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妊娠滋养细胞疾病中NF-κbp65和iκbα的表达及临床意义

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第10期28卷 1084-1087页

作者：琚玲丽刘惠宁蔡净亭徐静中南大学湘雅医院妇产科湖南长沙410008 解放军第163医院妇产科湖南长沙410003 湖南省肿瘤医院妇瘤四科湖南长沙410013

目的:分析核转录因子κb p65(NF-κbp65)和核转录因子κb抑制蛋白α(iκbα)在正常早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中表达的差异性,以及与妊娠滋养细胞肿瘤(GTN)(包括侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌)患者年龄及临床分期的关系。并探讨两者在妊娠滋... 详细信息

目的:分析核转录因子κb p65(NF-κbp65)和核转录因子κb抑制蛋白α(iκbα)在正常早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中表达的差异性,以及与妊娠滋养细胞肿瘤(GTN)(包括侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌)患者年龄及临床分期的关系。并探讨两者在妊娠滋养细胞肿瘤组织中的相关性。方法:采用免疫组化方法(SP法)检测20例正常早孕绒毛组织、30例葡萄胎组织、13例侵蚀性葡萄胎和15例绒毛膜癌中NF-κbp65和iκbα的表达情况。结果:NF-κbp65在正常早孕绒毛组与侵蚀性葡萄胎组、正常早孕绒毛组与绒毛膜癌组、葡萄胎组与侵蚀性葡萄胎组、葡萄胎组与绒毛膜癌组之间阳性表达率比较差异均具有统计学意义(P=0.013,0.018,P=0.026,0.035,Piκbα在正常早孕绒毛组与侵蚀性葡萄胎组、正常早孕绒毛组与绒毛膜癌组、葡萄胎组与侵蚀性葡萄胎组、葡萄胎组与绒毛膜癌组之间阳性表达率比较差异均具有统计学意义(Pbp65和iκbα在GTN中的表达与临床分期有关(P=0.043,0.042,Pbp65与iκbα在GTN中呈负相关(r=-0.403,P=0.034,Pbp65上调、iκbα的下降或缺失可能与滋养细胞肿瘤的发生发展以及侵袭、转移有关,NF-κbp65、iκbα两者在妊娠滋养细胞肿瘤组织中的表达呈负相关。

关键词：妊娠滋养细胞疾病 NF—κb iκbα 免疫组化

活体细胞内p53与iκbα的相互作用及其核穿梭过程

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生物化学与生物物理进展 2006年第9期33卷 838-845页

作者：李贤邢达陈小佳唐永红孙奋勇汪炬洪岸吴云霞华南师范大学激光生命科学研究所广州510631 暨南大学生物工程研究所广州510632

通过构建6种荧光融合蛋白质粒载体pECFP-iκbα、pECFP-iκbαM、pECFP-iκbα243N、pECFP-iκbα244C、pp53-DsRed和pp53/47C-DsRed,应用激光共聚焦显微镜,观测静止细胞内p53与iκbα及其各种突变体的定位特点及相互作用关系,直观地说... 详细信息

通过构建6种荧光融合蛋白质粒载体pECFP-iκbα、pECFP-iκbαM、pECFP-iκbα243N、pECFP-iκbα244C、pp53-DsRed和pp53/47C-DsRed,应用激光共聚焦显微镜,观测静止细胞内p53与iκbα及其各种突变体的定位特点及相互作用关系,直观地说明了活体细胞内的p53可与iκbα的C端的PEST区发生相互作用,p53的N端也参与了p53·iκbα复合体的形成.同时,实时观测外界刺激下细胞内DsRed/CFP两荧光比值的变化,探讨p53·iκbα复合体形成与解离的动态平衡,细霉素b(leptomycinb,LMb)作用下细胞内p53与iκbα的动力学分布、及核穿梭动态过程的意义.iκbα蛋白可能已经成为p53和NF-κb信号通路的一个交叉点,从而扩展了对于这两条重要信号通路调控的认识.

