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合成的鹅去氧胆酸衍生物HS-1200抑制体外肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白合成的研究

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滨州医学院学报 2015年第6期38卷 401-404,429页

作者：尹洪民彭新国高梅兰李增霞李青云广东省阳江市人民医院阳江529500 滨州医学院附属医院

目的研究合成的鹅去氧胆酸衍生物HS-1200抑制体外肝星状细胞增殖及i型胶原蛋白合成的效果。方法用5ng/ml TGF-β1刺激HSC-T6细胞,然后在24h,48h时给予不同浓度梯度的HS-1200(60μM,40μM,20μM)。本实验使用MTT法测定细胞增殖,采用流式... 详细信息

目的研究合成的鹅去氧胆酸衍生物HS-1200抑制体外肝星状细胞增殖及i型胶原蛋白合成的效果。方法用5ng/ml TGF-β1刺激HSC-T6细胞,然后在24h,48h时给予不同浓度梯度的HS-1200(60μM,40μM,20μM)。本实验使用MTT法测定细胞增殖,采用流式细胞检测细胞周期。免疫组织化学研究Ⅰ型胶原蛋白、cyclin-D1、cyclin-E的表达;采用DNA片段分析研究细胞凋亡。结果本研究发现HS-1200抑制TGF-β1诱导HSC的增殖且将细胞捕获在细胞周期的G_0/G_1期。结论 HS-1200抑制HSC-T6增殖及i型胶原蛋白合成,具有作为临床抗纤维化试剂的潜力。

关键词：合成的鹅去氧胆酸衍生物HS-1200 肝星状细胞细胞增殖 i型胶原蛋白 TGF-β1

复方七芍降压片对自发性高血压大鼠肠系膜动脉中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达及血压的影响

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中国临床药理学与治疗学 2019年第12期24卷 1364-1370页

作者：李弘刘叶倩龚姗刘林曾勇蔡晓王宇红任卫琼湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南中医药大学科技创新中心湖南长沙410208

目的:探究复方七芍降压片对自发性高血压大鼠(SHR)血压及血管重塑的作用机制。方法:SHR大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦片组、复方七芍降压片组,每组10只,另设10只WKY大鼠为正常对照组,给药6周,无创血压仪测量各周大鼠血压变化;HE染色观... 详细信息

目的:探究复方七芍降压片对自发性高血压大鼠(SHR)血压及血管重塑的作用机制。方法:SHR大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦片组、复方七芍降压片组,每组10只,另设10只WKY大鼠为正常对照组,给药6周,无创血压仪测量各周大鼠血压变化;HE染色观察大鼠肠系膜动脉病理变化并测量管壁厚度、血管中膜厚度及相同位置的管腔直径,比值记为WT;免疫组化法检测肠系膜动脉中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(COⅠ、COⅢ)表达情况。结果:给药6周后,与正常对照组比较,模型组大鼠各周血压均明显升高(P胶原蛋白表达均明显升高(P胶原蛋白表达均明显降低(P胶原蛋白沉积有关。

关键词：复方七芍降压片肠系膜动脉基质金属蛋白酶-2 i型胶原蛋白 Ⅲ型胶原蛋白血管重塑

汉防己甲素对成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

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实用美容整形外科杂志 2002年第6期13卷 327-329页

作者：李万同柳大烈罗力生第四军医大学西京医院整形外科陕西西安710032 沈阳军区总医院整形外科广州南方医院整形外科

目的　探讨汉防己甲素预防和治疗增生性瘢痕的可行性。方法　对增生性瘢痕中的成纤维细胞进行培养 ,然后加入不同浓度的汉防己甲素 ,培养后继续观察成纤维细胞合成胶原蛋白的能力的变化。结果　汉防己甲素可以抑制成纤维细胞合成胶原蛋... 详细信息

目的　探讨汉防己甲素预防和治疗增生性瘢痕的可行性。方法　对增生性瘢痕中的成纤维细胞进行培养 ,然后加入不同浓度的汉防己甲素 ,培养后继续观察成纤维细胞合成胶原蛋白的能力的变化。结果　汉防己甲素可以抑制成纤维细胞合成胶原蛋白。结论　汉防己甲素对成纤维细胞胶原蛋白的合成具有抑制作用。

