检索结果-南通市图书馆

坏死激酶RIP1/RIP3通过特异性结合HSV-1的icp6蛋白从而启动细胞坏死来抑制病毒在小鼠中的繁殖

科学新闻 2016年第1期 91-91页

作者： Zhe Huang Su-Qin Wu 梁耀极 Xiaojuan Zhou Wanze Chen Lisheng Li Jianfeng Wu Qiuyu Zhuang Chang'an Chen Jingxian Li Chuan-Qi Zhong Weixiang Xia Rongbin Zhou Chunfu Zheng 韩家淮厦门大学细胞应激生物学国家重点实验室中国科学院厦门大学生命科学学院

文章简介细胞坏死是一种由受体相互作用蛋白3(RIP3)和1(RIP1)介导的程序性死亡方式。本研究发现在RIP3缺失的小鼠细胞中,Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)的繁殖效率远远高于在野生型细胞中的繁殖效率。这一结果表明:在小鼠细胞中,RIP3对于抵抗H... 详细信息

文章简介细胞坏死是一种由受体相互作用蛋白3(RIP3)和1(RIP1)介导的程序性死亡方式。本研究发现在RIP3缺失的小鼠细胞中,Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)的繁殖效率远远高于在野生型细胞中的繁殖效率。这一结果表明:在小鼠细胞中,RIP3对于抵抗HSV-1的感染起到了非常重要的作用。进一步的研究发现,在感染HSV-1的小鼠细胞中,RIP1/3能够和HSV-1编码的icp6蛋白发生相互作用;这一相互作用激活了RIP3介导的坏死信号,进一步引起细胞坏

关键词：细胞坏死小鼠细胞 icp6 HSV-1 RIP1/RIP3 小鼠小家鼠蛋白

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

病原体HSV-1对人源宿主细胞程序性坏死的负调控机制

病原体HSV-1对人源宿主细胞程序性坏死的负调控机制

引用

作者：杜千苏州大学

学位级别：硕士

[研究背景]当病原体感染宿主细胞时,被感染的细胞发生程序性坏死是宿主防御的重要机制之一。细胞程序性坏死（Necroptosis）是一种受调控的细胞坏死方式,主要由受体相互作用激酶 3（Receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3）及其... 详细信息

[研究背景]当病原体感染宿主细胞时,被感染的细胞发生程序性坏死是宿主防御的重要机制之一。细胞程序性坏死（Necroptosis）是一种受调控的细胞坏死方式,主要由受体相互作用激酶 3（Receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3）及其底物蛋白——混合谱系激酶结构域蛋白（Mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL）的活化介导发生的。人单纯疱疹病毒1型（Herpes simplex virus 1,HSV-1）是一种常见的致病性疱疹感染病毒,主要引发口腔和唇等部位感染如疱疹性龈口炎（Herpetic gingivostomatitis）,严重的还会引起脑炎（Encephalitis）等。当HSV-1病毒感染小鼠细胞时,HSV-1病毒蛋白核糖核苷酸还原酶大亚基（icp6）能够通过RHIM结构域结合鼠源RIPK3,进一步激活下游的底物蛋白MLKL,启动宿主细胞发生程序性细胞坏死,病毒得以被宿主细胞清除。然而,当HSV-1病毒感染天然宿主人源细胞时,icp6依然可以与人源RIPK3结合,但却抑制了人源RIPK3的活化,从而逃逸了天然宿主细胞的程序性坏死应答,病毒得以在宿主细胞内增殖。因此,HSV-1病毒蛋白icp6在人源和鼠源细胞中分别发挥抑制和促进细胞程序性坏死的作用。目前,icp6蛋白在天然宿主人源细胞中负调控细胞程序性坏死的机制有待阐明,此机制的解答有望为揭示HSV-1病毒的致病机理提供新的思路。[研究目的]旨在运用分子生物学、细胞生物学等研究方法与技术和严谨的实验设计,以探究在HSV-1病毒感染过程中,HSV-1病毒蛋白icp6对天然宿主细胞启动的程序性坏死的负调控机制,进一步阐明HSV-1病毒在生物进化过程中获得的抵抗宿主防御的能力。[研究方法]（1）为了探寻HSV-1病毒蛋白icp6对人源细胞程序性坏死的负调控机制,我们利用将HSV-1病毒蛋白icp6分别与人源RIPK3和鼠源RIPK3共转染以检测icp6是否对人源RIPK3和鼠源RIPK3存在不同修饰,结果发现了icp6诱导人源RIPK3发生特异性的修饰。（2）利用蛋白纯化技术和磷酸化修饰检测体系,进一步判断icp6诱导人源RIPK3的修饰方式。（3）利用分子克隆技术构建不同程度截短的RIPK3表达质粒,进一步确定icp6诱导人源RIPK3发生修饰的区间。（4）通过点突变技术确定RIPK3磷酸化修饰位点,将可能发生修饰的位点都突变成丙氨酸（A）（模拟丧失磷酸化功能）,然后通过共转染体系进行功能验证。（5）通过慢病毒感染包装体系,构建RIPK3修饰位点的丧失或激活的突变体,然后探究其对程序性坏死的影响。[研究结果]（1）在共转染体系中,发现HSV-1病毒蛋白icp6诱导人源RIPK3发生修饰作用,并且该修饰在鼠源细胞株中不存在。（2）icp6介导的人源RIPK3修饰依赖于RIPK3自身的RHIM结构域,而不依赖于其激酶活性及其坏死磷酸化位点。（3）磷酸酶处理实验表明icp6介导的人源RIPK3修饰是一种磷酸化修饰。（4）HSV-1病毒蛋白icp6诱导的人源RIPK3的修饰主要发生在其C端,即修饰位点在氨基酸431-518位之间。（5）icp6介导的人源RIPK3修饰主要发生于RIPK3第467位的苏氨酸与第513位的酪氨酸。（6）RIPK3第467位的苏氨酸变成丙氨酸（A）之后,能够促进TNF诱导的细胞程序性坏死以及增强HeLa细胞对HSV-1感染诱导的细胞坏死的敏感性。对第467位苏氨酸突变成天冬氨酸（D）模拟蛋白发生磷酸化后,能够抑制TNF诱导的细胞程序性坏死。（7）RIPK3第513位的酪氨酸突变成天冬氨酸（D）之后,也能够抑制TNF诱导的细胞程序性坏死。[结论]综上所述,我们发现HSV-1病毒蛋白icp6能够诱导人源RIPK3发生特异性的磷酸化修饰;icp6能够诱导人源RIPK3的第467位的苏氨酸与第513位的酪氨酸发生磷酸化修饰;入源RIPK3磷酸化修饰位点的第467位苏氨酸与第513位的酪氨酸对于细胞程序性坏死起着负调控作用。