关键词： p53 iκbα 核转录因子-κb 荧光共振能量转移

Effect of mutated iKba transfection on multidrug resistance in hilar cholangiocarcinoma cell lines

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World Journal of Gastroenterology 2005年第5期11卷 726-728页

作者： Ru-FuChen Zhi-HuaLi Xian-HeKong Ji-ShengChen DepartmentofHepatobiliarySurgery TheSecondAffiliatedHospitalofZhongshanUniversityGuangzhou510120GuangdongProvinceChina DepartmentofOncology TheSecondAffiliatedHospitalofZhongshanUniversityGuangzhou510120GuangdongProvinceChina

AiM: To explore the expression effect of mutated iκbαtransfection on multidrug resistance gene (MDR-1) in hilar cholangiocarcinoma cells by inhibiting the activity of nuclear transcription factor-κb (NF-κb).METHODS: We used the mutated iκbα plasmid to transfect QbC939HCVC+ cells and QbC939 cells, and electrophoretic gel mobility shift assay (EMSA) to detect the binding activity of NF-κb DNA and the effect of the transfrecting mutated iκbα plasmid on multidrug resistance gene (MDR-1) in hilar cholangiocarcinoma cells and its expression protein (P-GP).RFSULTS: Plasmid DNA was digested by restriction enzymes Xbal and Hand Ⅲ, and its product after electrophoresis showed two bands with a big difference in molecular weight,with a size of 4.9 kb and 1.55 kb respectively, which indicated that the carrier was successfully constructed and digested with enzymes. The radioactivity accumulation of QbC939HCVC+and QbC939 cells transfected with mutated iκbα plasmid was significantly lower than that of the control group not transfected with mutated iκbα plasmid. Double densimeter scanning showed that the relative signal density between the tansfection group and non-transfection group was significantly different, which proved that the mutated iκbα plasmid could inhibit the binding activity of NF-κb DNA in hilar cholangiocarcinoma cells. Compared to control group not transfected with m iκbα plasmid, the expression level of MDR-1mRNA in the QbC939 and QbC939HCVC+ cells transfected with mutated iκbα plasmid was lower. The expression intensity of P-GP protein in QbC939 and QbC939HCVC+ cells transfected with mutated iκbα was significantly lower than that of the control group not transfected with mutated iκbα plasmid.CONCLUSiON: The mutated iκbα plasmid transfection can markedly reverse the multidrug resistance of hilar cholangiocarcinoma cells. interruption of NF-κb activity may become a new target in gene therapy for hilar cholangiocarcinogenesic carcinoma.

关键词： iκbα NF-κb MDR-1 P-GP DNA EMSA RNA

共表达iκbα-iRES2-CD40L胞外区双基因的腺病毒载体构建及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第5期26卷 416-419页

作者：丁小明牛晓丽薛武军李杨西安交通大学医学院第一附属医院肾病中心肾移植科陕西西安710061

目的:构建含有分泌型人CD40L胞外区(shCD40L)和iκb的双基因共表达的腺病毒载体。方法:分别扩增出目的基因片段shCD40L、iκb和iRES2,将目的基因进行连接,得到iκb-iRES2和shCD40L两个基因片段,将其分别导入pGEMT-easy载体进行亚克隆扩... 详细信息

目的:构建含有分泌型人CD40L胞外区(shCD40L)和iκb的双基因共表达的腺病毒载体。方法:分别扩增出目的基因片段shCD40L、iκb和iRES2,将目的基因进行连接,得到iκb-iRES2和shCD40L两个基因片段,将其分别导入pGEMT-easy载体进行亚克隆扩增,测序正确后,再将连接成功地两个目的基因片段与分别与载体pshuttle-CMV连接获得穿梭质pshuttle-CMV-shCD40L和pshuttle-cmv-iκb-iRES2,将穿梭质粒在DH5α感受态细胞中扩增。再与AdEasy-1-bJ5183菌同源重组,得到含有两个目的基因的腺病毒骨架,脂质体法转染293细胞,包装成具有感染能力的共表达iκb-iRES2-shCD40L腺病毒颗粒。PCR法对腺病毒的上清液中的表达差异进行鉴定,检测病毒滴度,并用其感染细胞PK15和293细胞以检验其安全性。结果:所构建的iκb-iRES2-shCD40L基因的重组腺病毒,经酶切和PCR鉴定正确,原代腺病毒的滴度达到6.561×1012pfu/L,PCR法从提取的病毒上清液中分别扩增出了是shCD40L(600bp)和iKba(700bp)的特异性片段,感染了腺病毒后的PK15细胞形态未见明显异常,但293细胞出现了明显的气球样变。结论:成功构建了共表达iκbα-iRES2-shCD40L双基因的腺病毒载体。

关键词：分泌型人CD40L胞外区 iκbα 重组腺病毒免疫耐受

复元胶囊及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R_1治疗骨关节炎的分子机制研究

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中国中药杂志 2011年第15期36卷 2113-2117页

作者：张文亮李荣亨王淑美周小莉钟玉重庆医科大学附属第一医院重庆400016 重庆电力医院重庆400030 重庆医科大学中医药学院重庆401331

目的:从尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)系统研究复元胶囊含药血清及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1治疗骨关节炎的分子机制。方法:原代培养兔软骨细胞,TNF-α诱导软骨细胞损伤,分为7组:空白组、模型组(TNF-α10μg.L-1组)、盐酸氨基葡萄... 详细信息