关键词： i型胶原蛋白合成汉防己甲素成纤维细胞增生性瘢痕

RT-PCR检测大鼠低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和弹性蛋白基因的表达

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重庆医学 2003年第11期32卷 1499-1501页

作者：刘南宋波金锡御熊恩庆第三军医大学西南医院全军泌尿专科中心重庆400038

目的　检测大鼠低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和弹性蛋白基因的表达。方法　用RT PCR的方法检测大鼠梗阻性低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和弹性蛋白基因表达的改变。结果　与正常对照组相比 ,低顺应性膀胱组织逼尿肌层... 详细信息

目的　检测大鼠低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和弹性蛋白基因的表达。方法　用RT PCR的方法检测大鼠梗阻性低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和弹性蛋白基因表达的改变。结果　与正常对照组相比 ,低顺应性膀胱组织逼尿肌层中Ⅲ型胶原蛋白基因的表达被明显上调 ,Ⅰ型胶原蛋白基因的表达被上调 ,而弹性蛋白基因的表达被明显下调。结论　在大鼠的梗阻性低顺应性膀胱中 ,发现膀胱组织肌层内Ⅲ型、Ⅰ型胶原蛋白基因表达被上调 ,弹性蛋白基因的表达被明显下调 ,而这两种基因表达的改变与梗阻后低顺应性膀胱的形成存在一定的关系。

关键词：低顺应性膀胱膀胱流出道梗阻 i型胶原蛋白 Ⅲ型胶原蛋白弹性蛋白 RP—PCR检测基因表达

积雪苷软膏对BALB/C裸小鼠瘢痕疙瘩模型成纤维细胞及胶原蛋白表达的影响

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中国麻风皮肤病杂志 2019年第7期35卷 398-401页

作者：杨艳郭桂珍王卫涛马春锋青岛市城阳人民医院青岛266109 青岛市城阳区红岛街道卫生院青岛266000

目的:明确外用积雪苷软膏对瘢痕疙瘩裸鼠模型的成纤维细胞和胶原蛋白表达的影响。方法:取手术切除的瘢痕疙瘩组织植入16只裸鼠肩胛及骶尾部,建立瘢痕疙瘩裸鼠模型。随机分为A组(外用对照软膏基质),B组(外用0.00125%积雪苷软膏),C组(外用... 详细信息

目的:明确外用积雪苷软膏对瘢痕疙瘩裸鼠模型的成纤维细胞和胶原蛋白表达的影响。方法:取手术切除的瘢痕疙瘩组织植入16只裸鼠肩胛及骶尾部,建立瘢痕疙瘩裸鼠模型。随机分为A组(外用对照软膏基质),B组(外用0.00125%积雪苷软膏),C组(外用0.0025%积雪苷软膏)和D组(外用0.005%积雪苷软膏),每组4只。观察瘢痕疙瘩大体形态学及光镜下变化;免疫组化检测瘢痕疙瘩i型胶原蛋白表达的影响;透射电镜观察瘢痕疙瘩成纤维细胞结构的变化。结果:大体观察裸鼠瘢痕疙瘩经不同浓度积雪苷软膏作用后组织块体积均变小,光镜观察成纤维细胞数明显减少。A^D组i型胶原蛋白的表达率分别为79.17%、70.83%、37.50%、33.33%,四组比较,差异具有统计学意义(Fisher精确概率检验法,Pi型胶原蛋白的表达。

关键词：瘢痕疙瘩模型积雪苷软膏成纤维细胞 i型胶原蛋白

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草鱼鱼鳞胶原蛋白的提取及特性研究

草鱼鱼鳞胶原蛋白的提取及特性研究

作者：金成华中农业大学

学位级别：硕士

本文以草鱼(Grass Carp, Ctenopharyngodon idellus)鱼鳞为研究对象,采用先提取胶原蛋白,再使用水从萃余相中提取鱼鳞胶,最后酶解鱼鳞残渣的工艺。旨在为充分利用鱼鳞中胶原蛋白,提供一条有效的思路。并为鱼鳞的合理利用,提供了必要的... 详细信息

