检索结果-南通市图书馆

Bcl-w蛋白在小肠腺癌组织中的表达及其沉默后对小肠腺癌hutu-80细胞凋亡的影响

中华肿瘤杂志 2012年第3期34卷 182-186页

作者：郭文娟金珠王爱英北京大学第三医院消化科 100191

目的探讨Bcl-W蛋白在小肠腺癌组织中的表达及沉默该蛋白表达对小肠腺癌细胞hutu-80凋亡水平的影响。方法采用免疫组化法检测Bcl—w蛋白在7例小肠腺癌和35例正常小肠组织中的表达。通过RNA干扰技术沉默Bcl-w蛋白在小肠腺癌细胞hutu-80中... 详细信息

目的探讨Bcl-W蛋白在小肠腺癌组织中的表达及沉默该蛋白表达对小肠腺癌细胞hutu-80凋亡水平的影响。方法采用免疫组化法检测Bcl—w蛋白在7例小肠腺癌和35例正常小肠组织中的表达。通过RNA干扰技术沉默Bcl-w蛋白在小肠腺癌细胞hutu-80中的表达，采用Westernblot法检测沉默效果，以流式细胞仪检测Bcl-w基因沉默后对hutu-80细胞凋亡的影响，并观察沉默该蛋白是否影响化疗药物氟尿嘧啶（5-Fu）的促凋亡作用。结果Bcl—w蛋白在小肠腺癌组织和正常组织中的阳性表达率分别为85．7％（6／7）和25．7％（9／35），差异有统计学意义（P=0．005）。Bcl—WsiRNA可以沉默小肠腺癌hutu．80细胞中Bcl—w蛋白的表达，但并不影响小肠腺癌hutu-80细胞的凋亡水平[转染组和未转染组的凋亡率分别为（12．4±2．2）％和（8．6±1．7）％，P〉0．05]。加入5-Fu后，5-Fu单独处理组细胞的凋亡率为（45．7±2．1）％，Bcl-WsiRNA联合5-Fu处理组细胞的凋亡率为（71．6±3．2）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Bcl—w蛋白在小肠腺癌组织中的表达升高可能促进了肿瘤的发生；在小肠腺癌hutu-80细胞中，单独沉默Bcl-w蛋白对hutu-80细胞的凋亡没有明显影响，但可促进5-Fu引起的细胞凋亡水平。

关键词：肠肿瘤 hutu-80细胞凋亡 Bcl-w蛋白 RNA干扰氟尿嘧啶

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

蓖麻毒蛋白诱导hutu-80细胞凋亡的比较蛋白质组学研究

蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞凋亡的比较蛋白质组学研究

引用

作者：栾世慧内蒙古民族大学

学位级别：硕士

蓖麻毒素是蓖麻籽中存在的一种能使核糖体失活的高效蛋白质,并由A、B链构成,A链是具有N-糖苷酶活性的活性链,导致蛋白质的合成受到抑制,引发细胞死亡;B链具有凝集素活性,能够识别和结合细胞表面含有半乳糖结构的受体,协助A链进入细胞。... 详细信息

蓖麻毒素是蓖麻籽中存在的一种能使核糖体失活的高效蛋白质,并由A、B链构成,A链是具有N-糖苷酶活性的活性链,导致蛋白质的合成受到抑制,引发细胞死亡;B链具有凝集素活性,能够识别和结合细胞表面含有半乳糖结构的受体,协助A链进入细胞。当一个蓖麻毒素分子进入到细胞内时,就可以使整个细胞的蛋白质合成停止最终导致细胞死亡。本研究通过比较蛋白质组学的研究手段,用蓖麻毒蛋白诱导人十二指肠腺癌细胞（hutu-80）,分析全蛋白差异表达的情况,为蓖麻毒蛋白在hutu-80细胞中的作用机理提供新的试验窗口。 1.本研究首先采用硫酸铵盐析法,从蓖麻种籽中提粗素,通过Sepharose4B柱亲和层析和Sephacryl S-200柱凝胶过滤层析对其进行纯化,经p-巯基乙醇处理,可见A链分子量为28KDa, B链的分子量为32KDa的蓖麻毒素。SDS-PAGE鉴定纯化后的蓖麻毒素达到了电泳纯。测定其浓度后,用获得的蓖麻毒蛋白对hutu-80细胞进行ICso试验。结果表明：细胞形态发生变化,而IC50为200ng/ml。 2.构建蓖麻毒蛋白诱导hutu-80细胞的凋亡模型,通过MTT排除试验、AO/EB染色、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,确定蓖麻毒蛋白诱导hutu-80细胞早期凋亡时相,提取细胞组分蛋白进行Western-blot分析,观察hutu-80细胞在凋亡过程中细胞色素c的迁移情况。结果表明：蓖麻毒蛋白对hutu-80细胞的增殖和生长有明显的抑制作用,IC50为200ng/ml,最佳攻毒时间为8h,同时hutu-80细胞的形态特征与生物化学特征也发生了一系列的变化,细胞核出现皱缩和破裂的情况,释放出致密颗粒状凋亡小体,细胞膜上的磷脂酰丝氨酸出现外翻,而细胞色素c随着蓖麻毒蛋白处理时间的增加,从线粒体易位到细胞浆逐渐显著。 3.用蓖麻毒蛋白浓度为200ng/ml,时间为8h处理细胞,分别提取正常组和处理组的hutu-80细胞全蛋白,iTRAQ同位素标记技术与质谱检测技术得到1660个蛋白信息,其中采用假设检验的方法对蛋白质定量结果进行差异分析,选取p-value＜0.05的蛋白质作为差异蛋白质,共的到94个差异蛋白质,这为以后研究蓖麻毒蛋白诱导hutu-80细胞凋亡机制提供了参考依据。

关键词：蓖麻毒蛋白比较蛋白质组学细胞凋亡 hutu-80细胞

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：