目的:从尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)系统研究复元胶囊含药血清及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1治疗骨关节炎的分子机制。方法:原代培养兔软骨细胞,TNF-α诱导软骨细胞损伤,分为7组:空白组、模型组(TNF-α10μg.L-1组)、盐酸氨基葡萄糖25 g.L-1组、20%复元胶囊含药血清组、淫羊藿苷12.5 mg.L-1组、三七皂苷R1 125 mg.L-1组、淫羊三七组(12.5,125 mg.L-1),RT-PCR检测各组uPA,NF-κb(P65)mRNA的含量,EMSA检测NF-κb(P65)与DNA结合的活性,Western检测iκbα水平。结果:复元胶囊含药血清及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1均可显著降低uPA,NF-κb mRNA表达量,降低NF-κb(P65)与DNA结合的活性,升高iκbα水平,与TNF-α组比较,统计学有显著差异(Pb(P65)的活性,升高iκbα水平,从而降低uPA的表达,保护软骨细胞免受炎症因子的损伤。

关键词：复元胶囊淫羊藿苷三七皂苷R1 软骨细胞 NF—κb(P65) iκbα uPA

香鱼(Plecoglossus altivelis)NFκb抑制因子α基因Paiκbα克隆及表达

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Zoological Research 2013年第4期34卷 399-405页

作者：张文青龚一富章丽李军刘晓丹宁波大学海洋学院浙江宁波315211

核转录因子κb抑制因子α(iκbα)是NFκb/iκb信号传导通路的重要成员,参与机体抗细菌感染等多种免疫反应,可通过蛋白质间的相互作用结合核转录因子NFκb,从而调控生物体多种免疫基因表达。该研究采用RACE技术从香鱼中克隆得到核转录... 详细信息

核转录因子κb抑制因子α(iκbα)是NFκb/iκb信号传导通路的重要成员,参与机体抗细菌感染等多种免疫反应,可通过蛋白质间的相互作用结合核转录因子NFκb,从而调控生物体多种免疫基因表达。该研究采用RACE技术从香鱼中克隆得到核转录因子κb抑制因子Paiκbα基因的cDNA全长序列(1341bp,Genbank Accession No.JN801027),开放阅读框ORF为936bp,编码311个氨基酸,5'非编码区为64bp,3'非编码区为341bp。生物信息学分析表明,香鱼iκbα蛋白的序列中包含5个保守的锚蛋白重复序列,N末端含有信号诱导蛋白,C末端含有PEST序列。同源性比对结果表明,香鱼iκbα蛋白与胡瓜鱼iκbα的同源性最高,为95%;其次是大西洋鲑、虹鳟、尼罗罗非鱼和鳜鱼等,同源性分别为76%、75%、70%和68%。系统进化树分析表明,香鱼iκbα蛋白与胡瓜鱼、虹鳟、尼罗罗非鱼、鳜鱼和大西洋鲑等亲缘关系最近。RT-PCR分析表明,Paiκbα基因在香鱼肝脏、肾脏、脾脏和鳃中表达水平较高,其次是肠、脑和肌肉,在心脏中表达极少。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophil)感染香鱼后,Paiκbα基因表达增强,感染24h达最大值,表明Paiκbα基因在香鱼受到嗜水气单胞菌刺激的免疫过程中可能发挥着重要作用。

关键词：香鱼 iκbα 克隆嗜水气单胞菌基因表达

需钙蛋白酶抑制剂i对LPS攻击的RAW264.7细胞中iκbα表达和细胞因子分泌的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第6期22卷 720-722页

作者：程晓刚粟永萍罗成基刘晓宏第三军医大学预防医学系全军复合伤研究所国家创伤烧伤复合伤重点实验室复合伤实验分室

目的:探讨需钙蛋白酶抑制剂i(Ci-i)对LPS攻击RAW264.7细胞后iκbα表达和细胞因子分泌的影响。方法:用Ci-i预处理RAW264.7细胞1h后,再用LPS攻击,分别用Westernblot和ELiSA检测RAW264.7细胞iκbα蛋白表达和TNF-α、iL-6的分泌。结果:Ci-... 详细信息