本文以草鱼(Grass Carp, Ctenopharyngodon idellus)鱼鳞为研究对象,采用先提取胶原蛋白,再使用水从萃余相中提取鱼鳞胶,最后酶解鱼鳞残渣的工艺。旨在为充分利用鱼鳞中胶原蛋白,提供一条有效的思路。并为鱼鳞的合理利用,提供了必要的科学依据。研究结果如下: 1.采用酸性和酶提取法从草鱼鱼鳞中提取酸溶性胶原蛋白(acid-soluble collagen, ASC)和酶促溶性胶原蛋白(pepsin-solubilized collagen, PSC)。经SDS-PAGE电泳及红外光谱分析显示,所提取的胶原蛋白电泳区带及红外图谱与Ⅰ型胶原蛋白标准品十分相似。氨基酸组成分析表明,ASC和PSC是典型的胶原蛋白。经UV扫描分析,ASC和PSC在233nm处均有强烈吸收。热稳定性测定PSC的热变性温度为25.7℃。差示扫描量热测定ASC和PSC的热收缩温度分别为99.6℃和81.7℃。 2.提取胶原蛋白后,再用热水从萃余相中提取鱼鳞胶。采用正交试验优化了提取工艺,其工艺参数为:提取温度90℃,提取时间3h,料液比1:100,提取率最高。得到的鱼鳞胶样品,对其部分功能特性进行了测定,结果表明鱼鳞胶具有良好的吸水性、保水性、乳化能力、起泡能力等功能特性。另外对其流变学行为进行了初步研究,结果表明:鱼鳞胶的黏度与温度成反比,与鱼鳞胶浓度成正比;加入钙盐后,0.5%CaCl使鱼鳞胶黏度增至最大;pH值对黏度的影响相对复杂,酸性条件下,黏度变化不大,而pH=7时黏度最大,碱性时黏度又有所降低。通过对不同浓度鱼鳞胶溶液的质构(TPA, texture profile analysis)分析,表明高温或者低浓度下,鱼鳞胶的凝胶性能不好。添加不同比例鱼鳞胶到鲢鱼鱼糜制品中,观察其对鱼糜凝胶特性的影响。结果显示:鱼糜中添加不同浓度的鱼鳞胶,均可使鱼糜凝胶的失水率显著降低(P0.05)。 3.通过试验选择木瓜蛋白酶(papainase)为水解鱼鳞残渣用酶。然后应用单因素实验和正交实验优选鱼鳞残渣酶解的最佳条件。结果表明:酶解温度为65℃,酶与底物比例为1:10,酶解时间为4h,底物浓度为2%,可使鱼鳞残渣得到较高程度的水解。

关键词：草鱼鱼鳞 i型胶原蛋白酶解提取

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罗非鱼胶原蛋白的生物相容性研究

罗非鱼胶原蛋白的生物相容性研究

作者：张静怡上海海洋大学

学位级别：硕士

胶原蛋白作为哺乳动物体内含量最丰富的蛋白质,约占体内蛋白总量的25%3%,并且在组成细胞间质过程中起重要作用。常见的三种胶原分别有Ⅰ型、Ⅱ型与Ⅲ型,Ⅰ型胶原在其中为动物体内胶原蛋白的最主要的类型。而在鱼类体内Ⅰ型胶原蛋白含量... 详细信息

