虫病流行的实际情况。

关键词： ifat 丝虫病流行病学血清流行病学监测

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ifat和ELISA用于马来丝虫病基本消灭后监测的比较观察

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中国寄生虫病防治杂志 1996年第2期9卷 122-124页

作者：霍细香王莉莉张绍清湖北省医学科学院寄生虫病研究所

本文报道了用ＩＦＡＴ和ＥＬＩＳＡ方法对马来丝虫病基本消灭后期人群微丝蚴率由１９９０年的０．７２％（９／１２８４）降至１９９４年的０．０８％（１／１１８２）；血清学检测，１９９０、１９９１、１９９４年ＩＦＡＴ阳性率分别... 详细信息

本文报道了用ＩＦＡＴ和ＥＬＩＳＡ方法对马来丝虫病基本消灭后期人群微丝蚴率由１９９０年的０．７２％（９／１２８４）降至１９９４年的０．０８％（１／１１８２）；血清学检测，１９９０、１９９１、１９９４年ＩＦＡＴ阳性率分别为２６．９２％、２０．１９％和８．９６％，ＥＬＩＳＡ则分别为２３．５０％、３０．７０％和１４．２０％，均呈下降趋势。微丝蚴血症者及原微丝蚴血症者同年检测，抗体阳性率及水平均明显高于正常人；人群抗体阳性随年龄增长而增加，１０岁以下组儿童最低。两种方法应用比较，结果的符合率为７０．９～８４．６％，不符者中呈互补性；对个体多次检测的结果仍有波动。表明两者均可作为丝虫病后期流行病学监测方法。

关键词：丝虫病监测 ifat ELISA

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ifat及ELISA检测狂犬病疫苗接种者早期血清抗体结果分析

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中国人兽共患病杂志 2005年第9期21卷 779-782页

作者：陈阳陈亮何似刘建明王灵岚福建省疾病预防控制中心福州350001

目的观察接种狂犬病疫苗人群早期抗体产生水平,探讨国产ELISA试剂盒用于检测狂犬病疫苗接种人群早期狂犬病抗体水平的可行性及其在狂犬病防治中的实用性。方法应用ifat及ELISA法检测狂犬病疫苗接种者血清狂犬病毒抗体,以ROC分析各检测... 详细信息

目的观察接种狂犬病疫苗人群早期抗体产生水平,探讨国产ELISA试剂盒用于检测狂犬病疫苗接种人群早期狂犬病抗体水平的可行性及其在狂犬病防治中的实用性。方法应用ifat及ELISA法检测狂犬病疫苗接种者血清狂犬病毒抗体,以ROC分析各检测方法的特异性、敏感性。结果对第14d、30d血清检测,各方法检出的抗体阳性率之间存在高度显著性差异,其中以ELISA-AROC曲线下的面积最大。应用不同批号ELISA-A检测第14、30及45d血清,仅第14d血清各抗体阳性率之间存在高度显著性差异,而第30、45d无显著性差异,第30、45d血清抗体阳性率及抗体滴度均普遍高于第14d。结论不同产家的狂犬病抗体ELISA检测试剂盒质量存在极大差异;其中以ELISA-A特异性、敏感性最好。试剂盒质量对第14d血清检测结果的影响要大于对第30、45d血清的检测结果,目前国产ELISA试剂盒不宜用于狂犬病疫苗接种者早期血清学免疫效果评价。

关键词：狂犬病疫苗早期抗体水平 ifat ELISA

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