目的:探讨需钙蛋白酶抑制剂i(Ci-i)对LPS攻击RAW264.7细胞后iκbα表达和细胞因子分泌的影响。方法:用Ci-i预处理RAW264.7细胞1h后,再用LPS攻击,分别用Westernblot和ELiSA检测RAW264.7细胞iκbα蛋白表达和TNF-α、iL-6的分泌。结果:Ci-i预处理RAW264.7细胞后,可抑制LPS导致的iκbα表达降低。LPS攻击RAW264.7细胞后4h和8h,TNF-α和iL-6的分泌均增加,Ci-i和地塞米松(DEX)可抑制该效应,并具有协同抑制作用。结论:Ci-i和DEX可抑制LPS攻击后RAW264.7细胞中iκbα表达和炎性细胞因子分泌,从而有助于减轻细胞损伤。

关键词：需钙蛋白酶抑制剂i iκbα 地寨米松 TNF—α iL-6

Ad5F35嵌合腺病毒载体介导的突变性iκbα对白血病细胞凋亡的诱导作用

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中国实验血液学杂志 2011年第2期19卷 332-336页

作者：王光平王凯信红亚段朝军荆照正谭三勤齐振华陈方平中南大学湘雅医院血液科海军总医院儿科北京100037 中南大学医学实验中心湖南长沙410008

多种不同类型的白血病均存在持续活化的核转录因子κb(NF-κb),而抑制NF-κb活化诱导细胞凋亡有可能成为治疗白血病新的方法。本研究探讨修饰的5型腺病毒载体即Ad5F35嵌合腺病毒载体(Ad5F35 Vec)介导的突变性iκbα(iκbαDN)对白血病... 详细信息

多种不同类型的白血病均存在持续活化的核转录因子κb(NF-κb),而抑制NF-κb活化诱导细胞凋亡有可能成为治疗白血病新的方法。本研究探讨修饰的5型腺病毒载体即Ad5F35嵌合腺病毒载体(Ad5F35 Vec)介导的突变性iκbα(iκbαDN)对白血病细胞凋亡的作用。将携带缺失5'端1-70个氨基酸编码序列的人iκbαAd5F35-iκbαDN Vec转染HL-60细胞。采用流式细胞术、DNA结合试验、实时定量PCR和Western blot技术分别检测细胞凋亡、NF-κb DNA结合活性、iκbα,ciAP-2和xiAP的表达。结果显示,转染48小时后,转染Ad5F35-iκbαDN Vec细胞、空白载体Ad5F35-EGFP Vec细胞以及未转染细胞的凋亡率分别为(22.53±2.999)%,(6.08±2.464)%和(4.86±1.366)%,其差异具有显著意义(Ad5F35-iκbαDN Vec vs未转染:piκbαDNVec vs Ad5F35-EGFP Vec:pb DNA结合活性降低,iκbα表达增加,但ciAP-2和xiAP mRNA的表达降低。结论:Ad5F35 Vec能够有效介导iκbαDN cDNA在HL-60细胞的表达,iκbαDN可抑制HL-60细胞NF-κb DNA结合活性并诱导其凋亡。

关键词： Ad5F35载体 NF-κb iκbα 白血病

姜黄素阻断NF-κb信号通路促进食管鳞癌细胞凋亡的体外研究

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癌症 2008年第6期27卷 566-570页

作者：田芳宋敏许培荣刘红涛薛乐勋郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450052 郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052 郑州大学细胞生物学研究室河南郑州450052

背景与目的:活化的核转录因子-kappa b(nuclear factor-kappa b,NF-κb)信号通路参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。但在食管鳞癌中的作用尚不清楚。姜黄素具有抗感染、抗氧化等多种药理作用。本研究将探讨姜... 详细信息

背景与目的:活化的核转录因子-kappa b(nuclear factor-kappa b,NF-κb)信号通路参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。但在食管鳞癌中的作用尚不清楚。姜黄素具有抗感染、抗氧化等多种药理作用。本研究将探讨姜黄素是否能够通过阻断NF-κb信号通路对食管鳞癌细胞增殖、抗凋亡产生影响。方法:Western blot法检测EC9706和Eca109细胞中加入姜黄素(50μmol/L)培养不同时间后,piκbα和抗凋亡蛋白bcl-2的表达情况。在EC9706和Eca109细胞中加入姜黄素培养72h,流式细胞仪检测凋亡细胞情况。MTT法检测姜黄素单独或与5-FU联合对细胞增殖的影响。结果:Western blot的结果显示,在姜黄素作用下EC9706和Eca109细胞中piκbα和bcl-2蛋白的表达水平随着时间的延长逐渐下降。在单独使用姜黄素后,就可促进EC9706和Eca109细胞的凋亡(Piκbα的磷酸化阻断NF-κb信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加细胞对5-FU的敏感性。

关键词：食管肿瘤 EC9706细胞 Eca109细胞姜黄素 NF-κb 信号通路 iκbα bcl-2 凋亡