胶原蛋白作为哺乳动物体内含量最丰富的蛋白质,约占体内蛋白总量的25%3%,并且在组成细胞间质过程中起重要作用。常见的三种胶原分别有Ⅰ型、Ⅱ型与Ⅲ型,Ⅰ型胶原在其中为动物体内胶原蛋白的最主要的类型。而在鱼类体内Ⅰ型胶原蛋白含量高于陆生动物,其中鱼皮和鱼骨中富含Ⅰ型胶原蛋白。i型胶原蛋白分子结构非常稳定,具有良好的生物相容性、可生物降解性和生物活性。但是,随着i型胶原蛋白越来越广泛地应用于生物医学过程中,出现了生物相容性问题。如果要使宿主成功接受胶原蛋白,至少要使发生的生物相容性反应对宿主不产生有害作用。为此,我们深入探讨了鱼类来源的i型胶原蛋白生物相容性,丰富了在其应用领域的功能作用,填补了鱼类来源i型胶原蛋白生物相容性的研究空白。第一章介绍了研究背景,包括鱼类来源胶原蛋白研究进展,胶原蛋白的结构特征、生物化学特性研究方法及i型胶原蛋白的生物相容性的评价方法。第二章深入分析了罗非鱼胶原蛋白一系列的生物化学特性。罗非鱼胶原蛋白分别采用胃蛋白限制性酶解分离法和乙酸酸解法制得。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定罗非鱼皮胶原蛋白分子质量。SDS-PAGE结果显示罗非鱼胶原蛋白是由α肽链和β肽链构成。应用扫描电镜技术观察罗非鱼胶原蛋白的三维立体结构特征,分析了胶原纤维的超螺旋结构和末端伸展结构的的特性。分别通过差示扫描量热法、圆二色谱法、红外光谱法分析了罗非鱼胶原蛋白的热变性温度、二级结构特征、红外光谱特征。第三章讨论了罗非鱼胶原蛋白的急性全身毒性。通过建立小鼠动物模型进行急性毒性全身实验,通过观察罗非鱼胶原蛋白对于心血管系统、呼吸系统、运动系统、神经系统、感觉系统、和动物体重变化及死后器官特征的影响。实验结果显示所有组别的小鼠均未出现死亡现象,运动正常,未发现呼吸困难、腹部刺激、眼睑下垂等,未出现任何毒性反应症状。体重及脏器指数结果显示实验组小鼠未出现急性全身毒性症状。罗非鱼胶原蛋白对于实验动物的各方面的病理生理作用不明显。第四章深入探讨了罗非鱼胶原蛋白免疫特性。罗非鱼胶原蛋白的抗原反应特性以iCR小鼠作为动物模型,采用酶联免疫吸附反应分析测定罗非鱼胶原蛋白诱导小鼠产生抗体的特性及其相关指标的变化特点。从而确定罗非鱼胶原蛋白的抗原性强弱。检测结果显示罗非鱼胶原蛋白具有低抗原性的特点。第五章深入探讨了罗非鱼胶原蛋白的致敏性进行过敏实验研究,建立豚鼠过敏模型,观察使用罗非鱼胶原蛋白浸提液激发后有无过敏症状。对豚鼠血浆中的ig G、ig E、组胺、肥大细胞蛋白酶含量进行检测,并解剖观察各器官形态。分析罗非鱼皮i型胶原蛋白引起的过敏反应程度。结果显示,豚鼠的ig G、ig E、组胺、肥大细胞蛋白酶含量在第21d激发后未出现严重的增多。罗非鱼胶原蛋白未引起明显的过敏反应特征,过敏反应程度较低。第六章深入探讨了罗非鱼胶原蛋白的血液相容性。自新西兰大白兔耳静脉采血进行溶血试验。制备细胞悬液之后与罗非鱼胶原蛋白浸提液融合,温育后进行溶血观察和溶血率的测定,测定发现罗非鱼胶原蛋白的血液相容性良好。

关键词： i型胶原蛋白生物化学特性生物相容性免疫特性

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草鱼皮胶原蛋白的制备及性质研究

草鱼皮胶原蛋白的制备及性质研究

作者：张建忠南京农业大学

学位级别：硕士

本文研究了草鱼皮的预处理工艺条件，采用氢氧化钠中添加双氧水方法可以同时起到脱色、脱杂蛋白、脱脂肪的作用，以及其对胶原蛋白的溶解性的影响。提取关键参数—温度对胶原蛋白提取率及性质的影响;酸溶性胶原蛋白和酶溶性胶原蛋白的... 详细信息