关键词：细胞程序性坏死 HSV-1 icp6 RIPK3 负调控

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞程序性坏死在宿主防御病原体中的作用和调控机制研究

细胞程序性坏死在宿主防御病原体中的作用和调控机制研究

引用

作者：李沄苏州大学

学位级别：硕士

【研究背景和意义】病原体诱导的细胞死亡是哺乳动物防御系统的一个至关重要的部分。已经发现RIP3依赖的细胞程序性坏死参与到了机体防御外来入侵病原体的过程中,但病原体激活RIP3依赖的细胞程序性坏死的具体分子机制尚不清楚。【研究... 详细信息

【研究背景和意义】病原体诱导的细胞死亡是哺乳动物防御系统的一个至关重要的部分。已经发现RIP3依赖的细胞程序性坏死参与到了机体防御外来入侵病原体的过程中,但病原体激活RIP3依赖的细胞程序性坏死的具体分子机制尚不清楚。【研究目的】探究HSV-1诱导细胞程序性坏死的分子机制,以及这种程序性坏死方式如何在机体抗病毒中发挥作用。【研究方法】为了筛选能够引发RIP3-依赖性细胞坏死的病毒,我们利用两株牛痘病毒和两株HSV-1感染WT和RIP3缺失的MEF细胞,检测细胞的存活率;为了检测了RIP3的缺失是否影响了病毒的入侵和复制,用HSV-1感染了野生型和RIP3缺失的MEF细胞,之后通过蛋白免疫印迹和荧光定量PCR检测病毒蛋白和基因的表达水平。为了检测RIP3缺失对NF-κB信号通路的影响,利用蛋白免疫印迹检测MEF细胞和RIP3缺失的MEF细胞感染HSV-1后p-IκBα水平;为了检测TNFR,TLR3,Nectin-1,MLKL,CYLD和DAI是否参与到这条信号通路,通过对TNFR1 KO,TNFR1/2 DKO,TLR3 KO细胞感染HSV-1检测存活率,通过RNAi沉默Nectin-1,CYLD后感染HSV-1检测存活率,通过构建MLKL shRNA细胞系和通过CRISPR/Cas9技术构建DAI KO细胞系,感染HSV-1后检测存活率;在RIP3缺失的MEF细胞上构建能稳定表达HA和Flag标签的RIP3的细胞系,对细胞感染病毒后,利用RIP3的免疫共沉淀,将产物进行质谱分析去寻找参与激活HSV-1诱导的细胞坏死的关键作用蛋白;通过逆转录病毒体系使icp6在细胞内过表达以检测icp6蛋白的表达是否足以激活RIP3/MLK依赖的细胞坏死;对野生型小鼠和和RIP3 KO小鼠腹腔注射HSV-1,检测小鼠脑,脾,肝,血清中的病毒滴度,对小鼠肝脏进行切片及免疫组化,对小鼠注射一次或两次病毒后,监控存活率,以此确定RIP3在小鼠抵御病毒复制和致病中的作用。【研究结果】(1)HSV-1的感染激活RIP3-依赖性细胞坏死(2)细胞凋亡不参与到HSV-1激活的细胞死亡(3)RIP3的缺失不影响HSV-1入侵细胞以及病毒自身的复制(4)RIP3的缺失不影响HSV-1激活的NF-κB信号活性(5)HSV-1感染诱发的细胞程序性坏死不依赖TNFR,CYLD,TLR3,但依赖于Nectin-1(6)HSV-1感染诱发的细胞程序性坏死不依赖于DAI(7)MLKL是HSV-1感染诱发的细胞程序性坏死依赖于RIP3的底物MLKL(8)病毒蛋白icp6参与到HSV-1激活的RIP3免疫复合体中(9)icp6与RIP3通过RIP同源作用域(RHIM)相互作用(10)icp6对于HSV-1诱导的细胞程序性坏死是必须的(11)icp6的表达足以激活RIP3/MLKL介导的细胞程序性坏死(12)icp6激活的细胞程序性坏死依赖于icp6和RIP3的RHIM结构域及RIP3的激酶活性(13)RIP3介导的细胞程序性坏死帮助机体抵御HSV-1(14)RIP3介导的细胞程序性坏死帮助宿主抵抗HSV-1的复制和造成的致死【结论】综上所述,我们的工作首次发现了RIP3识别HSV-1病毒icp6进而启动宿主细胞程序性坏死的分子机制,并揭示了RIP3-依赖性细胞坏死在机体抗HSV-1病毒感染中的重要生理学功能。

关键词：细胞程序性坏死 HSV-1 icp6 RIP3 MLKL

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：