本文研究了草鱼皮的预处理工艺条件，采用氢氧化钠中添加双氧水方法可以同时起到脱色、脱杂蛋白、脱脂肪的作用，以及其对胶原蛋白的溶解性的影响。提取关键参数—温度对胶原蛋白提取率及性质的影响;酸溶性胶原蛋白和酶溶性胶原蛋白的性质区别;草鱼皮和猪皮中Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白纯化及电泳鉴定。 1．不同浓度双氧水和氢氧化钠溶液处理草鱼皮，可以同时起到脱色、脱杂蛋白以及脱脂作用，氢氧化钠浓度越高，脱色速度越快，反应也越剧烈，双氧水浓度对胶原蛋白脱色无明显影响，在0．1 mol／L的氢氧化钠溶液含1％双氧水中只需6小时就可以完全脱去色素，在0．01 mol／L的氢氧化钠含1％双氧水溶液中，鱼皮浮在溶液表面色素渐退，无法看到黑色素体转变为淡黄色;0．01 mol／L-0．2 mol／L氢氧化钠能够有效的去除鱼皮中的非胶原蛋白，但是氢氧化钠浓度越高，可能导致胶原蛋白的降解在预处理溶液中;在20℃条件下，含1％HO 0．01mol／L NaOH溶液可以有效脱去脂肪，脱脂率约为70％。 2．在含1％双氧水不同浓度氢氧化钠处理鱼皮以后，对鱼皮胶原蛋白性质产生了影响。在20℃，1％过氧化氢，0．1 mol／L的氢氧化钠溶液中处理草鱼皮24小时后，即使在加酶的醋酸中，提取48小时，提取率也只有8％。表明胶原蛋白之间发生了交联，而在0．01 mol／L氢氧化钠或4℃条件下处理胶原蛋白，对胶原蛋白的提取率影响较小，所以只能选择浓度较低的氢氧化钠或在低温处理鱼皮。 3．温度和是否加酶对胶原蛋白提取率影响很大。在醋酸溶液或醋酸加酶溶液中，温度越高，提取率越高。相同温度条件下，醋酸加酶的溶液胶原蛋白提取率高于醋酸溶液。但是SDS-PAGE电泳显示，在30℃条件下，不论醋酸溶液或醋酸加酶溶液提取的胶原蛋白都发生了变性，胶原蛋白肽链发生了降解，在4℃和20℃提取的胶原蛋白三螺旋结构保持完整，具有完整生物学活性。 4．从草鱼皮中提取的酸溶性胶原蛋白和酶溶性胶原蛋白，紫外光谱分析，最大吸收峰都接近223 nm处;SDS-PAGE电泳图谱显示：酸溶性胶原蛋白含有较多β、γ和多聚体，平均分子量高于酶溶性胶原蛋白，草鱼皮ASC和PSC热变性温度分别为33．8℃、34．5℃，只比猪皮的热变性温度(37℃)低3℃左右。表明草鱼皮胶原蛋白在功能食品、医药、化妆品、制药等方面有潜在的应用。 5．在pH 7．4条件下，在不同盐浓度下分别沉淀草鱼皮和猪皮胶原蛋白，Ⅲ型胶原蛋白在1．8 mol／L盐浓度(pH 7．4)完全沉淀，此时绝大多数Ⅰ型胶原蛋白溶解在溶液中，最终在2．5 mol／L盐浓度(pH 7．4)的条件下沉淀。纯化得到不同盐浓度的沉淀样品，再用含尿素的SDS-PAGE电泳分析，可以将电泳迁移率相同的a1(Ⅰ)和a1(Ⅲ)区分开，电泳显示，草鱼皮样品中不含a1(Ⅲ)，猪皮中含有a1(Ⅲ)，表明草鱼皮仅含有Ⅰ型胶原蛋白，不含Ⅲ型胶原蛋白，猪皮主要含有Ⅰ型胶原蛋白同时也含少量的Ⅲ型胶原蛋白。

关键词：胶原蛋白草鱼皮性质 i型胶原蛋白 iii型胶原蛋白

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鲤鱼肌肉中胶原蛋白酶的分离纯化与性质分析

集美大学学报（自然科学版） 2013年第4期18卷 261-266页

作者：王诚张超群吴海龙黄身镰曹敏杰集美大学生物工程学院福建厦门361021 福建省高校水产科学技术与品安全重点实验室福建厦门361021 福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室福建厦门361021

利用明胶酶谱法,在鲤鱼肌肉中检测到了一种具有分解胶原蛋白能力的丝氨酸蛋白酶.通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel和Phenyl-Sepharose等一系列柱层析法,纯化得到了分子质量为70 ku,能够降解胶原蛋白的丝氨酸蛋白酶(Collagenolytic Serine ... 详细信息

利用明胶酶谱法,在鲤鱼肌肉中检测到了一种具有分解胶原蛋白能力的丝氨酸蛋白酶.通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel和Phenyl-Sepharose等一系列柱层析法,纯化得到了分子质量为70 ku,能够降解胶原蛋白的丝氨酸蛋白酶(Collagenolytic Serine Proteinase,CSP).性质分析表明,CSP在弱碱性条件下显示活性,最适温度为30℃;丝氨酸蛋白酶抑制剂特异抑制CSP的活性.CSP能有效地分解鲤鱼肌肉中的i型胶原蛋白,提示其可能在鱼体死后肌肉胶原蛋白降解中发挥着重要的作用.

关键词：丝氨酸蛋白酶纯化降解 i型胶原蛋白